刘坤
- 作品数：5 被引量：25H指数：3
- 供职机构：合肥工业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划农产品生物化工教育部重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>
- 添加扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法被引量：4
- 2014年
- 通过构建人工扩增内标,建立可以有效指示沙门氏菌检测过程可能出现假阴性情况的PCR检测方法。本研究基于沙门氏菌invA基因设计特异性引物,复合法构建扩增内标,建立PCR检测体系。特异性引物LW,对33株沙门氏菌和6株非沙门氏菌标准株进行检测,结果显示,所有沙门氏菌均扩增出385 bp的目标片段,非沙门氏菌则只能扩增出484 bp的扩增内标片段,特异性良好。灵敏度实验表明,该检测体系的灵敏度可达6.35 fg/μL。人工污染实验表明,起始染菌量为3.2 CFU/25 mL时,仅需8h增菌培养便可检出。大量食品样品检测证明,该检测体系确实可以有效的避免PCR检测过程出现的假阴性,提高检测准确性。
- 杨晋曾庆梅张笛刘坤王琳张亚军
- 关键词：沙门氏菌PCR检测扩增内标假阴性
- rpoE基因对环境胁迫下肠炎沙门氏菌生长能力的影响被引量：1
- 2013年
- rpoE基因是普遍存在于细菌中的一类调节基因,对细菌响应各种环境胁迫起着重要的调节作用。该研究利用λ噬菌体的Red重组系统构建出肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,S.E)的rpoE基因缺陷株ΔrpoE,并考察ΔrpoE在不同环境胁迫条件下的生长能力。结果显示,在37°C时,ΔrpoE的生长能力无显著变化;而在高低温、酸、氧、高渗培养条件下,ΔrpoE的生长能力显著弱于野生株。该研究首次获得了S.E的基因缺陷株ΔrpoE,并初步探索了rpoE基因在S.E中的功能,有助于进一步研究rpoE基因在大肠杆菌、沙门氏菌等肠杆科细菌在响应环境胁迫过程中表现出的生物学功能。
- 乔向欣曾庆梅曾红亮杨晋刘坤
- 关键词：肠炎沙门氏菌RED重组环境胁迫
- 绞股蓝皂苷提取纯化工艺研究进展被引量：12
- 2014年
- 绞股蓝皂苷是绞股蓝主要的活性物质,因其具有抗疲劳、抗衰老、抗诱变,提高机体免疫能力、调节心脑血管和改善神经系统等独特的生理调节功效,有巨大的开发价值和应用潜力。本文从提取工艺、纯化工艺两个方面综述了绞股蓝皂苷的研究进展,为进一步研究绞股蓝皂苷提取、纯化工艺提供了线索和依据。
- 张新宇张笛王琳徐作华刘坤曾庆梅
- 关键词：绞股蓝皂苷纯化
- 高密度CO_2杀菌机制与协同措施研究现状被引量：6
- 2010年
- 高密度CO2杀菌技术对营养细菌的杀菌是切实可行的,但是在较温和条件下,很难杀灭芽胞;已报道杀菌研究结果绝大部分是将微生物接种在指定的基质开展,基质影响杀菌效果,故研究成果难以实际应用;营养细菌的杀菌机制还没有完全研究清楚,芽胞的杀灭机制几乎没有研究。为此亟待进一步展开营养细菌和芽胞杀菌机制研究,为高密度CO2杀菌技术的实用化提供理论基础。本文回顾了国内外研究状况,提出了进一步工业化前需要解决的酸化杀菌、萃取杀菌、芽胞杀灭机理以及协同措施等应用基础问题。
- 曾庆梅周先汉杨毅司文攻李志强刘坤高媛
- 关键词：高密度CO2杀菌酸化萃取芽孢
- 肠炎沙门氏菌rpoS基因缺陷株的构建及其生长特性观察被引量：2
- 2013年
- 目的利用λ-red同源重组系统构建食源性肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)CICC21482rpoS基因缺陷株SE/⊿rpoS,观察其在胁迫环境中的生长特性,以探讨rpoS基因的生物学作用。方法通过PCR扩增两侧为肠炎沙门氏菌rpoS基因同源臂,中间为卡那霉素抗性基因(kmr)的打靶片段,再电击转入含质粒pkD46的肠炎沙门氏菌中,替换rpoS基因,筛选阳性转化子SE/⊿rpoS并用PCR法验证。结果成功构建了肠炎沙门氏菌rpoS基因缺陷株。在常规LB培养基中37℃培养的缺陷株和野生株生长曲线差异无统计学意义(P>0.05);SE/⊿rpoS菌株在45℃、2%NaCl和pH4.0应激条件下的生存能力较野生株弱(P<0.05)。结论成功构建SE/⊿rpoS基因缺陷株。该基因在肠炎沙门氏菌克服高温、高渗、酸应激时被诱导表达从而发挥作用。此结果为进一步研究rpoS基因在应激过程中的作用机制提供了基础资料。
- 曾红亮曾庆梅乔向欣杨晋刘坤
- 关键词：肠炎沙门氏菌基因敲除
