目的:探讨新发现的抑癌基因SRY盒包含基因30(SOX30)在结直肠癌中的表达及甲基化变化。方法:用逆转录PCR(RTPCR)检测结直肠癌细胞株(HCT8、HCT116和SW480)中SOX30 m RNA的表达,利用去甲基化药物5-Aza-Cd R处理结直肠癌细胞株72h后检测SOX30基因高甲基化与其表达调控的关系。应用甲基化特异性PCR(MSP)检测上述3株结直肠癌细胞株及54例结直肠肿瘤组织和10例癌旁组织SOX30基因的甲基化发生情况,通过硫化测序PCR(BSP)验证结直肠癌组织和癌旁组织SOX30基因的甲基化改变,并对甲基化情况与结直肠癌患者病理特征进行相关性分析。结果:SOX30 m RNA在上述3株结直肠癌细胞株中表达与对照组相比均较低,且均发生明显高甲基化;去甲基化药物处理上述3株细胞株后,SOX30 m RNA的表达明显得到恢复。SOX30基因在大部分结直肠癌组织中均呈现高甲基化状态,甲基化发生率为79.6%(43/54);而在相应的癌旁组织中甲基化检出率较低,仅为20%(2/10)。对结直肠癌患者中SOX30基因甲基化与其临床病理学资料进行相关性分析发现,SOX30基因高甲基化与患者的肿瘤病理分型显著相关(P=0.045),而与患者的性别、年龄、吸烟与否、TNM分期和Ducks分期无显著相关性(P均>0.05)。结论:SOX30基因在结直肠癌中发生明显高甲基化修饰改变,其基因表达水平明显下调,而且其甲基化修饰率与患者肿瘤病理分型相关,提示SOX30可能在结直肠癌的发生过程中起重要作用。
目的初步探讨TC2N基因对皮肤黑色素瘤(skin cutaneous melanoma,SKCM)发生的影响及其作用机制。方法使用人类蛋白质图谱(The Human Protein Atlas,HPA)和肿瘤基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析TC2N在SKCM中的表达及与临床病理特征的关系。利用人黑色素瘤A375构建TC2N基因的过表达细胞模型,采用CCK-8法检测TC2N在细胞增殖中的作用。利用TC2N基因敲除小鼠构建皮肤黑色素移植瘤模型,观察并测量移植瘤的生长,通过免疫组化测定Ki67在移植瘤组织中的表达,分析肿瘤细胞的增殖。此外,进行基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)探索TC2N表达与ERK/MAPK信号通路的相关性,并利用RT-qPCR和Western blot法检测相关基因CyclinD1、c-Myc、CDK2和CyclinE1在体内外的mRNA及蛋白表达水平。结果与正常皮肤组织比较,SKCM组织中TC2N的表达水平更高,且TC2N基因的高表达与SKCM患者的临床病理分期和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。体外细胞实验发现,过表达TC2N基因后,A375细胞的增殖能力显著增加(P<0.05)。敲除小鼠皮下移植瘤模型结果显示,与TC2N^(+/+)小鼠比较,TC2N-/-小鼠肿瘤质量和体积明显降低(P<0.05),提示TC2N基因敲除后显著抑制SKCM的生长。GSEA富集分析提示TC2N与MAPK信号通路显著相关(P<0.01),且TC2N基因与ERK/MAPK下游基因表达呈正相关(P<0.01)。体内外实验均发现,TC2N表达显著促进ERK与p-ERK表达,且影响ERK相关分子CyclinD1、c-Myc、CDK2和CyclinE1的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01)。结论TC2N基因可能通过激活ERK/MAPK信号通路促进皮肤黑色素瘤的生长。
