何鹏
- 作品数：9 被引量：13H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市教育委员会科学技术研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 白血病干细胞的生物学特性被引量：4
- 2007年
- 白血病干细胞是第一个被确认的肿瘤干细胞,在白血病的形成和病情的发展中具有重要作用。深入研究其生物学特性将为白血病的发病机制以及干细胞靶向治疗奠定理论基础。该文介绍白血病干细胞的免疫表型、自我更新机制、生存优势及多重耐药等。
- 何鹏张伶
- 关键词：肿瘤干细胞白血病免疫表型自我更新多重耐药
- RNA干扰NPM基因表达对白血病细胞生物学特性的影响
- 白血病是造血干细胞克隆性疾病，是一组高度异质性的恶性血液病。靶向白血病细胞的化疗是当前治疗的主要手段，但仍无法解决白血病的复发、转移及耐药等诸多问题。目前分子水平的靶向治疗成为研究的热点问题。核仁磷酸蛋白(NPM)是主要...
- 何鹏
- 关键词：白血病治疗免疫疗法基因干扰
- 文献传递
- 急性髓系白血病核仁磷酸蛋白基因及其突变检测方法的建立被引量：1
- 2008年
- 本研究建立PCR技术检测白血病细胞核仁磷酸蛋白(nucleophosm in,NPM)基因及突变的方法。以白血病细胞系和白血病临床标本为研究对象,首先采用RT-PCR检测NPM mRNA表达水平,其次应用PCR方法检测NPM第12外显子,并对扩增产物进行测序分析,最后以插入NPM A型突变cDNA的质粒作为阳性模板,建立PCR检测NPM突变的方法并进行方法学评价,并采用此方法直接检测白血病细胞中是否存在NPM基因突变。结果表明:白血病细胞系NPM mRNA表达水平较正常单个核细胞对照组高,23例急性髓系白血病标本均不同程度地高表达NPM mRNA;采用PCR扩增联合测序分析发现,髓系白血病细胞系(THP1和K562)NPM基因组第12外显子无突变,但K562细胞NPM基因3′非编码区存在1个T碱基缺失;建立直接针对NPM A型突变cDNA的PCR方法,能特异扩增NPM A型突变基因;该方法重复性好,批内、批间变异系数分别为1.6%和3.1%,灵敏度为100pg cDNA;采用此方法从23例白血病临床标本中检出2例NPM突变阳性。结论:建立了检测NPM mRNA水平和A型突变的实验方法,发现白血病细胞高表达NPM mRNA水平,部分白血病患者NPM基因发生A型突变。
- 何鹏张伶骆展鹏杨松钟晓明蔡晓钟
- 关键词：急性髓系白血病基因突变基因检测聚合酶链反应
- 5-FU富集人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞被引量：2
- 2008年
- 探讨利用细胞周期特异性药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)从人白血病细胞系KG-1a中富集肿瘤干细胞样亚群细胞。体外药物敏感试验确定5-FU的最佳作用浓度和作用时间;KG-1a细胞经5-FU药物处理后,流式细胞术检测存活细胞群中CD34+CD38-亚群细胞比例;吖啶橙染色观察细胞内的核酸组成;RT-PCR半定量检测细胞内三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily Gmember2,ABCG2)mRNA的表达;半固体培养观察细胞的集落形成能力。结果显示,50μg/ml5-FU作用KG-1a细胞4天后,CD34+CD38-亚群细胞比例提高10倍以上;吖啶橙染色可见大部分细胞核酸以发出绿色荧光的DNA为主,RNA含量低;此类细胞高表达ABCG2 mRNA水平;而药物处理后细胞集落形成数量较未处理细胞明显减少。研究结果表明,利用5-FU能够杀死增殖期细胞的性质,成功建立体外药物筛选富集人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的方法。
- 杨松钟晓明张伶高玉洁骆展鹏何鹏
- 关键词：白血病干细胞5-氟尿嘧啶集落形成
- 人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的初步研究被引量：3
- 2008年
- 探讨人白血病细胞系KG-1a中是否存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。瑞氏染色和吖啶橙染色分别观察白血病细胞系KG-1a细胞形态和RNA含量;流式细胞术检测细胞周期分布;免疫组化和流式细胞术检测KG-1a细胞CD34的表达;流式细胞术检测CD34+CD38–亚群细胞;烟酸己可碱Hoechst33342染色后用荧光显微镜观察KG-1a细胞中侧群(side population,SP)样细胞所占比例。结果显示,白血病细胞系KG-1a细胞核仁易见,形态原始;部分细胞RNA含量低,细胞处于G0/G1期的比例占15.5%。绝大多数细胞的胞浆和胞膜皆表达CD34抗原,KG-1a中CD34+细胞占96.3%,CD34+CD38–亚群细胞占7.02%;SP样细胞大致比例为7.60%。本研究表明,人白血病细胞系KG-1a中存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。
- 杨松钟晓明张伶骆展鹏何鹏高玉洁
- 关键词：肿瘤干细胞免疫表型侧群细胞
- 人EBLN1基因系统进化分析及其生物学功能研究
- 背景：人内源性逆转录病毒(human endogenous retroviruses，HERV)是在病毒感染过程中，其DNA整合到人类基因组并经过长期遗传而产生的。人类基因组中约8%的基因来自于内源性逆转录病毒。HERV...
