刘志杰
- 作品数：13 被引量：22H指数：3
- 供职机构：南华大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Preparation of chitosan nanoparticle loaded with Helicobacter pylori Lpp20 and primary study of its mucosal vaccination in mice
- 曹斌刘志杰杨卓刘胜刘亚普张艳
- 关键词：CHITOSANHELICOBACTERPYLORILPP20VACCINEIMMUNOGENICITY
- 幽门螺杆菌Lpp20重组蛋白的表达、纯化及其免疫活性初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)脂蛋白Lpp20基因的重组蛋白,并检测其免疫活性。方法应用PCR技术从H.pylori标准株26695染色体DNA中扩增出Lpp20的编码基因片段,将其克隆至表达载体pGEX-6P-2上,在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21中表达并进行GST亲和层析纯化,用Western blot方法检测纯化产物重组Lpp20(recombinantLpp20,rLpp20)的免疫反应性。免疫C57BL/6小鼠后,以rLpp20为包被抗原建立间接ELISA法对免疫小鼠血清进行特异性抗体检测;ELISA双抗体夹心法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4水平;MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应等指标以分析rLpp20的免疫活性。结果扩增的lpp20全长528 bp,与GenBank上公布的H.pylori 26695株lpp20序列作BLAST比较,结果完全一致;成功构建了pGEX-6P-2/Lpp20重组质粒,表达的rLpp20 M_r 43 000,纯化产物可被鼠抗H.pylori抗体识别;以rLpp20为包被抗原建立的间接ELISA法检测免疫小鼠血清,与对照组相比rLpp20免疫组可见阳性反应;rLpp20免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,培养上清中IFN-γ、IL-2和IL-4含量均明显升高;脾淋巴细胞增殖反应测定,rLpp20免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,刺激指数也明显升高,与对照组有明显差异。结论rLpp20具有良好的免疫活性,在小鼠体内可诱导较强的特异性体液免疫和细胞免疫应答,为筛选高效的H.pylori疫苗抗原奠定了基础。
- 靖吉芳张艳刘志杰于文
- 关键词：幽门螺杆菌LPP20重组蛋白蛋白表达免疫活性
- 幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20的研究进展
- 本文对幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20进行了研究。文章认为，Lpp20是一种保守的幽门螺杆菌膜相关脂蛋白，它含有细菌脂蛋白的典型信号肽，研究显示Lpp20具有良好的免疫原性和免疫保护性。
- 刘志杰张艳
- 关键词：幽门螺杆菌免疫保护
- 文献传递
- 幽门螺杆菌Lpp20核酸疫苗的构建及其免疫活性的初步研究
- 目的:构建幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20基因的真核表达载体pcDNA3.1/(+/)//Lpp20,并在HeLa细胞中进行表达。通过肌肉注射免疫C57BL//6小鼠,观察其所产生的体液免疫和细胞免疫应答水平,为研制高效、新型...
- 刘志杰
- 关键词：幽门螺杆菌LPP20DNA疫苗免疫反应性
- 文献传递
- 幽门螺杆菌VacA N端真核表达载体的构建、鉴定及其诱导巨噬细胞空泡化和凋亡的观察被引量：2
- 2008年
- 目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)空泡毒素(Vacuolating cytotoxin,VacA)基因的真核表达载体pDsRed-Monomer-C1/vacA,并在THP-1巨噬细胞中表达,为研究VacA单一毒力决定簇的致病性奠定实验基础。方法用Primer 5.0软件设计引物,以HP基因组为模板,PCR扩增vacA目的基因片段,克隆入真核表达载体pDsRed-Monomer-C1中,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定后,转染THP-1巨噬细胞中,荧光显微镜和Western-blot检测VacA蛋白在细胞中的表达;电镜观察巨噬细胞(MΦ)的空泡样变和凋亡;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果PCR扩增得到了大小约为1 428bp的目的片段,双酶切及测序鉴定证明成功构建了HP真核表达重组载体;转染后24h,重组质粒组部分细胞中有聚集的荧光颗粒,部分细胞发生空泡样变和凋亡改变;细胞凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P<0.001),细胞核因子-κB(nuclear factorkappaB,NF-κB)的抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制细胞的凋亡。结论VacA蛋白瞬时高表达促进THP-1巨噬细胞空泡样变和凋亡。NF-κB可能参与调节VacA诱导的巨噬细胞凋亡。
- 黎村艳张艳刘志杰余敏君于文
- 关键词：幽门螺杆菌空泡毒素巨噬细胞凋亡
- 幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20的研究进展
- 2007年
- Lpp20是一种保守的幽门螺杆菌膜相关脂蛋白,他含有细菌脂蛋白的典型信号肽.近几年研究显示,Lpp20具有良好的免疫原性和免疫保护性.本文即对Lpp20的结构及其免疫原性和免疫保护性的研究进展作一综述.
