周天鸿
- 作品数：263 被引量：514H指数：11
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 应用载体介导的RNAi技术抑制HCMV的UL49基因表达被引量：2
- 2005年
- 为了研究RNA干涉抑制HCMV UL49基因的作用,以pLXSN(U6启动子)为模板通过两步PCR的方法扩增含U6启动子的siRNA表达片段,并通过TA克隆将siRNA表达片段克隆到pMD18-T载体构建成siRNA表达质粒,同时以人巨细胞病毒AD169病毒株基因组为模板PCR扩增UL49基因,将其克隆到pEGFP-N1构建融合质粒pEGFP-UL49。通过脂质体介导将siRNA表达质粒和pEGFP-UL49质粒共转染人宫颈癌细胞系HeLa,在荧光显微镜下观察RNA干涉结果。通过这种方法得到具有介导RNA干涉的siRNA片段,为UL49基因沉默研究提供技术基础。
- 曾志锋李月琴唐冬生张欣王莹郭芬周天鸿
- 关键词：RNAI技术RNA干涉技术人巨细胞病毒基因表达载体介导
- Calpastatin通过TLR/NFkB信号调节人巨细胞病毒介导的炎症反应
- 已经发现钙蛋白酶(CAPNs)家族有15个成员,它们对体内100多种重要的蛋白质发挥功能性剪切作用,其中包括许多重要的细胞骨架蛋白和信号转导分子.CAPNs的活化依赖钙离子信号,其负调节则主要由CAPNs内源性抑制蛋白(...
- 单雪风Muthusamy MownishRethnabharathi Meenakshisundaram张水妹蔡智辉黄峙周天鸿
- 关键词：NFKB炎症反应
- 华支睾吸虫蛋白酶体α2新基因的生物信息学分析与克隆表达被引量：1
- 2009年
- 目的发现华支睾吸虫成虫蛋白酶体新基因,应用生物信息学方法预测其结构和功能,表达重组蛋白为进一步确定其功能特征奠定基础。方法通过华支睾吸虫成虫cDNA文库的大规模测序,获取全长cDNA序列,利用生物信息学软件ORFfinder,BLAST,Conserved Domains和ExPASy等识别华支睾吸虫蛋白酶体α2(CsPSMA2)新基因,分析其基因和编码蛋白结构,同源性比对并构建系统发育树。将CsPSMA2基因克隆到pGEX-4T-1原核表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定。结果确定了编码CsPSMA2的新基因并成功登录到GenBank(Accession NO.:EU223819)。该基因全长833bp,编码235个氨基酸,第5-232aa之间含有蛋白酶体α2全长结构域,理论分子量为26.0kDa,分子进化分析显示CsPSMA2的蛋白与日本血吸虫亲缘关系最近,重组质粒融合表达了带有GST标签的CsPSMA2蛋白。结论发现了华支睾吸虫蛋白酶体α2新基因,确定了其重要的功能域和结构特征,成功进行了该基因在大肠杆菌中的克隆表达。
- 杨光周天鸿李月琴荆春霞胡旭初余新炳
- 关键词：华支睾吸虫生物信息学克隆
- “分子生物学”教学中应用教育效果评价增强学生的自学能力被引量：2
- 1999年
- 在分子生物学课程教学过程中，利用考试、综述论文和课堂提问等多种形式组成教育效果评价体系，探讨应用该体系在调动学生课外学习积极性、培养增强学生自学能力方面的作用。阐述了这些形式的设计、实施和作用效果，认为适当运用教育效果评价体系，可以有效培育学生自学能力。
- 周天鸿
- 关键词：学生自学能力教育效果评价分子生物学
- 三种新的穿梭质粒pCC10、pCCT7和pST16的构建和性质研究被引量：1
- 1993年
