为了确定γ-氨基丁酸B受体(gamma-aminobutyric acid B receptor,GABA B R)基因在异育银鲫(Carassius auratus gibelio)不同组织中的表达,本实验分别对异育银鲫不同组织中GABA B R1基因进行RT-PCR扩增,并进行了克隆和测序,在与GenBank基因库中已知GABA B R1序列进行同源性比对的基础上采用邻接法构建系统发育树,并进一步分析其在异育银鲫不同组织内的表达水平。经克隆获得异育银鲫GABA B R1基因CDS区序列383 bp,编码127个氨基酸。荧光定量PCR结果显示,GABA B R1基因在异育银鲫脑、肝、肾、心、肠、鳔、鳃、肌、尾鳍、脾、卵巢、精巢组织中均有表达,且在不同组织中的表达水平由高到低依次是:脑>尾鳍>精巢>心、肠、鳔>卵巢、脾、鳃、肌>肝、肾。本研究证实了GABA B R1基因在异育银鲫各组织中表达的广泛性,且有明显的组织特异性。
采用脑组织匀浆法和高效液相色谱法(HPLC),检测异育银鲫(Carassius auratus gibelio)体内不同浓度下阿维菌素(Avermectin,AVM)血脑屏障渗透性及其组织残留情况。结果显示,AVM在其3个半数致死浓度(24 h LC50:0.127 mg/L、48 h LC50:0.071 mg/L、96 h LC50:0.039 mg/L)及其安全用药浓度(0.003 9 mg/L)下,均能从异育银鲫脑组织中检测出AVM;其中24 h LC50浓度下脑中AVM含量最高,为(0.292±0.005)μg/g;并且各半数致死浓度之间脑中AVM含量差异均极显著(P<0.05)。结果表明,不同浓度条件下AVM均能渗透通过血脑屏障进入异育银鲫脑组织,其含量与AVM用药浓度呈正相关。另外,在安全用药浓度(0.003 9 mg/L)条件下,AVM在各组织中的浓度时间数据经DAS 3.0药物代谢动力学软件拟合后发现均符合非房室模型,其主要药代动力学参数大小关系表现为:(1)达峰时间(Tmax):肌肉<脑<肝<肾;(2)峰浓度(Cmax):肝>肾>肌肉>脑;(3)末端消除半衰期(T1/2Z):肝>脑>肾>肌肉;(4)药时曲线下面积(AUC):肝>肾>脑>肌肉。本研究结果可为研究鱼类血脑屏障、AVM神经毒性及其在水产养殖上的应用提供参考。
