孔宁
- 作品数：24 被引量：41H指数：3
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划吉林省科技厅国际合作项目国家自然科学基金更多>>
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- 抑瘤素M对人脐带间充质干细胞增殖和成骨分化的影响
- 2020年
- 目的:探讨抑瘤素M(OSM)对体外培养的人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)增殖及成骨分化的影响,阐明OSM是一种有效的成骨诱导活性因子。方法:体外培养hUCMSCs,流式细胞术检测第3代hUCMSCs表面标志物;CCK-8法测定不同剂量(0.1、1.0和10.0μg·L^-1)重组人抑瘤素M(rhOSM)处理后hUCMSCs的增殖活性。将hUCMSCs分为对照组、经典成骨诱导剂组和不同剂量(0.1、1.0和10.0μg·L^-1)rhOSM组,于成骨诱导第4、7和14天,采用BCIP/NBT法进行碱性磷酸酶(ALP)染色并定量检测细胞中ALP活性,茜素红染色法检测钙结节的生成情况并半定量分析细胞矿化活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测hUCMSCs中Runt相关转录因子2(Runx2)和OCN mRNA表达水平。结果:hUCMSCs符合间充质干细胞(MSCs)鉴定标准。rhOSM处理hUCMSCs 72 h,与对照组比较,10.0μg·L^-1 rhOSM组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);处理96 h,与对照组比较,各剂量rhOSM组细胞增殖活性均明显降低(P<0.05),且各剂量rhOSM组组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。成骨诱导第4、7和14天,与经典成骨诱导剂组比较,各剂量rhOSM组细胞中ALP活性和Runx2 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与0.1μg·L^-1 rhOSM组比较,1.0和10.0μg·L^-1 rhOSM组ALP活性和Runx2 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与成骨诱导第7天比较,诱导第14天各剂量rhOSM组细胞中ALP活性和Runx2 mRNA表达水平略降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。成骨诱导第7、14和21天,与经典成骨诱导剂组比较,各剂量rhOSM组细胞矿化活性均明显升高(P<0.01);与0.1μg·L^-1 rhOSM组比较,1.0和10.0μg·L^-1 rhOSM组细胞矿化活性明显升高(P<0.05)。与经典成骨诱导组比较,各剂量rhOSM组OCN mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);成骨诱导第7、14和21天,与0.1μg·L^-1 rhOSM组比较,1.0和10.0μg·L^-1 rhOSM组细胞中OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05),具有时间-剂量依赖性。结论:rhOSM通过上调Runx2和OCN的表达及增加成骨细胞A
- 孔宁周余来张璐石毅石艳孙忠平邹颖刚
- 关键词：抑瘤素M脐带间充质干细胞成骨细胞增殖细胞分化
- GPRA基因rs324396位点单核苷酸多态性与儿童支气管哮喘的相关性研究被引量：2
- 2006年
- 目的探讨中国北方汉族儿童支气管哮喘与GPRA基因多态性的关系。方法采用PCR—RFLP方法检测，并分析118例儿童支气管哮喘患者和124例健康对照儿童GPRA基因多态性。结果GPRA基因rs324396位点3种基因型在病例组和对照组间差异有显著性（X^2=8．68，P〈0．05）；CT基因型与CC基因型在病例组和对照组间差异有显著性（X^2=7．08，P〈0．05），其OR为2．26（95％CI为1．23～4．15）；TT基因型与CC基因型在病例组和对照组间差异有显著性（X^2=6．06，P〈0．05），其OR为2．41（95％CI为1．19～4．89）；TT基因型与CT基因型在病例组与对照组间分布差异无显著性（X^2=0．039，P〉0．05）。病例组T等位基因的频率较对照组显著增高，其患哮喘的危险度是对照组的1．62倍（X^2=6．97，P〈0．05，OR95％CI为1．13～2．33）。结论GPRA基因rs324396位点的等位基因突变增加了中国北方汉族儿童支气管哮喘的发病危险，此相关性有待进一步的体内和体外功能学研究来证实。