- 利用大肠杆菌质粒pUC18、pTG206和金黄色葡萄球菌质粒pC194在体外构建3个嵌合质粒pCC10、pCCT7和pST16.3个新质粒均是大肠杆菌和枯草杆菌的穿梭质粒。它们在大肠杆菌中呈Ap^rCm^r型,在枯草杆菌中则为Cm^rAp^5型。其中pCCT7和pST16含有xylE基因,可作为启动子探测质粒。所有的新质粒都具有来自pUC18的多酶克隆位点,适合于在大肠杆菌和枯草杆菌中重组外源DNA以及比较它们的表达情况。
- 周天鸿李月琴刘飞鹏温晋
- 关键词：穿梭质粒DNA大肠杆菌
- 微小隐孢子虫LDH基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2010年
- 目的克隆微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum,Cp)南京株(NJ)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,测序并分析微小隐孢子虫NJ株CpLDH与其他隐孢子虫分离株LDH基因序列的差异。方法根据微小隐孢子虫已知LDH基因序列设计合成2对引物,应用巢式PCR技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增LDH基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,阳性克隆的重组质粒经PCR及双酶切鉴定后,用双脱氧链终止法对重组质粒中的插入序列进行测序,应用生物信息学方法分析CpLDH基因序列和其他物种LDH序列的同源性。结果巢式PCR扩增得到特异的CpLDH基因序列,经PCR及双酶切鉴定获得了正确的pMD18-T-CpLDH重组质粒。测序表明,NJ株微小隐孢子虫LDH基因全长966bp,编码322个氨基酸,该基因序列已登录GenBank,登录号为HM001298。序列分析表明,我国微小隐孢子虫NJ株与国外分离的Iowa II株LDH基因编码的氨基酸序列具有98%的同源性。结论成功克隆了微小隐孢子虫NJ株LDH基因;序列测定及同源性分析表明,微小隐孢子虫NJ株在LDH酶关键结构位点存在突变。
- 郭志云杨光荆春霞付芹芹孙小会王穗湘李月琴余新炳周天鸿
- 关键词：微小隐孢子虫乳酸脱氢酶巢式PCR生物信息学
- 扩增引进限制性酶切位点技术检测CYP2C9基因的多态性被引量：1
- 2006年
- 建立了一种简便、快速、准确的检测CYP2C9基因Arg144Cys位点和Ile359Leu位点多态性的新方法.该方法采用与模板具有1个碱基错配的引物通过PCR在扩增产物中引进限制性酶切位点,即扩增引进限制性酶切位点(amp lification-created restriction sites,ACRS),其中通过上游引物在扩增Arg144Cys位点的片断中引入AvaⅡ切点,使得野生型基因CYP2C9*1和突变型基因CYP2C9*2的PCR产物中分别含有2个和1个AvaⅡ切点;通过下游引物在扩增Ile359Leu位点的片断中引入MvaⅠ切点,使得野生型基因CYP2C9*1和突变型基因CYP2C9*3的PCR产物中分别含有1个和2个MvaⅠ切点.将来自Arg144Cys位点和Ile359Leu位点的PCR产物各取一份测序,表明错配碱基成功引入PCR产物中.将包含Arg144Cys位点的PCR产物用AvaⅡ消化,将包含Ile359Leu位点的PCR产物用MvaⅠ消化,然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染进行基因分型.由于野生型基因和突变型基因的PCR产物中都至少含有1个酶切位点,能完全避免因限制性核酸内切酶失活或酶切不完全而导致的基因分型错误.
