刘翠翠
- 作品数：16 被引量：42H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家肉牛牦牛产业技术体系项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 牛巴贝斯虫DXS基因的克隆和真核表达被引量：1
- 2014年
- 【目的】顶质体是存在于包括疟原虫和巴贝斯虫在内的顶复门寄生虫的一种细胞器,在病原体中,它主要承载类异戊二烯前体和脂肪酸合成途径,异戊二烯五碳结构是有机体合成多种化合物的结构基础,对有机体生命活动至关重要,例如,在哺乳动物中成为胆固醇和类固醇激素的基本结构,在植物中参与合成类胡萝卜素。且存在于顶质体的类异戊二烯前体合成途径对于病原体的生命活动至关重要且不存在于人类和哺乳动物机体,这使其成为近年来人们研究抗原虫药物的焦点。有学者发现利用特异性阻断类异戊二烯代谢途径的药物可治疗疟疾。1-脱氧-5-磷酸D-木酮糖合成酶(DXS)为该途径中的第一个限速酶。因此,针对牛巴贝斯虫的1-脱氧-5-磷酸D-木酮糖合成酶dxs基因进行克隆和序列分析,并对其进行真核表达和活性检测,以期获得具有活性的1-脱氧-5-磷酸D-木酮糖合成酶,为进行针对该酶的特异性抑制剂的筛选奠定基础。【方法】首先采用反转录PCR技术从牛巴贝斯虫陕县株总RNA中扩增出DXS基因的全长cDNA,并对其进行克隆测序,对测序结果进行序列分析,将阳性克隆亚克隆至带荧光标签的真核表达载体,利用脂质体转染法将重组真核表达质粒转染至Hela细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染细胞的表达情况,消化收集转染细胞,通过超声破碎后采用Western blot技术对DXS蛋白的表达情况进行检测,结合G418压力筛选以及有限稀释的方法对转染阳性细胞进行筛选,获得阳性单克隆细胞。在体外建立DXS酶反应体系,并利用液相质谱联用技术对表达产物的体外活性进行检测。【结果】扩增得到的DXS基因全长共2 061 bp,共编码686个氨基酸,与GenBank上T2Bo株相应基因相似性达到98.0%。利用生物信息学方法对该蛋白质的二级结构进行分析发现,该酶具有3个结构域,分别是焦磷酸硫胺素结合区域;�
- 王婧李冰刘翠翠夏吉鹏张继瑜
- 关键词：真核表达
- 牛巴贝斯虫lytB基因的克隆与序列分析
- 2014年
- 为了对牛巴贝斯虫lytB基因进行克隆与序列分析,试验以兰州株牛巴贝斯虫lyt B基因组为模板进行PCR扩增,将扩增得到的特异性产物克隆到p GEM-T Easy载体上,并对其进行PCR检测、酶切鉴定及序列测定分析。结果表明:试验克隆得到的864 bp基因片段与Gen Bank收录的牛巴贝斯虫lyt B核苷酸序列同源性为97.8%。说明试验成功克隆出牛巴贝斯虫lyt B基因,与Gen Bank收录的牛巴贝斯虫lyt B核苷酸序列具有高度的同源性。
- 刘翠翠王婧张继瑜
- 关键词：牛巴贝斯虫克隆PCR检测酶切鉴定
- 福氏志贺菌2型多重PCR检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 为构建一种快速、高效、特异性强的检测与鉴定福氏志贺菌的多重PCR方法,本试验以不同血清型志贺菌中的特有基因ipaH、gtrⅡ、gtrⅩ和R002为扩增目标来设计相对应的引物,在同一PCR体系中对福氏志贺菌进行检测。通过一系列探索及对反应条件的优化调整,最终建立了可在多种细菌中快速检测出福氏志贺菌2型(2a和2b)的方法。结果表明,应用多重PCR可快速、高效、准确的对福氏志贺菌进行验证和鉴别,对于预防实验室菌种污染和志贺氏菌病的临床诊断与治疗有着重要意义。
- 朱阵王婧张继瑜魏小娟周绪正郭肖刘翠翠
- 关键词：多重PCR福氏志贺菌引物
- 细菌非编码小RNA的研究与展望被引量：2
- 2015年
- 细菌非编码小RNA（sRNA）是近年来在原核生物体内发现的长度在40∽500 bp的RNA。sRNA在基因组中被转录,但自身不能编码蛋白质,一般需要Hfq协助,在转录后水平与mRNA结合,影响mRNA的稳定性和翻译,从而调控生命活动,是细菌代谢、群体感应、适应环境、应激反应及毒力基因表达的重要调节因子。目前,各类细菌中发现的sRNA超过150种,研究方法主要有传统的实验室检测分析法和基于生物信息学的预测法。
- 朱阵刘翠翠王婧张继瑜魏小娟邢守叶
- 关键词：基因组转录HFQMRNA
- 牛巴贝斯虫病的防治及发展现状
- 巴贝斯虫病广泛存在于热带和亚热带国家,给畜牧业造成严重的经济损失,本文就目前对于牛巴贝斯虫病的预防和控制现状以及研究现状进行综述.分别从对传播媒介的控制,抗巴贝斯虫病的疫苗应用及其研发现状,治疗巴贝斯虫病的药物应用和研发...
