刘坤
- 作品数：14 被引量：56H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金内蒙古自治区科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 中间锦鸡儿CiCHIL克隆及其黄酮代谢功能研究
- 2016年
- 植物的次生代谢产物能够为植物的果实和花着色、有助于种子的形成、花粉的传播、适应外界逆境及防御害虫的攻击。苯丙烷代谢途径是植物中一个重要的次生代谢途径,苯丙烷代谢通路上有几条主要的分支,分支下游产生了上千种化合物。查耳酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)是苯丙烷通路上的一个关键酶,催化查耳酮到黄烷酮的反应,主要作用是帮助底物进行正确的分子内环化反应,生成的黄烷酮类化合物成为苯丙烷代谢途径下游产物的底物。从中间锦鸡儿干旱胁迫抑制性削减杂交文库中克隆得到一个CHI基因家族成员,序列分析和系统进化分析表明,该基因属于CHIL基因亚家族成员,命名为CiCHIL。实时荧光定量PCR检测发现,该基因受UV-B诱导且过表达CiCHIL具有较强的抵御紫外胁迫的能力。对过表达株系进行RNA和蛋白质水平的检测,对挑选出来的过表达株系进行总黄酮含量检测,发现过表达株系总黄酮含量显著高于野生型。
- 韩晗包旦奇杨飞芸刘坤杨天瑞杨杞李国婧王瑞刚
- 关键词：WESTERNBLOT总黄酮含量中间锦鸡儿
- 异源表达CiRS基因拟南芥的黄酮代谢及抑菌能力研究被引量：1
- 2019年
- 白藜芦醇合成酶(resveratrol synthase,RS)是查耳酮合酶基因家族的一个重要酶,在植物体内催化白藜芦醇的生成。白藜芦醇是植物产生的一种非黄酮多酚类代谢产物,是植物在受到生物和非生物胁迫时产生的植物抗毒素,已证实具有多种生理活性。从转录组数据库中筛选获得注释为CHS基因的CDS序列,以中间锦鸡儿cDNA为模板,克隆得到基因全长。序列分析、系统进化分析和转该基因拟南芥研究结果表明,该基因为RS基因,因此将其命名为CiRS(GenBank登录号MF678590)。qRT-PCR检测分析发现,中间锦鸡儿CiRS基因的表达受到干旱、NaCl、紫外线等胁迫诱导。异源表达CiRS基因抑制了拟南芥自身AtCHS基因的表达。同时转CiRS基因拟南芥的抑菌活性强于野生型。这些结果均证实了中间锦鸡儿CiRS基因在转基因拟南芥中发挥了相应的功能。
- 杨飞芸杨天瑞刘坤崔爽王瑞刚李国婧
- 关键词：中间锦鸡儿抑菌活性转基因拟南芥
- 中间锦鸡儿肉桂酰辅酶A还原酶基因的克隆和功能鉴定
- 肉桂酰辅酶A还原酶(cinnamoyl-CoA reductase,CCR)是催化木质素合成特异途径的第一个限速酶,对木质素的合成起重要作用。该研究从中间锦鸡儿中克隆得到两个CCR基因,分别命名为CiCCR2和CiCCR...
- 刘坤张子义崔爽韩晓东李国婧王瑞刚
- 关键词：中间锦鸡儿肉桂酰辅酶A还原酶木质素克隆
- 柠条干旱胁迫转录组数据分析以及部分基因功能验证
- 柠条是柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)、中间锦鸡儿(Caragana intermedia)和小叶锦鸡儿(Caragana microphylla)的统称,属于豆科锦鸡儿属多年生灌木,是干旱草原、荒...