- 韩宏志李波孔宁李善玉史杰萍宁宇方芳姚燕
- 关键词：哮喘基因儿童
- 人抑瘤素M在毕赤酵母中的高效分泌表达被引量：2
- 2008年
- 目的:在毕赤酵母中高效分泌表达重组人抑瘤素M(rhOSM)。方法:以人胚胎组织DNA为模板通过PCR技术获得hOSM基因,构建毕赤酵母真核表达载体pPICZαC-hOSM,电转化毕赤酵母菌株X-33,PCR法筛选阳性克隆,SDS-PAGE和Western blotting方法筛选能够稳定、高效分泌表达rhOSM的酵母工程菌。结果:经PCR法获得了hOSM基因,培养液上清经SDS-PAGE和Western blotting证实获得了相对分子质量约为28000的rhOSM,表达量为45mg·L-1。结论:毕赤酵母表达系统能够稳定、高效分泌表达rhOSM,摇瓶规模表达量为45mg·L-1。
- 孔宁牟旭鹏韩冬马杰陈伟莉颜炜群
- 关键词：分泌表达毕赤酵母
- 重组人碱性成纤维细胞生长因子在大豆毛状根中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的利用基因重组技术在大豆毛状根中表达hbFGF。方法将hbFGF基因克隆到pCambia1301载体,以大豆子叶节和下胚轴为外植体,通过发根农杆菌C58C1介导转入到大豆中。经潮霉素抗性筛选,PCR法检测hbFGF基因的整合。用Western blot印迹分析hbFGF的表达。结果阳性毛状根中整合并表达了hbFGF基因。结论克隆hbFGF基因并转染到大豆的毛状根中,在毛状根中表达。
- 陈伟莉范伟全张新民刘楠韦安慧孔宁牟旭鹏颜炜群
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子大豆发根农杆菌毛状根
- 嵌合抗原受体T细胞在肿瘤免疫治疗中的研究进展被引量：7
- 2016年
- 肿瘤的传统疗法（包括手术治疗、化学治疗、放射治疗等）取得了一定的成果,然而患者的生存率低、肿瘤复发和转移仍然是有待攻破的难题。与传统抗癌疗法不同,肿瘤免疫治疗的靶标并不针对肿瘤细胞和肿瘤组织,而是针对人体自身的免疫系统。其中,使抗原抗体的高亲和性和T细胞的杀伤作用相结合,构建基于肿瘤特异性的嵌合抗原受体（CAR）的T细胞免疫疗法（CAR-T）发展非常迅速,通过基因转导使T淋巴细胞表达这种CAR后，T细胞在体内能够特异性地识别肿瘤抗原、有效杀伤肿瘤细胞。
- 赵媛媛孔宁王毅
- 关键词：T细胞肿瘤免疫治疗
- 甲型流感病毒M2e与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达被引量：1
- 2010年
- 目的将甲型流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)基因与人血清白蛋白(HSA)基因融合,以构建高效分泌表达的毕赤酵母菌株。方法通过RT-PCR扩增HSA基因,构建pPICZα-HSA质粒,将人工合成的M2e序列与pPICZα-HSA质粒分别经BstBI和KpnI酶切消化后连接,构建真核表达载体pPICZα-HSA/M2e,线性化后电转化毕赤酵母X-33。用PCR法筛选Zeocin抗性阳性的克隆,SDS-PAGE和Western印迹法筛选高表达HSA/M2e菌株。结果经RT-PCR法克隆的HSA基因序列与GenBank登录的cDNA序列一致,构建的pPICZα-HSA/M2e真核表达载体,经电转化获得Zeocin抗性阳性的克隆。SDS-PAGE和Western印迹分析证实了甲醇诱导的培养基上清中含有HSA/M2e,分子量约为68kD。结论成功构建了分泌表达重组HSA/M2e融合蛋白的毕赤酵母菌株,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。
- 牟旭鹏韦安慧申茉函孔宁颜炜群
- 关键词：甲型流感病毒血清白蛋白毕赤酵母
- 重组人uPA_(17)-KPI大规模发酵及纯化工艺的建立
