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屠宰生猪胸膜炎的病原检测: 2014年; 在屠宰场内,经常可以看到屠宰生猪存在不同程度的胸膜炎病变。这些胸膜上的炎症往往由胸膜肺炎病变持续感染发展而来。试验从宏观角度上统计屠宰生猪出现胸膜炎病变的发生情况,并对胸膜肺炎病变肺脏进行病原菌的分离鉴定。采用屠宰场胸膜炎评估系统(SPES),选取某集约化生猪养殖场的9个畜群,每个畜群随机抽取200份肺脏样品,进行胸膜炎的评价,并随后检测胸膜肺炎的病原菌。其中不同程度的胸膜炎病例占调查肺脏总数的52.1%。打分SPES>1的病变肺脏比例为24.0%。从胸膜肺炎病变肺脏中分离出胸膜肺炎放线杆菌26株,副猪嗜血杆菌9株,多杀性巴氏杆菌11株和猪链球菌15株。; 邱渊皓魏江华任娟娟唐攀刘万华武宁李涛伍成奇王晶钰; 关键词：屠宰生猪胸膜炎胸膜肺炎病原菌检测

布鲁菌S2疫苗株免疫牛与牛种、羊种布鲁菌自然感染牛ELISA鉴别诊断方法的建立被引量：6: 2014年; 为建立区分猪种布鲁菌S2疫苗株接种奶牛与布鲁菌自然感染奶牛,BLAST比对分析羊种、牛种、猪种、犬种、沙林鼠种和绵羊种6种布鲁菌基因序列,发现repA-related基因是猪种布鲁菌与牛种及羊种布鲁菌的差异基因。设计引物PCR扩增获得repA-related基因片段,克隆并原核表达得到了布鲁菌repA-related融合蛋白,以repA-related蛋白建立间接ELISA检测方法。用repA-related蛋白间接ELISA检测猪种S2疫苗株接种动物血清为阳性,检测牛种和羊种布鲁菌自然感染动物血清为阴性。repA-related蛋白间接ELISA能从试管凝聚实验(SAT)及常规ELISA检测阳性的奶牛血清样本中,区分出S2疫苗接种牛与牛种布鲁菌感染牛。; 武宁王晶钰刘万华邱渊皓任娟娟唐攀曹晓蕾陈占莉江越德; 关键词：布鲁菌病

陕西省avian-like H1N1猪流感病毒的遗传进化分析被引量：1: 2013年; 【目的】监测陕西省猪流感的流行与传播情况,为猪流感研究提供参考。【方法】从生猪养殖场和屠宰场表观健康猪中随机采取猪鼻/气管拭子样本,经SPF鸡胚分离,对HA阳性样本进行猪流感病毒RT-PCR鉴定。测定分离株全基因序列,通过MEGA4构建基因进化树,并进行遗传变异分析。【结果】从500份样本中分离鉴定出6株H1N1流感病毒,病毒分离率为1.2%。获得6个核苷酸相似性为98.3%—99.1%的分离株全基因序列。遗传进化分析表明6个分离株都位于avain-like H1N1猪流感病毒谱系,与中国江苏,辽宁,山东和香港等地H1N1猪流感病毒株同源性达97%—99%。6个分离株的8个基因片段均在蛋白受体结合位点、潜在糖基化位点等处发生核苷酸变异,这将会影响猪流感病毒的抗原特性、宿主适应性和致病力。【结论】首次从西北地区表观健康猪中分离到H1N1猪流感病毒,并获得6个分离株的全基因序列。遗传进化分析表明,6个分离株为avain-like H1N1猪流感病毒,且多处氨基酸位点发生变异。; 任娟娟王晶钰刘红彦刘万华武宁邱渊皓唐攀江跃德; 关键词：遗传进化

鸡新城疫病毒的分离鉴定与交叉免疫保护试验被引量：6: 2013年; 为了评价疫苗免疫保护效果,进而筛选出最佳的免疫方案,将分离到的鸡新城疫病毒(Newcas-tle disease virus,NDV)流行毒株制备成灭活疫苗进行交叉免疫保护试验研究。把采集到的疑似发生新城疫的病鸡肺、气管环等组织经处理后接种10日龄SPF鸡胚进行病毒的分离和增殖,并用血清学和分子生物学方法进行毒株的鉴定;用分离到的NDV/Chicken/TC/1/2011毒株制成油乳剂灭活苗,与La Sota疫苗以不同的疫苗组合免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果显示,共分离到9株新城疫病毒,其F蛋白裂解位点的氨基酸均为112 R-R-Q-K-R-F117,表现为强毒株的分子特征,与致病指数结果一致。分离株灭活苗组和分离株灭活苗+La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最高,其次是La Sota灭活苗+La Sota弱毒苗和LaSota灭活苗,La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最低。NDV分离株与疫苗株La Sota存在明显抗原性差异,这将对新城疫疫苗的发展和疾病控制策略制定至关重要。; 刘万华王晶钰武宁唐攀任娟娟邱渊皓江跃德陈占莉曹晓蕾; 关键词：新城疫病毒疫苗

