刘方
- 作品数：7 被引量：21H指数：3
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省高校科技创新团队支持计划国家自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 20个红花品种资源的ISSR分析被引量：2
- 2014年
- 目的：利用ISSR标记技术分析国内20个主要红花品种遗传多样性，为红花种质资源选育提供参考资料．方法：选用ISSR分子标记法对不同地理区域的20个红花品种基因组DNA进行PCR扩增．结果：20个ISSR引物共产生382条扩增带，其中多态性带366条，多态性条带比例为95．42％．10个品种间的遗传相似系数分布在0．6152～0．7906之间，说明不同红花品种间遗传多样性较为丰富．聚类分析结果表明，利用ISSR技术可将来自不同地区的20个红花品种分为5个主要类群．其中，杞县刺红花单独为一类群．其余四个类群均未表现出品种遗传多样性与地理分布的相关性．
- 高武军刘方高琳琳李书粉邓传良卢龙斗
- 关键词：红花ISSR
- 日本沼虾含硒谷胱甘肽过氧化物酶全长克隆及表达分析被引量：6
- 2012年
- 为探讨日本沼虾(Macrobrachium nipponense)的免疫机制及含硒谷胱甘肽过氧化物酶(Se-GPx)在甲壳动物解毒和免疫应激反应中的作用,本文采用RACE法克隆了日本沼虾Se-GPx cDNA全长,其cDNA全长为908 bp,5′-UTR的长度为91 bp,3′-UTR长为256 bp,包括1个保守的硒代半胱氨酸插入序列(SECIS)和1个polyA尾,开放阅读框长度为561 bp,编码由186个氨基酸组成的多肽,其中,第39个氨基酸为TGA编码的硒代半胱氨酸。同源性和相似性分析显示日本沼虾的Se-GPx在甲壳动物中与罗氏沼虾相似度最高,在脊椎动物中与GPx1和GPx2家族的相似度比较高。日本沼虾Se-GPx基因在血细胞、肝胰腺、肌肉、卵巢、表皮以及大颚器官中都有表达,尤其在血细胞中表达量相对较高。用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激后3h和6h,血细胞Se-GPx基因表达量显著升高。结果表明,日本沼虾Se-GPx作为一种重要的抗氧化酶,在维护组织正常功能方面及免疫应激反应中发挥重要作用。
- 王雪参王文锋刘方宁黔冀
- 关键词：日本沼虾全长克隆
- 玉米性别决定基因TASSELSEED2及其同源基因的分子进化特征
- 2014年
- TS2是最早在玉米中发现的性别决定基因,但是在其他的单性花或者两性花的被子植物中其同源基因是否也与花的性别形成有关以及其进化特征仍不清楚.以玉米性别决定基因TASSELSEED2(TS2)为检索序列,通过BLAST搜索得到21个测序植物物种的27个TS2同源基因,并利用生物信息学和比较基因组学方法详细分析了这些TS2基因的序列特征、进化关系及选择压力.结果表明,植物TS2基因具有3种基因结构类型、2种典型的功能结构域和7种保守基序组织模式,且单性花和两性花植物间并没有表现出特异性.系统进化树显示,以江南卷柏TS2蛋白为系统树基部,除了PtrTS2b、SlaTS2、CsaTS2和CpaTS2这4种单性花的TS2蛋白外,剩余22个植物TS2蛋白被划分为4个亚群.值得注意的是,除杨树外,其余4种单性花植物的TS2基因距离较远,均单独为一分支.进一步对4个亚群的选择位点分析发现,这些亚群共包含出24个正选择位点(P>0.05),说明各亚群TS2基因均受控于纯净选择或松弛的纯净选择.由上述结果可知,TS2基因在进化过程中发生了多次重复和基因扩增事件,而多次独立的重复或者基因扩增事件导致TS2基因失去了对性别的决定或者调控作用.
- 李书粉刘方胡利宗邓传良高武军卢龙斗
- 关键词：性别决定分子进化
- 南美白对虾CYP4V18基因的同源性分析
- 本文以实验室克隆南美白对虾CYP4V18基因序列与其他相关的P450基因家族进行保守区域(I-Helix和Heme-binding)比对和构建系统发育树，以期确定其在 P450基因家族中分类地位。结果表明，该基因与岸蟹C...
