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1型糖尿病患者外周血滤泡调节性T细胞、调节性B细胞和调节性浆细胞的变化特点: 2020年; 目的探讨1型糖尿病患者外周血滤泡调节性T细胞(Tfr)、调节性B细胞(Breg)和调节性浆细胞(Preg)的变化特点.方法将2018年6月至2019年10月来我院就诊的30例1型糖尿病初治患者分为治疗前组(给予胰岛素治疗前)和治疗后组(胰岛素治疗血糖控制达标后第7天),同时选取同时期的30名健康志愿者作为对照组.采用流式细胞术检测B细胞、Breg、滤泡辅助性T细胞(Tfh)、Tfr、浆细胞和Preg的比例;采用ELISA法检测外周血血清中白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-21(IL-21)的浓度.结果治疗前组的B细胞、Tfh和浆细胞比例均显著高于对照组,Breg和Tfr的比例显著低于对照组(P<0.05);治疗后组B细胞、Tfh和浆细胞的比例均低于治疗前组,Breg和Tfr的比例显著高于治疗前组(P<0.05);各组Preg的比例无显著差异(P>0.05).治疗前组的IL-21浓度显著高于对照组,IL-10浓度显著低于对照组(P<0.05);治疗后组的IL-21浓度显著低于治疗前组,IL-10浓度显著高于治疗前组(P<0.05).结论 1型糖尿病患者体内体液免疫处于激活状态,机体体液免疫抑制因素显著下降,治疗后复又升高,恢复至相对正常水平.; 李蕾康志强刘红梅王欢欢高慧桢李清楚; 关键词：1型糖尿病免疫调控调节性B细胞

hTERT片段真核表达质粒的构建被引量：1: 2004年; 目的 :构建人端粒酶逆转录酶 (hTERT)片段的真核表达质粒 ,方法 :从肿瘤组织中提取总RNA ,采用RT PCR法扩增hTERT基因并克隆入PGEM TEasy载体中 ,然后再亚克隆于pcDNA3.1真核表达载体 ,用PCR扩增及限制性酶切法筛选重组真核表达质粒 ,并以DNA测序鉴定。结果 :PCR扩增及限制性酶切法证实重组真核表达质粒的构建成功。测序表明 ,hTERT基因片段与GenBank公布的相应基因同源性比较 ,核苷酸序列的同源性为 98.73% ,氨基酸序列的同源性为 99.6 8%。结论 :成功构建了hTERT真核表达质粒。; 刘红梅赵国强杨胜利; 关键词：HTERT 克隆

人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建被引量：3: 2005年; 中图分类号Q782摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法:用RTPCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEMTEasy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoRⅠ酶切获取目的片段,并与EcoRⅠ酶切过的pGEX4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega2.0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX4T1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Westernblot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果:PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98.73%,氨基酸序列同源性为99.68%。Westernblot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28.4%。结论:成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。; 张巧赵国强刘红梅宫亚欧丁兰萍薛乐勋杨胜利; 关键词：人端粒酶逆转录酶原核表达载体重组质粒

pcDNA3．1-hTERT真核表达载体的构建及其抗肿瘤效应被引量：1: 2008年; 目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)真核表达载体pcDNA3.1-hTERT,并观察其对荷瘤小鼠的抗肿瘤效应。方法:用RT-PCR方法扩增出带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEM-TEasy克隆载体连接,筛选出阳性克隆,酶切获得目的片段,与pcDNA3.1载体连接,构建pcDNA3.1-hTERT表达载体。将真核表达载体pcDNA3.1-hTERT注射移植性H22肝癌模型C57BL/6小鼠,并设PBS组及转染空质粒pcDNA3.1组,观察3组的抗肿瘤效应。结果与结论:成功构建pcDNA3.1-hTERT真核表达载体。该载体中的hTERT基因片段全长为951 bp,可编码相对分子量为37 000、由317个氨基酸构成的多肽。该基因片段与GenBank公布的相应基因进行同源性比较,核苷酸序列的同源性为98.73%,编码产物的氨基酸序列的同源性为99.68%。该真核表达载体免疫荷瘤小鼠后,pcDNA3.1-hTERT组肿瘤生长受到抑制,且该组生存期分别长于PBS组及pcDNA3.1组(P<0.05);pcDNA3.1-hTERT组的IL-2、IFN-γ细胞因子水平也均高于PBS组与pcDNA3.1组(P<0.05)。提示该真核表达载体在受试动物体内可有效地诱导特异性抗肿瘤免疫应答。; 张巧钱丽丽刘红梅赵国强宫亚欧丁兰萍杨胜利; 关键词：人端粒酶逆转录酶荷瘤小鼠抗肿瘤免疫应答

pcDNA3.1-hTERT表达载体构建及其抗肿瘤免疫效应研究: 张巧刘红梅钱丽丽杨胜利赵国强宫亚欧丁兰平; 该项目利用分子克隆技术和基因重组技术，从人肝癌细胞克隆出hTERT基因，以pcDNA3.1为载体，成功构建pcDNA3.1-hTERT重组质粒。通过C57BL/6小鼠H22肝腹水瘤荷瘤模型，观察了pcDNA3.1-hTE...; 关键词：; 关键词：HTERT PCDNA3.1 抗肿瘤免疫

hTERT重组质粒的构建及其表达: 端粒酶维持线形染色体的端粒末端结构的完整，防止染色体的缩短及和其它染色体的融合。有资料表明超过85％的肿瘤细胞表达端粒酶活性，而在正常组织中很少表达。人类端粒酶主要包括3种成分：人端粒酶RNA成分/(hTR/)，人端粒酶...; 刘红梅; 关键词：端粒酶逆转录酶重组质粒克隆表达; 文献传递

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刘红梅