- 2010年
- 目的建立重组人uPA17-KPI(rhuPA17-KPI)毕赤酵母工程菌在80L发酵罐中的大规模发酵及纯化工艺。方法对工程菌表达rhuPA17-KPI的pH值进行优化。在摇瓶中制备rhuPA17-KPI工程菌种子2L,接种至80L发酵罐中,采用优化的pH值,补料分批培养方式对工程菌进行高密度发酵,控制和优化各种发酵条件,经甲醇诱导48h后结束发酵。将发酵液离心,经SP Sepharose XL阳离子交换层析和SourceTM 30 RPC反相疏水柱层析纯化。结果建立的发酵工艺为:控制发酵温度为28℃,pH值为5.5,溶氧值为25%～30%之间,在酵母细胞湿重达到190g/L时开始甲醇诱导表达,诱导30h,rhuPA17-KPI的分泌达高峰,为300mg/L发酵液。发酵上清经阳离子交换层析和反相疏水层析纯化后,获得纯度为95%以上的rhuPA17-KPI,产量为180mg/L,回收率为60%。结论已建立了rhuPA17-KPI毕赤酵母工程菌在80L发酵罐中的大规模发酵及纯化工艺,为其产业化及临床应用奠定了基础。
- 赵磊孔宁颜炜群周庆伟
- 关键词：毕赤酵母发酵纯化
- 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与儿童支气管哮喘的相关性被引量：3
- 2005年
- 目的探讨儿童支气管哮喘与亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677位点C→T多态性的关系。方法采用PCR和限制性内切酶片段长度多态性的方法对113例儿童支气管哮喘和131例健康儿童的MTHFR基因第677位点基因多态性进行研究。结果儿童支气管哮喘患者与对照组等位基因比较差异有显著性(χ2=6.69,P<0.05)。CC、CT、TT 3种基因型之间差异存在显著性(χ2=6.35,P<0.05)。结论MTHFR C677位点C→T的基因突变可能与儿童支气管哮喘的发生有关。
- 李波韩宏志李善玉史杰萍何海涛孔宁刘娅
- 关键词：哮喘基因
- 重组人抑瘤素M的表达、纯化及鉴定
- 目的研究重组人抑瘤素M(rhOSM)在毕赤酵母中分泌表达的条件及rhOSM的纯化方法。方法利用已筛选出来的rhOSM毕赤酵母高表达菌株,在实验室条件下,利用5 L摇瓶发酵表达rhOSM。对发酵液上清分别应用SP Seph...
- 孔宁周余来王毅宿晓云王芳丛中一苏曼曼侯宜颜炜群
- 关键词：发酵纯化
- 文献传递
- 实时定量PCR检测低剂量X射线对小鼠睾丸中CHOP和caspase-12 mRNA表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的通过检测低剂量X射线照射后小鼠睾丸中CHOP和caspase-12 mRNA表达的变化,在mRNA水平探讨内质网通路参与凋亡调控的可能。方法健康雄性昆明小鼠经过低剂量(0、0.050、0.075、0.100和0.200 Gy)照射后12 h和0.075 Gy照射后不同时间(0、3、6、12和24 h),应用实时定量PCR(real time quantitative PCR)检测小鼠睾丸中C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)和胱天蛋白酶-12(caspase-12)mRNA表达剂量与时程效应关系。结果 0-0.200 Gy X射线照射后12 h,小鼠睾丸中CHOP mRNA表达随剂量逐渐增高并一直维持较高水平,其中0.050和0.100 Gy组较0 Gy显著增高(P<0.05);caspase-12 mRNA表达随剂量逐渐增高,0.075和0.100 Gy组较0 Gy组显著增高(P<0.05,P<0.01)。0.075 Gy照射后0-24 h CHOP mRNA表达随时间延长逐渐增高,在24 h到达峰值,较0 h显著增高(P<0.05);caspase-12 mRNA表达在3和6 h稍有降低后,12 h到达峰值,较0 h显著增高(P<0.05),24 h时回降。结论低剂量X线照射诱导小鼠睾丸CHOP和caspase-12 mRNA表达具有剂量-时程-效应规律性,二者可能参与低剂量X线照射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的调控。
- 姜铁超韩宏志孔宁
- 关键词：睾丸C/EBP同源蛋白