- 刘方夏西超张亚捷宁黔冀
- 关键词：南美白对虾同源性
- 日本沼虾cytMnSOD和mtMnSOD基因全长cDNA克隆及表达被引量：1
- 2012年
- 利用RACE技术从日本沼虾肝胰腺中克隆了cytMnSOD和mtMnSOD基因cDNA全长序列。cytMnSOD基因cDNA全长1 233 bp,开放阅读框为858 bp,编码286个氨基酸,N端含有60个氨基酸残基组成的延伸区;mtMnSOD基因cDNA全长1 113 bp,开放阅读框为654 bp,编码218个氨基酸,N端含有20个氨基酸残基组成的信号肽;cytMnSOD和mtMnSOD预测蛋白分子量及等电点分别为31.33、24.05 ku和5.62、7.12。日本沼虾cytMnSOD推导的氨基酸序列与其mtMnSOD的相似性为40%,二者均含有MnSOD的特征肽段(DVWEHAYY)、4个Mn2+结合位点和2个N-糖基化位点。Real-time PCR结果表明,cytMnSOD和mtMnSOD在日本沼虾肝胰腺、肌肉、血细胞、大颚器官、卵巢和鳃等组织均有表达,其中肝胰腺表达量最高;肝胰腺cytMnSOD和mtMnSOD基因的表达量在蜕皮间期最高,蜕皮后期和蜕皮前期较低。嗜水气单胞菌刺激后3 h,肝胰腺cytMnSOD和mtMnSOD的表达量显著增加,推测MnSOD是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。
- 王文锋关建义吕黎刘方杨洪宁黔冀
- 关键词：日本沼虾克隆
- 日本沼虾酚氧化酶原基因cDNA的全长克隆及表达分析被引量：4
- 2012年
- 目的克隆日本沼虾酚氧化酶原(proPO)基因,进行生物信息学及时空表达分析。方法利用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(RACE)技术从血细胞中克隆proPO基因cDNA全长序列,用生物软件对其序列进行生物信息学分析;proPO基因时空表达分析采用RT-PCR和Real-time PCR方法;腹部肌肉注射嗜水气单胞菌(5.0×109/L)诱导酚氧化酶(PO),20μl/只,注射后3、6、12、24h取其血淋巴,分别测定血细胞proPO mRNA水平及血清酚氧化酶(PO)活力。结果日本沼虾proPO基因cDNA全长2428bp,包含71 bp的5’UTR、344 bp的3’UTR和2013bp的开放阅读框(ORF)。ORF编码671个氨基酸,预测蛋白分子量为76.5kD,理论等电点(pI)约为7.31;含有2个保守的铜离子结合位点和6个组氨酸残基、1个蛋白酶水解位点和硫酯样的基序(GCGWPRHM);含有3个血蓝蛋白结构域;与罗氏沼虾proPO的相似性最高,为93%,与其他甲壳动物proPO相似性为50%～53%。该基因表达具有组织特异性,血细胞最高,肝胰腺有较弱表达,肌肉、鳃、肠、大颚器官和卵巢不表达;血细胞proPO基因的表达量在蜕皮前期(D0/1)最高;嗜水气单胞菌刺激后6 h血细胞proPO mRNA水平及血清中PO活力均显著增加。结论与其他甲壳动物相似,日本沼虾proPO基因具有2个保守的铜离子结合位点;其表达呈组织特异性,最高出现在血细胞;在蜕皮周期的前期(D0/1)血细胞表达量最高;嗜水气单胞菌可诱导proPO基因的表达以及PO活力,提示该基因是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。
- 王文锋马建敏杨洪刘方陈香丽宁黔冀
- 关键词：酚氧化酶原实时荧光定量聚合酶链反应日本沼虾
- KK-42对日本沼虾蜕皮激素及其受体表达的影响被引量：8
- 2013年
- 用1.95×10-4 mol.L-1的KK-42处理日本沼虾1min,不同时刻抽取血淋巴、解剖肝胰腺.HPLC测定血淋巴中20E滴度,RT-PCR测定EcR和RXR mRNA水平.结果:KK-42处理后3h,6h,20E滴度分别比对照组增加了121.71%(P<0.05)、268.96%(P<0.01);EcR mRNA水平在处理后6h,12h,分别比对照组提高了233.56%(P<0.01)、110.73%(P<0.05);RXR mRNA水平在处理后3h、12h,分别比对照组提高了195.53%(P<0.01)、80.83%(P<0.05).表明KK-42可显著提高血淋巴中20E的滴度,并诱导肝胰腺中EcR和RXR的基因转录.
- 刘方陈香丽郭爱莲宁黔冀
- 关键词：日本沼虾ECRRXR