- 何鹏
- 关键词：内源性逆转录病毒博尔纳病病毒生物学功能
- RNAi重组体抑制白血病K562细胞系中NPM1基因的表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin1,NPM1)特异性的RNAi真核表达载体,观察对白血病K562细胞系NPM1表达的抑制作用。方法采用RT-PCR检测白血病细胞系(THP1和K562)和急性髓系白血病(AML)细胞NPM1mRNA水平。设计合成2条针对NPM1基因并具有小发夹结构的DNA序列,经退火形成互补双链,再克隆至载体pGenSil-1中构建含NPM1的RNAi重组体,经酶切及测序鉴定后通过脂质体转染K562细胞,同时设立pGenSil-1转染组和pGenSil-1/neg转染组。采用RT-PCR检测各组转染细胞中NPM1的mRNA水平。结果白血病细胞系和AML细胞均高表达NPM1 mRNA。针对人NPM1基因的RNAi重组体构建成功,并能够稳定转染K562细胞,导致白血病细胞NPM1mR-NA相对表达量下降64%,而pGenSil-1转染组和pGenSil-1/neg转染组未能下调NPM1表达。结论白血病细胞高表达NPM1基因,其mRNA表达水平能够被靶向NPM1的RNAi重组体特异性地下调。
- 何鹏骆展鹏张伶杨松钟晓明高玉洁
- 关键词：RNA干扰白血病K562细胞
- 急性髓系白血病NPM基因表达及突变检测方法的建立
- 目的：建立 PCR 技术检测白血病细胞核仁磷酸蛋白(NPM)基因及 A 型突变的方法。方法：以白血病细胞系(K562和 THP1)为研究对象,建立在 DNA 水平检测 NPM 基因第12 外显子的 PCR 方法,并对扩增...
- 何鹏张伶
- 关键词：白血病突变聚合酶链反应
- 文献传递
- 核磷蛋白A型突变体对髓性白血病细胞系增殖的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究核磷蛋白A型突变体基因转染对人髓性白血病细胞系体外增殖的影响。方法构建含核磷蛋白A型突变基因(NPM-mA)的真核表达质粒pEGFPC1-NPM-mA,选择NPM-mA阴性、抑癌基因p14ARF有无缺失的两株人髓性白血病细胞KG-1a和K562作为靶细胞,将pEGFPC1-NPM-mA重组质粒和pEGFPC1空质粒分别转染白血病细胞,以未转染组为对照。用RT-PCR和免疫组化来分析转染细胞目的基因mRNA和蛋白质的表达。采用台盼蓝拒染法计数活细胞,绘制转染前后生长曲线,观察细胞体外生长的改变。结果转染后的两种白血病细胞株表达NPM-mA mRNA,胞浆内NPM-mA蛋白阳性,符合NPM突变蛋白胞质移位的特点。细胞生长曲线显示,转染NPM-mA质粒的KG-1a细胞较空质粒转染和未转染组细胞生长速度明显加快,而转染NPM-mA质粒的K562细胞则较对照组细胞生长明显受抑制(P<0.05)。结论NPM-mA基因稳定转染可影响白血病细胞的增殖活性,在无ARF缺失时NPM-mA突变体可促进白血病细胞体外生长。
- 骆展鹏何鹏张伶杨松钟晓明高玉洁
- 关键词：白血病核磷蛋白基因突变