- 刘志杰张艳
- 关键词：幽门螺杆菌脂蛋白免疫保护性LPP20
- 沙库巴曲缬沙坦治疗慢性充血性心力衰竭的临床疗效被引量：1
- 2023年
- 目的观察沙库巴曲缬沙坦治疗慢性充血性心力衰竭的临床疗效。方法选取2020年1月-2022年1月南华大学附属长沙中心医院收治的慢性充血性心力衰竭患者92例为研究对象,以随机信封分组原则分为雷米普利组(n=46)与沙库巴曲缬沙坦组(n=46)。雷米普利组患者在常规治疗基础上给予雷米普利片,沙库巴曲缬沙坦组患者在常规治疗基础上给予沙库巴曲缬沙坦钠片,2组均治疗6个月。比较2组临床疗效,治疗前与治疗6个月后症状评分、心功能指标、血清炎性因子及不良反应。结果沙库巴曲缬沙坦组总有效率高于雷米普利组(97.83%vs.82.61%,χ^(2)=6.035,P=0.014)。治疗6个月后,2组上腹饱胀、呼吸困难、咯痰、发绀评分及血清C反应蛋白、白介素-6、肿瘤坏死因子-α水平低于治疗前,左心室收缩末期内径、左心室舒张末期内径小于治疗前,左心室射血分数高于治疗前,且沙库巴曲缬沙坦组各指标降低/升高幅度大于雷米普利组(P<0.01)。沙库巴曲缬沙坦组不良反应总发生率低于雷米普利组(4.35%vs.21.74%,χ^(2)=6.133,P=0.013)。结论沙库巴曲缬沙坦治疗慢性充血性心力衰竭的效果较佳,其可更有效地缓解患者临床症状,改善心功能,减轻机体炎性反应,且安全性较高。
- 陶然刘志杰肖艳桥
- 关键词：慢性充血性心力衰竭雷米普利心功能炎性因子
- 幽门螺杆菌Lpp20-IL2核酸疫苗免疫活性被引量：6
- 2010年
- 【目的】观察pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2免疫C57BL/6小鼠后所产生的体液免疫和细胞免疫应答水平,为研制高效、新型的幽门螺杆菌核酸疫苗提供实验依据。【方法】构建pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2重组载体,并转染HeLa细胞,用Western-blot观察鉴定其在真核细胞得到表达后免疫C57BL/6小鼠,ELISA间接法测定小鼠血清中抗Lpp20IgG抗体水平,ELISA双抗体夹心法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL4水平,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应,免疫荧光组化法检测Lpp20蛋白在小鼠肌肉组织中的表达情况。【结果】成功构建了pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2真核表达载体,且重组质粒能在HeLa细胞内有效表达目的蛋白;小鼠接种pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2核酸疫苗后能产生特异性IgG抗体,8w后ELISA测定血清抗体A450值明显升高。核酸疫苗pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,培养上清中IFN-γ、IL4含量明显升高。pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2和pcDNA3.1(+)/Lpp20核酸疫苗组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,刺激指数明显高于空质粒组和PBS组。Lpp20蛋白在小鼠肌肉组织中能够有效表达。【结论】幽门螺杆菌Lpp20-IL2融合基因核酸疫苗和Lpp20单基因核酸疫苗均能刺激机体产生较强细胞免疫应答和体液免疫应答,且前者能诱导更强的细胞免疫应答。
