姜东君
- 作品数：12 被引量：19H指数：3
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省重大科技攻关项目黑龙江省研究生创新科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 抗牛病毒性腹泻病毒的中药单体
- 本发明涉及一种抗牛病毒性腹泻病毒的中药单体，所述的中药单体为大豆苷元、青蒿素、芹菜素和姜黄素中的任意一种。本发明通过分子对接技术将10种中药与BVDVNS5B进行分子对接，根据结合能打分，确定青蒿素、芹菜素、大豆苷元和姜...
- 朱战波邵百卉陈楠楠姜东君谢艺萌刘思雨刘宇张泽财周玉龙计红
- 金黄色葡萄球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合表达及其活性被引量：2
- 2014年
- 目的在大肠埃希菌中融合表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus.aureus,S.aureus)GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白,并检测其甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)活性。方法采用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白flic基因和S.Aureus GapC基因,通过overlap PCR将这两段基因拼接并克隆至载体pQE30a,构建重组表达质粒pQE30-flic-GapC,将重组表达质粒转化E.coli XL-blue,IPTG诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析试剂盒纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析,并检测其GAPDH活性。结果重组表达质粒pQE30-flic-GapC经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达产物相对分子质量约95 000,最佳诱导表达时间为5 h,主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的31.4%;纯化产物可与小鼠抗S.aureus全菌体多抗血清和抗鼠伤寒沙门菌全菌体多抗血清发生特异性反应,GAPDH活性为(0.337±0.019)。结论成功表达并纯化了具有较高生物学活性的flic-GapC融合蛋白,为S.aureus亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 赵达王鹤梁宏儒胡旭姜东君高佳滨尹辉陈为宏乔波朱战波
- 关键词：金黄色葡萄球菌鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白融合蛋白
- 牛传染性鼻气管炎的分离鉴定和灭活条件的优化被引量：3
- 2013年
- 从疑似牛传染性鼻气管炎病毒感染的牛鼻腔中分离出1株病毒,通过PCR方法和MDBK细胞病变观察对其进行鉴定,确定该分离株为牛传染性鼻气管炎毒株。通过对该毒株的增殖条件和甲醛灭活条件的优化研究,为制备牛传染性鼻气管炎细胞源灭活疫苗提供参考依据。结果表明该毒株接毒18 h后病变细胞达70%开始收毒,病毒液在0.2%的甲醛37℃灭活36 h灭活效果最好。
- 梁宏儒高佳滨李安陈为宏乔波尹辉胡旭赵达姜东君朱战波
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒PCR
- 金黄色葡萄球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门氏菌Flic融合蛋白的构建与免疫原性研究被引量：3
- 2014年
- 目的探讨金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)GapC蛋白与鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.typhimurium)鞭毛蛋白融合蛋白的免疫保护作用。方法将纯化的Flic-GapC融合蛋白背部皮下接种免疫小白鼠,间隔3周免疫两次。应用间接ELISA方法测定小鼠血清中IgG抗体滴度;在二次免疫后2周,分离小鼠脾脏淋巴细胞,进行淋巴细胞增殖实验,利用Elispot方法检测IFN-γ和IL-4特异性分泌细胞;在二免后3周,用S.aureus Wood46株对免疫小鼠进行腹腔注射攻毒,观察1周并记录小鼠死亡数目。结果融合蛋白能够诱导小鼠产生特异性的免疫应答,二免后14d血清中IgG抗体滴度达到最高(1∶64 000),淋巴细胞刺激指数、分泌IFN-γ和IL-4的细胞数与对照组相比升高(P<0.05),对S.aureus的保护率达到70%。结论 Flic-GapC融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可作为S.aureus的疫苗靶向进行深入研究。
- 赵达王鹤梁宏儒胡旭姜东君尹辉高佳滨陈为宏乔波朱战波
- 关键词：鞭毛蛋白融合蛋白免疫保护作用
- 锚定牛巴氏杆菌OmpH的大肠杆菌菌影的制备及免疫效力评价
- 目前巴氏杆菌商品化的疫苗多为灭活苗和弱毒疫苗,具有一定的免疫保护作用,巴氏杆菌菌株因血清型较多,交叉免疫保护力低;菌体灭活时,物理或化学因素可能会破坏菌体抗原决定簇的构象,影响免疫效果。而菌影是一种没有细胞浆和核酸的空细...
- 姜东君
- 文献传递
- 抗牛病毒性腹泻病毒的中药单体
- 本发明涉及一种抗牛病毒性腹泻病毒的中药单体，所述的中药单体为大豆苷元、青蒿素、芹菜素和姜黄素中的任意一种。本发明通过分子对接技术将10种中药与BVDVNS5B进行分子对接，根据结合能打分，确定青蒿素、芹菜素、大豆苷元和姜...
