侯慧铭
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
- 供职机构：山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- LMP-1基因慢病毒载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞的表达被引量：6
- 2013年
- 目的:构建人LMP-1重组慢病毒载体,体外转染大鼠骨髓间充质干细胞,检测LMP-1基因在大鼠骨髓间充质干细胞的表达。方法:利用PCR法从cDNA文库中钓取LMP-1基因,将其与经AgeⅠ酶切线性化的慢病毒载体pGC-FU-EGFP相连接,转化感受态大肠杆菌,筛选出阳性克隆pGC-FU-LMP-1-EGFP,基因测序对其鉴定。经293T细胞包装后,收集富含病毒颗粒LV-LMP-1-EGFP的细胞上清,浓缩并标定滴度,RT-PCR检测并鉴定。以最佳MOI值体外转染大鼠骨髓间充质干细胞,荧光显微镜观察转染是否成功,流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR和Western blot检测转染细胞LMP-1基因的表达。结果:①基因测序及RT-PCR检测证实携带人LMP-1基因的慢病毒载体构建成功,包装后获得滴度为2×108TU/ml的LV-LMP-1-EGFP。②以MOI=100转染大鼠骨髓间充质干细胞,荧光显微镜下可见大量绿色荧光蛋白表达,转染效率可达93.5%,经RT-PCR与Western blot检测,被转染细胞内有LMP-1基因表达。结论:成功构建携带人LMP-1基因的慢病毒载体,可高效转染大鼠骨髓间充质干细胞,被转染细胞可高效表达LMP-1基因。
- 侯慧铭向川郭丽张桦栋
- 关键词：慢病毒LMP-1骨髓间充质干细胞
- LMP-1基因慢病毒重组体对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖影响及其表达被引量：5
- 2013年
- 目的：探讨LMP-1重组慢病毒载体体外转染大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的方法，并检测LMp-1基因对BMSC增殖能力的影响及表达。方法：选取清洁级4周龄SD大鼠6只（雌雄不限），无菌条件下提取骨髓间充质干细胞并培养至第3代，设立空白对照组（未经特殊处理，只有第3代骨髓间充质干细胞）、慢病毒载体转染组（在未经特殊处理的第3代骨髓间充质干细胞中加入PGC-FU-GFP及转染试剂Polybrene）和重组基因转染组（在未经特殊处理的第3代骨髓间充质干细胞中加入PGC-FU-LMP．1-GFP及转染试剂Polybrene）进行转染。转染48h后，通过免疫荧光显微镜观察荧光表达，流式细胞仪检测慢病毒的转染效率，采用MTY法评价慢病毒转染对BMSC增殖的影响；WesternBlot检测转染后基因的表达情况。结果：①成功培养出第3代SD大鼠BMSC，以100的感染复数（MOI）转染，48h后免疫荧光显微镜下可见大量绿色荧光蛋白表达，转染效率达67％；②不同时间点慢病毒载体转染组和重组基因转染组，与空白对照组细胞增殖比较差异无统计学意义；③WestemBlot检测示重组基因转染组72kDa处有条特征带，其大小与LMP－l融合蛋白（～50kDa＋28kDa=78kDa）基本吻合。结论：经LMp-1基因慢病毒重组体转染大鼠骨髓间充质干细胞对其增殖活力没有影响并可有效表达LMP－1。
- 梁长生向川魏增永侯慧铭秦迎泽卫小春
- 关键词：骨髓细胞
- OPG基因慢病毒载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞的表达
- 目的 构建人OPG重组慢病毒载体，体外转染大鼠骨髓间充质干细胞，并检测OPG基因在大鼠骨髓间充质干细胞的表达。 方法 利用PCR方法从cDNA文库中钓取OPG基因，将其与经AgeⅠ酶切线性化的慢病毒载体pGC-FU...
- 侯慧铭
- 关键词：慢病毒载体骨髓间充质干细胞RT-PCR检测
- TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞杀伤的体外实验研究被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨脂质体介导的TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞的杀伤作用以及所产生的旁观者效应。方法:脂质体介导TK基因体外转染骨肉瘤MG-63细胞,倒置荧光显微镜观察细胞转染是否成功,流式细胞仪检测转染细胞与未转染细胞的转染效率。将未转染的骨肉瘤MG-63细胞分为3组,实验1组用转染TK/GCV的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养;实验2组用0.22μm滤器过滤的转染后的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养;对照组用培养液培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分别测定各组细胞的生长抑制率及骨肉瘤细胞对TK/GCV系统的敏感性。结果:经TK基因转染的MG-63细胞,倒置荧光显微镜下有大量绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测转染TK基因的细胞转染效率可达75.5%。6 d后MTT检测结果显示实验1组中各比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比有统计学意义(P<0.05);实验2组中1/10、1/7比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。经TK基因转染的MG-63细胞随GCV浓度增加,细胞凋亡率增加。结论:脂质体介导的TK/GCV系统能够通过旁观者效应抑制骨肉瘤MG-63细胞的生长。
- 张桦栋吕智冯毅刘小丽侯慧铭
- 关键词：骨肉瘤旁观者效应
- 慢病毒载体介导LMP-1与OPG基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究
- 目的利用慢病毒载体介导LIM矿化蛋白1(LMP-1)与骨保护素(OPG)基因分别转染大鼠骨髓间充质干细胞,并检测两基因在大鼠骨髓间充质干细胞的表达。方法构建携带LMP-1基因与OPG基因重组慢病毒载体LV-LMP-1-G...
- 侯慧铭向川