- 于文张艳靖吉芳刘志杰
- 关键词：幽门螺杆菌白细胞介素2核酸疫苗免疫活性
- 幽门螺杆菌Lpp20核酸疫苗的构建及其免疫活性的初步研究被引量：3
- 2008年
- 目的构建幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20基因的真核表达载体pcDNA3．1（＋）／Lpp20，并在HeLa细胞中进行表达。通过肌肉注射免疫C57BL／6小鼠，观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平。方法用PCR法扩增Lpp20全基因，再将Lpp20基因克隆至pcDNA3．1（＋）真核细胞表达载体构建pcDNA3．1（＋）／Lpp20重组体，观察其在HeLa细胞中的表达。将核酸疫苗pcDNA3．1（＋）／Lpp20、对照空质粒pcDNA3．1（＋）及PBS分组通过肌肉注射免疫6周龄C57BL／6小鼠，隔2周免疫一次，共免疫4次。间接ELISA法测定小鼠血清中抗Lpp20IgG抗体水平，双抗体夹心ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-1水平，MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应。通过PCR法检测小鼠肌细胞中Lpp20基因的存在。结果小鼠接种pcDNA3．1（＋）／Lpp20核酸疫苗后能产生特异性IgG抗体，6周后ELISA测定血清抗体A450值为0．74，效价为1：1024。核酸疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后，培养上清中IFN-γ含量明显升高[（410．36±56．23）pg／m1]，与空质粒组[（25．26±10．85）pg／m1]之间差异有统计学意义（P〈0．01）。脾淋巴细胞增殖反应测定，核酸疫苗组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后，刺激指数（2．37±0．22）明显高于空质粒组（1．53±0．47）和PBS组（1．20±0．13），P〈0．01。PCR检测Lpp20基因可在小鼠肌细胞中存在。结论成功构建了pcDNA3．1（＋）／Lpp20核酸疫苗，且其在小鼠体内可诱导较强的特异性体液免疫和细胞免疫应答。为进一步研究该疫苗的免疫保护作用提供实验依据。
- 刘志杰张艳黎村艳邱宏余敏君
- 关键词：幽门螺杆菌LPP20DNA疫苗免疫反应性
- 壳聚糖介导增强幽门螺杆菌Lpp20 DNA疫苗黏膜免疫效果的研究被引量：3
- 2011年
- 目的 探讨壳聚糖包裹DNA疫苗黏膜免疫效果.方法 采用复凝聚法制备载幽门螺杆菌脂蛋白 Lpp20基因的壳聚糖（CS）纳米粒（NPs）,并对CS/DNA纳米粒的特质进行研究 用载基因壳聚糖纳米粒黏膜免疫（滴鼻和口服）小鼠,检测免疫小鼠的细胞和体液免疫水平.结果 裸质粒pcDNA3.1（＋）/Lpp20与CS/DNA NPs通过黏膜免疫均能诱导小鼠产生有效的免疫应答.CS/DNANPs滴鼻和口服免疫组诱导的抗体明显升高,与裸质粒组相比有明显差异（P＜0.05）,同时CS/DNANPs滴鼻和口服免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,刺激指数及培养上清中IFN-γ和IL-4含量明显高于裸质粒组、壳聚糖组和PBS组,且滴鼻免疫组高于口服组.结论 壳聚糖纳米粒能增强pcDNA3.1（＋）/Lpp20核酸疫苗的黏膜免疫（滴鼻和口服免疫）效果 载Lpp20基因壳聚糖纳米粒滴鼻免疫比口服免疫能诱导更强的细胞和体液免疫应答.
- 曹斌张艳刘志杰于文余敏君
- 关键词：壳聚糖纳米粒幽门螺杆菌LPP20核酸疫苗