流产型布鲁菌Omp10、Omp25蛋白的表达纯化与鉴定被引量：2: 2012年; 获得高纯度具有生物学活性的重组布鲁菌Omp10、Omp25融合蛋白,并进行抗原性的分析。将用PCR扩增出的布鲁菌Omp10、Omp25基因片段分别克隆到原核表达载体pET-32α中,构建pET-32α-Omp10/Omp25原核表达质粒。将其转入大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中,用IPTG诱导表达,经HisTrap HP亲和层析柱分离纯化,分别用Western-blot和间接ELISA检测产物的抗原性。基因测序及酶切鉴定证明pET-32α-Omp10/Omp25原核表达载体构建成功。SDS-PAGE表明,Omp10、Omp25融合蛋白均以包涵体的形式在大肠杆菌中高效表达。经过包涵体的变性、复性及亲和层析纯化,成功获得了大小分别为34 000和44 000的融合蛋白,与预测的相对蛋白分子质量一致。Western和间接ELISA试验证明纯化的Omp10、Omp25融合蛋白能被免疫的牛布鲁菌阳性血清所识别。结果表明,成功获得了布鲁菌Omp10、Omp25融合蛋白,且均具有一定的免疫原性,通过血清学反应证实,Omp10、Omp25蛋白为布鲁菌病临床诊断试剂盒的研制奠定了基础。; 张三东王晶钰王利勤杨幼聪马超陈婷董睿李成山任娟娟刘万华; 关键词：布鲁菌纯化抗原性

鸡源沙门菌PFGE分型及耐药性研究被引量：13: 2013年; 为了解某规模化养鸡场沙门菌的流行情况及耐药现状,对分离于该场的病、死鸡42株沙门菌进行血清型鉴定,K-B药敏纸片法检测分离菌的药物敏感性,采用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对分离菌进行PFGE分型研究。结果显示,42株鸡源沙门菌可分为4种血清型,其中以肠炎沙门菌为优势血清型;分离菌对四环素、氨苄青霉素和萘啶酸普遍耐药,耐药率均在60%以上,4重以上耐药菌株占88.9%;42株鸡源沙门菌可分为7个PFGE型,各型间相似性较高,部分型菌株间相似性高达90%以上。结果表明,该养殖场鸡源沙门菌的耐药性普遍存在,且以多重耐药为主,PFGE分型结果表明,该场流行的沙门菌可能是由少数菌株传播引起的。; 唐攀崔恩慧刘万华任娟娟武宁邱渊皓王晶钰; 关键词：沙门菌血清型耐药性脉冲场凝胶电泳

规模化养鸡场大肠杆菌病综合防治措施: 目的：以我国3省份规模化养鸡场分离鉴定的1002株鸡源大肠杆菌为研究对象,了解我国鸡源E.coli的耐药性和耐药基因的年度变化及耐药基因与耐药性之间的相关性,制定科学的防治方案.方法：采用K-B药敏纸片法检测E.coli...; 王晶钰唐攀王利勤刘万华任娟娟武宁邱渊皓; 关键词：规模化养鸡场大肠杆菌病耐药基因; 文献传递

基因VII型NDV的分离鉴定及其与La Sota株的交叉免疫保护试验: 新城疫(Neweastle Disease, ND)是由新城疫病毒(Neweastle Disease Virus, NDV)引起的危害全球养禽业的一种烈性、高度接触性传染病。近年来在国内经过NDV活疫苗（LaSota,...; 刘万华; 关键词：流行毒株遗传进化; 文献传递

肉鸡源致病性大肠埃希菌中β-内酰胺类抗生素耐药基因的检测被引量：4: 2013年; 为了解大型肉鸡养殖场致病性大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)对β-内酰胺类抗生素中的头孢菌素类抗生素的耐药性变化,以及β-内酰胺酶耐药基因的携带情况及耐药基因与耐药性的相关性,从陕西省的部分规模化养鸡场的病、死鸡中分离鉴定并保存108株致病性E.coli。采用K-B药敏纸片法检测致病性E.coli分离株对7种β-内酰胺类药物的药敏性,PCR方法检测3种β-内酰胺酶耐药基因,用DNA Star软件对获得的耐药基因序列与GenBank中的相关序列进行比对。结果显示,鸡源致病性E.coli分离株对头孢派酮、头孢他啶、头孢噻肟、头孢唑啉、头孢曲松、头孢呋肟、头孢噻吩的耐药率分别为83.3%、18.5%、72.2%、92.6%、88.9%、90.1%和95.7%。三重以上耐药菌株占88.9%。β-内酰胺酶基因tem和ctx-m的检出率分别为98.1%和74.1%,未检测到shv基因。结果表明,快大型肉鸡致病性E.coli对β-内酰胺类抗生素的耐药性普遍存在,以多重耐药为主。耐药基因tem和ctx-m的检出率与其耐药性呈正相关。; 金彪伍成奇唐攀邱渊皓刘万华武宁王晶钰; 关键词：大肠埃希菌 Β-内酰胺酶基因肉鸡

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刘万华

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