- 朱战波邵百卉陈楠楠姜东君谢艺萌刘思雨刘宇张泽财周玉龙计红
- 鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达及纯化被引量：1
- 2012年
- 对鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白FliC的基因进行克隆、鉴定和原核表达,为鞭毛蛋白佐剂作用的研究奠定基础。以鼠伤寒沙门氏菌8014菌株基因组DNA为模板,PCR扩增Flic基因,产物与T载体连接,经测序鉴定正确后与表达载体pQE30(+)连接构建重组表达质粒Flic-pQE30,将此重组质粒转化入表达宿主E.coli XL1-Blue菌株内抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以IPTG进行诱导后,表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。测序结果显示,FliC为完整的编码区基因1 485 bp,编码495个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为56 kDa。经SDS-PAGE分析表明,以37℃、1 mM的IPTG诱导5 h,表达效果最好,诱导产物是与理论值相符的56 kDa的融合蛋白。经western-blotting检测,表达的重组蛋白FliC可与小鼠抗鼠伤寒沙门氏菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的反应原性。成功进行了鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白Flic基因的克隆表达,为进一步研究其免疫佐剂作用奠定了基础。
- 王鹤梁宏儒胡旭赵达姜东君尹辉高佳滨陈为宏崔玉东朱战波
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白克隆
- 一种菌影载体的构建方法
- 本发明提供了一种菌影载体，所述菌影载体包含锚定基因E’、巴氏杆菌OmpH基因、裂解盒（pBV220-E从阻遏蛋白到终止子的全部序列）和质粒载体pET28a。所述菌影载体中的裂解盒（ci857-E-T1T2）独立存在于pE...
- 朱战波姜东君于立权崔玉东王鹤梁宏儒赵达胡旭高佳滨陈为宏尹辉乔波陈楠楠
- 文献传递
- 无乳链球菌GapC蛋白和鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合表达及纯化被引量：4
- 2013年
- 目的构建无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,S.agalactiae)gapC基因和鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimu-rium,S.typhimurium)fliC基因的融合基因gapC-fliC,并在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法应用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白fliC基因和无乳链球菌gapC基因片段,通过柔性肽(Gly4Ser)2编码序列将二者串联并克隆至质粒pQE-30上,构建重组原核表达质粒fliC-gapC-pQE30,转化E.coli XL1-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行Western blot分析及融合蛋白活性检测。结果重组表达质粒fliC-gapC-pQE-30经双酶切和测序证明构建正确;表达的融合蛋白FliC-GapC相对分子质量约95 000,表达量占菌体总蛋白的58%,主要以包涵体形式存在,且可与小鼠抗鼠伤寒沙门菌和抗无乳链球菌多抗血清发生特异性反应,具有较好的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性。结论成功构建了重组表达质粒fliC-gapC-pQE-30,并在E.coli XL1-Blue中表达了融合蛋白,为下一步动物免疫保护性试验的研究奠定了基础。
- 王鹤梁宏儒胡旭赵达姜东君尹辉高佳滨陈为宏崔玉东朱战波
- 关键词：鞭毛蛋白重组融合蛋白质类
- 牛产气荚膜梭菌α-ε毒素基因的融合表达及其纯化被引量：3
- 2015年
- 目的融合表达产气荚膜梭菌α毒素基因和ε毒素基因的融合基因α-ε,并进行纯化。方法利用PCR技术,从A型产气荚膜梭菌C57-8株基因组DNA中扩增出α毒素基因的部分基因片段,插入到质粒p ET28a-ε上,构建含α-ε融合毒素基因的表达质粒p ET28a-α-ε,转化至E.coli BL21(DE3)plys S感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化后,进行Western blot鉴定。结果重组质粒p ET28a-α-ε经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,与预期的基因序列重合率为99%。表达的重组蛋白相对分子质量约78 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的22.7%,纯度为91.2%,可与小鼠产气荚膜梭菌多抗血清特异性结合,具有良好的反应原性。结论成功构建了重组质粒p ET28a-α-ε,并在E.coli BL21(DE3)plys S中表达了重组α-ε融合蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,可作为预防牛肠毒血症基因工程亚单位疫苗的候选抗原。
- 尹辉赵达陈为宏高佳滨乔波陈楠楠胡旭梁鸿儒姜东君王鹤朱战波
- 关键词：产气荚膜梭菌Α毒素基因纯化