- 王婧刘翠翠朱阵张继瑜
- 关键词：牛巴贝斯虫病传播媒介免疫保护化学治疗
- 文献传递
- 非编码RNA与细菌耐药被引量：1
- 2014年
- 细菌非编码RNA是一类新发现的基因表达调控因子,通过与靶mRNA配对,导致mRNA翻译和稳定性的变化,从而影响细胞的各种生理功能,如个体发育、翻译激活与抑制、细菌毒性等,而且一个单独的非编码RNA就能调控大量基因并对细胞生理产生深远影响。近年来诸多研究证实,非编码RNA与细菌耐药性也存在一定的关系。我们对此进行简要综述,为细菌耐药性的研究奠定基础。
- 刘翠翠魏小娟周绪正李冰牛建荣王婧朱阵张继瑜
- 关键词：非编码RNA抗生素耐药性
- 启动子结构和功能研究进展被引量：17
- 2014年
- 转录起始是一种最重要的表达调节方式,通过多种蛋白质与启动子的配位结合起始转录,参与基因的表达调控过程。而启动子作为基因表达调控的重要顺式作用原件,在原核和真核生物中均存在。对核心启动子结构特征中多种保守顺式调控原件及基本转录因子的结构和功能进行了阐述。
- 王婧李冰刘翠翠朱阵张继瑜
- 关键词：启动子顺式作用元件转录因子
- 牛巴贝斯虫DXS酶的真核表达及产物活性的鉴定
- [目的]本文对牛巴贝斯虫的1-脱氧-5-磷酸D-木酮糖合成酶dxs基因进行克隆和序列分析,并进行真核表达和产物活性检测.[方法]采用反转录PCR技术从牛巴贝斯虫陕县株总RNA中扩增出DXS基因的全长cDNA,并构建真核表...
- 王婧李冰刘翠翠周绪正张继瑜
- 关键词：真核表达
- 抗巴贝斯虫药物的研究进展被引量：12
- 2013年
- 巴贝斯虫病广泛存在于热带和亚热带国家,给畜牧业造成严重的经济损失,目前对于巴贝斯虫病的治疗尚无特效药,作者就近年来治疗巴贝斯虫病的药物研究现状进行综述。常用的较为有效的药物咪唑苯脲对肝功能具有损伤作用,阿托伐醌和阿奇霉素联用可造成寄生虫细胞色素b基因突变,且复发感染和寄生虫对药物产生耐药性较为严重。对于抗巴贝斯虫的化合物开发主要集中在噻唑和咪唑等杂环化合物及其衍生物等。利用分子生物学的方法寻找寄生虫中适当的靶基因并进行其颉颃剂的研究取得了一定的效果,另外还有一些试验结果显示部分传统药物对于抗巴贝斯虫有效。
- 王婧周绪正李冰魏晓娟范颖刘翠翠张继瑜
- 牛巴贝斯虫DXR酶的结构特征分析
- 2013年
- 利用反转录PCR方法扩增牛巴贝斯虫陕县株DXR基因,对其推导氨基酸序列进行生物信息学分析。研究牛巴贝斯虫DXR酶的结构,并探讨其是否可以作为磷胺霉素的作用靶点。结果表明:该基因编码框长度为1 152bp,编码383个氨基酸,与NCBI上公布的美国牛巴贝斯T2Bo株DXR的相似性为97.4%。同源模建表明,DXR酶的三维结构同恶性疟原虫的三维结构相似,与磷胺霉素结合位点氨基酸具有保守性。
- 王婧李冰刘翠翠张继瑜
