公共文化服务平台

共 5 条记录，以下是 1-5

全选清除导出

排序方式：

转录因子STAT1两个亚型STAT1α和STAT1β高表达载体的构建及鉴定: 2016年; 目的利用高表达载体pLJM1-EGFP构建并鉴定转录因子STAT1基因的2个亚型STAT1α和STAT1β的过表达重组质粒(简称为pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β)。方法以大鼠肝脏cDNA为模板,PCR获取目的片段(即STAT1α和STAT1β);用AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切pLJM1-EGFP表达载体和PCR扩增的STAT1α和STAT1β基因片段后,用T4DNA连接酶连接酶切纯化后的载体及目的基因片段;将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞、挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切和DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β重组载体中分别成功插入了STAT1α和STAT1β基因片段。DNA测序结果表明插入的STAT1α和STAT1β基因片段的序列完全正确。结论成功构建了pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β高表达重组载体。; 李靖伊静蓝茜李玥刘莉梁栋杜小娟武丽涛闫小飞杨旭东张富军吕社民李冬民

大鼠TLR2胞外段(405T-573Q)多克隆抗体的制备及活性鉴定: 2015年; 目的制备大鼠Toll样受体2胞外段(TLR2ex,405T-573Q)的多克隆抗体并鉴定其活性。方法用反转录PCR从大鼠肝细胞中扩增长507个碱基的TLR2部分胞外段,并构建重组表达载体p ET28a-TLR2ex。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达TLR2ex-6×His融合蛋白,该蛋白经亲和层析纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。ELISA鉴定抗血清的效价,Western blot法检测抗血清的特异性。结果成功构建了原核表达载体p ET28a-TLR2ex,并成功表达纯化了TLR2ex-6×His融合蛋白,将该蛋白免疫BALB/c小鼠后获得抗血清;Western blot法结果显示该血清可以特异性地检出E3大鼠脾组织TLR2蛋白,ELISA测定该多克隆抗体的效价可以达到1∶76 800。结论成功制备了大鼠TLR2胞外段(405T-573Q)的多克隆抗体。; 刘莉蓝茜李靖伊静王璇李玥张富军吕社民李冬民; 关键词：TOLL样受体2 胞外段多克隆抗体

miR-144负性调节大鼠巨噬细胞TOLL样受体2的表达被引量：3: 2015年; 目的明确TOLL样受体2(TLR2)与micro RNA144(mi R-144)作用之间的关系。方法利用不同浓度的mi R-144的模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)瞬时转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,RT-q PCR检测mi R-144和TLR2及其下游分子TNF-α的表达。利用大鼠肝脏c DNA为模板,PCR获取目的片段(即含mi R-144野生及突变结合位点的TLR2 m RNA的3'UTR区);用SacⅠ、XbaⅠ双酶切pmir GLO报告基因载体和含mi R-144野生及突变结合位点的TLR2 m RNA的3'UTR区,构建携带上述片段的双荧光素酶报告基因,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒,即pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR;并用mi R-144的mimics与双荧光素酶报告基因共转染明确mi R-144与TLR2 m RNA的3'UTR区的靶向关系。结果瞬时转染100 nmol/L mi R-144 mimics后,NR8383细胞中mi R-144表达显著升高,而TLR2及其下游分子TNF-α表达显著下降;而100 nmol/L mi R-144 inhibitor作用则相反。PCR和双酶切DNA测序结果证实pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR重组载体构建成功;用100 nmol/L mi R-144 mimics与空载体及上述两个构建体分别共转染HEK 293T细胞后,pmir-TLR2-3'UTR转染组相对荧光素酶活性显著降低。结论 mi R-144通过靶向结合TLR2 m RNA的3'UTR区负性调节TLR2及其下游促炎因子的表达。; 王璇蓝茜刘莉伊静李靖李玥王美晨李嘉熙宋刘梅李冬民; 关键词：TOLL样受体2 巨噬细胞

含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区报告基因载体的构建和鉴定: 2014年; 目的利用pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector(简称为pmirGLO报告基因载体)构建并鉴定含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区报告基因载体(pmir-Insr-3′UTR及pmirmutant-Insr-3′UTR)。方法以大鼠肝脏cDNA为模板,PCR获取目的片段(即含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区);用PmeI、XbaI双酶切pmirGLO报告基因载体和含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pmir-Insr-3′UTR及pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中均插入目的片段;DNA测序结果进一步证实pmir-Insr-3UTR重组载体中成功插入了胰岛素受体mRNA 3′UTR区,pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中成功插入了在miR-497结合位点含有3个突变碱基的胰岛素受体mRNA 3′UTR片段。结论成功构建了含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR报告基因载体pmir-Insr-3′UTR及pmir-mutant-Insr-3′UTR。; 王美晨王璇蓝茜李玥刘莉伊静李靖宋刘梅马莎蕊宁启兰李冬民; 关键词：胰岛素受体

转录因子Smad2高表达载体的构建和鉴定: 2015年; 目的构建并鉴定大鼠转录因子Smad2的高表达载体(简称pLJM1-Smad2)。方法首先以E3大鼠肝脏cDNA为模板、PCR法获取转录因子Smad2 mRNA CDS区(即目的基因片段);然后用Age I、EcoR I双酶切pLJM1-MGFP载体和目的基因片段,用T4DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;之后再将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,扩大培养并提取重组质粒;最后用PCR、Age I和EcoR I双酶切以及DNA测序鉴定重组质粒。结果 PCR、Age I和EcoR I双酶切结果均提示pLJM1-Smad2重组载体中插入了目的片段Smad2;将含有目的片段的阳性重组体克隆送上海生工进行DNA测序,并将测序结果与NCBI数据库的进行比对,确定插入片段无突变、序列完全正确,证实pLJM1-Smad2重组载体中成功插入了目的基因片段Smad2。结论成功构建了转录因子Smad2的高表达载体pLJM1-Smad2。; 伊静李靖王璇蓝茜李玥刘莉梁栋杜小娟武丽涛闫小飞杨旭东张富军李冬民

全选清除导出

共1页<1>

伊静

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

伊静

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