- 杨杞韩晓敏于秀敏赵娜王光霞万永青杨飞芸李娜毛铭铢郑如玉刘坤岳文冉刘建政杨天瑞任方媛红格日王燕飞牛肖翠于爽王瑞刚李国婧
- 关键词：柠条转录组功能分析转录因子基因家族
- 瑞香狼毒总黄酮的提取及体外抗氧化作用研究被引量：41
- 2010年
- 运用超声波技术提取瑞香狼毒中的总黄酮,用亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮含量,瑞香狼毒总黄酮提取物中的黄酮含量为24.30%,采用抗坏血酸(VC)作为对照,测定了瑞香狼毒总黄酮对超氧阴离子自由基的清除能力与羟基自由基的清除能力。结果表明,瑞香狼毒总黄酮具有显著的体外清除超氧阴离子自由基、羟基自由基的作用,其作用强于VC,是一种有开发价值的天然抗氧化剂。
- 霍强王宇高荣远李文龙杜越刘坤
- 关键词：瑞香狼毒总黄酮超声波技术抗氧化
- 中间锦鸡儿CiABR17基因的克隆及表达分析
- 2017年
- 该研究采用blastn比对方法,从中间锦鸡儿干旱胁迫抑制消减杂交文库筛选出ABA响应蛋白17基因(ABR17)的EST序列。RACE扩增得到cDNA序列594bp,其中ORF为471bp,编码157个氨基酸,预测蛋白质分子量为16.44kD,等电点为4.93,平均疏水指数为-0.126,是一种亲水蛋白。实时荧光定量PCR检测发现,中间锦鸡儿CiABR17基因在脱水、NaCl和热胁迫下均有不同程度表达,说明CiABR17基因与中间锦鸡儿响应逆境胁迫有关;过表达CiABR17拟南芥株系的鲜重、干重和莲座直径均极显著高于野生型株系。
- 刘坤杨杞赵娜韩晓东苏雨萌王瑞刚李国婧
- 关键词：中间锦鸡儿ABR
- CiCHI提高拟南芥总黄酮含量被引量：1
- 2019年
- 查尔酮异构酶(CHI)是类黄酮合成途径中的第二个关键酶,对调控整个代谢途径起着重要作用,明确该基因功能,为进一步揭示中间锦鸡儿的抗逆机制提供理论依据。根据已知CHI基因的保守结构域设计简并引物,以中间锦鸡儿cDNA为模板,克隆得到CiCHI全长,并通过序列分析、系统进化分析进行确认。qRT-PCR检测分析发现,中间锦鸡儿CiCHI的表达受到紫外、NaCl、ABA等胁迫诱导。CiCHI在叶中表达量最高,茎中次之,根中最少。异源表达CiCHI使拟南芥的总黄酮含量明显增加。
- 杨飞芸白洁刘坤王瑞刚
- 关键词：中间锦鸡儿总黄酮含量转基因拟南芥
- 中间锦鸡儿CCR2和CCR3基因的克隆和功能鉴定被引量：1
- 2018年
- 肉桂酰辅酶A还原酶（cinnamoyl-CoAreductase,CCR）是催化木质素合成特异途径的第一个限速酶,对木质素的合成起关键作用。从中间锦鸡儿中克隆了两个CCR基因,CiCCR2和CiCCR3,其中CiCCR2基因开放阅读框为897bp,编码299个氨基酸,CiCCR3基因开放阅读框为966bp,编码322个氨基酸。过表达CiCCR2和CiCCR3转基因拟南芥株系幼苗期和成熟期木质素含量均高于野生型,组织化学染色也表明转基因株系木质素积累较野生型拟南芥多,且转基因株系鲜重和干重显著高于野生型。
- 刘坤崔爽杨飞芸韩晓东王瑞刚张子义
- 关键词：肉桂酰辅酶A还原酶克隆木质素中间锦鸡儿
- 转CiCHS基因拟南芥的黄酮代谢及抗氧化能力分析被引量：5
- 2018年
- 该研究克隆了中间锦鸡儿的查尔酮合成酶基因(CiCHS)并转入野生型拟南芥和tt4突变体,用qRT-PCR检测了转基因拟南芥中内源AtCHS基因的表达量,用分光光度法分析了转基因拟南芥的总黄酮、丙二醛含量及DPPH自由基清除能力,用HPLC法检测了转基因拟南芥的柚皮苷含量。结果显示:(1)转基因拟南芥中,内源AtCHS基因的表达量约为野生型的十分之一,总黄酮含量明显高于野生型;HPLC测得转基因株系中柚皮苷含量高于野生型;紫外照射处理前后转基因拟南芥中丙二醛积累量明显少于野生型。(2)转基因株系提取物对DPPH自由基清除能力显著高于野生型。(3)CiCHS基因互补拟南芥tt4突变体,转基因株系的种皮呈现浅棕色。研究表明,中间锦鸡儿CiCHS基因异源表达后生成了柚皮苷,使转基因植物的抗氧化性增强,部分恢复了tt4突变体的种皮颜色。
- 杨飞芸刘坤刘坤崔爽王瑞刚
- 关键词：中间锦鸡儿查尔酮合成酶柚皮苷转基因拟南芥
- 柠条干旱胁迫转录组数据分析以及基因功能验证
- 柠条是柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)、中间锦鸡儿(Caragana intermedia)和小叶锦鸡儿(Caragana microphylla)的统称,属于豆科锦鸡儿属多年生灌木,是干旱草原、荒...
- 杨杞韩晓敏于秀敏赵娜王光霞万永青杨飞芸张燕娜冯宗琪李娜毛铭铢郑如玉滑璐玢刘坤岳文冉王瑞刚李国婧
- 关键词：柠条转录组功能分析转录因子基因家族
