姜海霞
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：甘肃省科技攻关计划中国博士后科学基金甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 人朊蛋白基因的克隆表达及抗血清的制备
- 以人外周血液提取的总DNA为模板，PCR扩增人朊蛋白编码基因(PRNP)的ORF，克隆至pMD18T载体，构建重组质粒HoPRNP-T，用DNAstar软件与GenBank上发表的序列M13899进行同源性分析，结果发现...
- 姜海霞
- 关键词：基因克隆融合蛋白
- 文献传递
- 牛朊蛋白27-30基因的克隆与表达被引量：3
- 2007年
- 利用PCR技术,从含有牛朊蛋白(Prion protein,PrP)基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp-T中扩增出约420 bp的目的基因(PrP^(27-30)基因)。将PrP^(27-30)基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoR I和Not I进行双酶切,T4 DNA连接酶作用后,转化至E.coli JM109中,构建重组表达载体pPIC9K-boPrP^(27-30) pPIC9K-boPrP^(27-30)经限制性核酸内切酶Sal I线性化后电转至毕赤酵母GS115中,经G418筛选后得到高拷贝的重组菌株GS115/pPIC9K-boPrP^(27-30)。GW115/pPIC9K_boPrP^(27-30)经1.0%甲醇诱导后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明牛PrP^(27-30)基因在毕赤酵母细胞中获得表达,表达产物的分子量约为27 Ku。能够被单克隆抗体SAF-70识别。
- 路伟张鹏张杰刘永生卫广森陈豪泰姜海霞朱小玲
- 关键词：克隆
- 三种哺乳动物朊蛋白基因的克隆与分析被引量：5
- 2006年
- 以外周血液的总DNA为模板,运用PCR方法克隆了汉族人、秦川黄牛和甘肃土种绵羊的Prnp基因,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的3种哺乳动物的Prnp基因均位于1个单一的外显子内,与GenBank中登录的相应序列具有高度同源性,达99.0%。牛与绵羊Prnp基因同源性为97.3%,推导氨基酸序列同源性为96.5%。人Prnp基因与黄牛和绵羊Prnp基因的同源性分别为86.7%和87.1%,其氨基酸序列的同源性均为90.0%。3种Prnp基因均有富含G-C的重复区,编码的PrP蛋白均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPⅠ锚结合位点组成。基因型分析表明,秦川黄牛和甘肃土种绵羊可能存在感染海绵状脑病的风险。
- 张杰刘永生陈豪泰姜海霞路伟朱小玲谢庆阁
- 关键词：海绵状脑病朊蛋白基因朊病毒绵羊
- 秦川黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
- 2006年
- 目的制备及鉴定抗秦川黄牛成熟朊蛋白的单抗。方法用重组成熟朊蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,以间接ELISA方法筛选能够稳定分泌抗成熟朊蛋白的单抗的杂交瘤细胞株。以亲和层析法纯化腹水抗体,检测其Ig类和亚类、效价、相对亲和力以及特异性,并用基因片段表达作图法初步分析抗原表位。结果获得了能够稳定分泌抗牛成熟朊蛋白的杂交瘤细胞株N64,分泌的抗体属于IgG2a,腹水效价为1×105,相对亲和力为0.15μg/ml,Western blot表明该单抗具有较强的特异性。表位分析显示N64单抗仅与羧基端重组朊蛋白反应。结论抗牛成熟朊蛋白的腹水单抗N64效价高、亲和力和特异性强,可以作为疯牛病免疫诊断的核心试剂。
- 朱小玲刘永生张杰吴润陈豪泰姜海霞路伟谢庆阁
- 关键词：牛海绵样脑病单克隆抗体间接ELISA
- 牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析被引量：3
- 2007年
- 为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息,本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内,与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96.8%,推导氨基酸序列同源性为93.3%。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prnd的同源性均为80%,推导的氨基酸序列同源性均为76.3%。氨基酸一级结构分析显示3种Prnd编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明,3种Prnd编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。
- 张杰张鹏刘永生陈豪泰姜海霞路伟朱小玲谢庆阁
- 关键词：传染性海绵状脑病朊蛋白朊蛋白基因
- 人朊蛋白基因的克隆与原核表达被引量：7
- 2006年
- 以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入E．coli JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．6％,推导的氨基酸序列同源性为99．8％,将编码人成熟PrP的基因定向克隆到 pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化E．coli BL21(DE3),在37℃下用1．0 mmol／L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20％～25％．用Ni-NTA 树脂亲和层析纯化了表达产物．Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别．因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原．
- 姜海霞刘永生杨孝朴陈豪泰朱小玲张杰谢庆阁
- 关键词：朊蛋白基因克隆原核表达