- 何震宇杨红李月琴周天鸿
- 关键词：多态性聚合酶链反应
- 基因体外随机突变的两种方法的研究被引量：8
- 2000年
- 引导蛋白质功能进化常用的方法是模拟和加速蛋白质基因自然重组的进程 ,即在蛋白质的基因中引进随机突变。因此 ,蛋白质基因体外随机突变的方法影响着引导蛋白质功能进化的效果。本文描述两种简单而有效的基因体外随机突变发生方法。一种是化学诱变法 :将蛋白质基因用1.0mol/L硝酸钠在室温下处理1h,然后将突变基因插入质粒 ,导入大肠杆菌中表达 ;另一种方法是延伸诱变法 :将10个随机氨基酸短肽基因连接到蛋白质基因上 ,使蛋白质C末端连接随机短肽 ,通过增大蛋白质分子来达到延伸蛋白质序列空间的目的。来自嗜热脂肪芽孢杆菌的过氧化氢酶I基因用这两种方法进行了随机突变 ,获得了大量突变体酶基因。通过对突变体酶基因表达产物性质变化的测定 ,证明这两种基因诱变方法能够有效地诱发基因的随机突变。
- 李弘剑张毅周天鸿李月琴
- 关键词：定向进化蛋白质随机突变
- 小鼠RHOX5蛋白两种截短型突变体的原核表达及其与MDFIC互作的鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的:表达和纯化两种小鼠RHOX5蛋白的截短型突变体,确定完整的RHOX5蛋白及其两种截短型突变体与MDFIC蛋白结合的能力。方法:生物信息学分析小鼠同源异型框蛋白RHOX5的cDNA序列,分别对RHOX5的两种截短型片段RHOX5 N和RHOX5 C进行PCR、分别扩增RHOX5的两种截短型片段RHOX5 N和RHOX5 C并将其克隆至pGEX4T3原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒分别转化大肠杆菌RosettaTM2(DE3)菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione-Sepherase 4B颗粒对融合蛋白进行小批量亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳分离目标蛋白,确定融合蛋白的表达。进行GST-pull down实验,检测完整的RHOX5蛋白及其两种截短型突变体与MDFIC蛋白结合的能力。结果:在大肠杆菌RosettaTM2(DE3)中有效地实现了GST-RHOX5、GST-RHOX5 N和GST-RHOX5 C 3种融合蛋白的可溶性表达;经Glutathione Sepherase 4B颗粒亲和纯化后,获得了纯化后GST融合蛋白;GST-pull down实验证实,含有homeodomain的RHOX5蛋白和RHOX5C截短型突变体可以与MDFIC蛋白相结合,而RHOX5N截短型突变体则丧失了与MDFIC蛋白结合的能力。结论:实现了RHOX5及其两种截短型突变体的原核表达和纯化,证实RHOX5蛋白的homeodomain结构域是其与MDFIC结合的关键部位。
- 郭芬李实骞欧淑芳初彦辉李月琴张欣周天鸿
- 关键词：原核表达和纯化
- 异基因造血干细胞移植后人巨细胞病毒感染临床毒株UL54基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2005年
- 目的 研究异基因造血干细胞移植(AlloHSCT)后感染人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株UL54基因的克隆与鉴定。方法 从异基因造血干细胞移植后感染HCMV的患者体内分离出HCMV临床毒株,根据GenBank提供的实验室标准病毒株HCMVAD169UL54基因DNA全序列及有关文献,从该临床毒株DNA中扩增分离出UL54基因片段,并克隆入pEGM3Z载体。对重组体pEGM3Z UL54进行测序鉴定,并进行初步的序列分析。结果 从临床病毒株中扩增出约3728bp的片段,克隆产物经琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定,证实为HCMVUL54基因,其序列保守区域与GenBank报道AD169基本一致,但在第519、618、723、910、1188、1641、2070、2278、2279、2442、3140等11个位点发生碱基突变,涉及到编码氨基酸C304R、T760N、Y1047C、R1054K等位点发生改变,其中T760N为UL54保守区域改变。结论 成功克隆出AlloHSCT后感染野生型人巨细胞病毒的UL54基因,初步的序列分析证实其存在11个碱基发生突变,并导致编码产物4个氨基酸位点发生改变。
- 田传军李月琴王波叶铁真张纯青苏运贞何华坤周天鸿
- 关键词：异基因造血干细胞移植人巨细胞病毒
