黄志强
- 作品数:6 被引量:2H指数:1
- 供职机构:吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金:广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域:农业科学医药卫生更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒JL07SW株Nsp9基因的序列分析及原核表达被引量:1
- 2011年
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株及变异毒株(HB-1、SY0608、HN-HW、HuN4等)的核苷酸序列,利用Primer软件设计合成针对PRRSV Nsp9基因保守区域的特异性引物。用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒JL/07/SW株Nsp9基因片段,克隆到pMD18-T载体并测序,基因克隆至表达载体pET-28a(+),得到重组表达载体pET-28a-Nsp9,转化BL21(DE3)细胞。经IPTG诱导,Nsp9蛋白以包涵体形式表达,SDS-PAGE分析表明重组蛋白的分子量约为34.8 kD,表达量占菌体蛋白的40.32%。Western-Blotting结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。表达的重组蛋白为进一步制备抗Nsp9单抗及建立区分野毒和灭活毒感染的ELISA方法提供物质基础。
- 黄志强张学东丁壮张泉鹏宣华
- 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒原核表达
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒JL/07/SW株NSP9基因的克隆及序列分析
- 目的:猪繁殖与呼吸综合征病毒属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属,本研究以PRRSV Nsp9基因为研究对象,分析猪繁殖与呼吸综合征病毒在吉林地区的流行变异趋势,为猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病调查提供技术基础。结论:由于灭...
- 黄志强杨闽楠丁壮赛度张泉鹏孙聪
- 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒克隆技术免疫原性
- 抗猪呼吸与生殖综合征病毒Nsp9蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量:1
- 2012年
- 目的制备抗猪呼吸与生殖综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Nsp9蛋白单克隆抗体,并进行初步鉴定。方法用纯化的重组Nsp9蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV Nsp9蛋白单克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验分析单抗的特异性;使用免疫球蛋白标准亚类鉴定试剂盒鉴定单抗的亚类;将杂交瘤细胞分别保存1、2、3、4个月后复苏,采用间接ELISA法检测细胞分泌抗体的能力。结果共获得3株可稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为2D6、3C11和4E6,其细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶6 400、1∶3 200和1∶1 600,腹水的ELISA效价分别为1∶640 000、1∶512 000和1∶256 000。3株单抗均可与Nsp9蛋白和PRRSV特异性结合;2D6和3C11株单抗的Ig亚型为IgG1,4E6株单抗为IgM亚类抗体;3株杂交瘤细胞保存4个月均能稳定分泌单抗。结论已制备抗PRRSVNsp9蛋白单克隆抗体,其特异性高,稳定性良好,为建立鉴别自然感染与注射疫苗感染PRRSV的诊断方法提供了材料。
- 吴娟王潇博黄志强杨闽楠丁壮
- 关键词:单克隆抗体
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪的组织定位研究
- 本研究以猪繁殖与呼吸综合征病毒吉林分离株和本实验研制的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9基因单克隆抗体为研究材料。研究猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪40d后,用免疫组化方法观察猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原的分布。病毒在肾小管上...
- 黄志强杨闽楠丁壮张泉鹏赛度
- 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞增殖单克隆抗体免疫组织化学法
- RNAi靶向N基因抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的复制
- 本试验根据编码猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)的序列,设计3个干扰靶位,构建siRNA表达载体(p2.1-N12, p2.1-N23, p2.1-N26),转染Marc-145细胞后接毒,测定病毒...
- 杨闽楠赛度丁壮黄志强李志杰
- 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白病毒复制抗病毒感染
- 去除ADE表位的PRRSV GP5重组蛋白腺病毒载体的构建
- 本研究通过改造GP5基因,去除产生ADE效应的A表位构建重组腺病毒,为以后研究ADE产生机理及PRRS新型疫苗奠定基础。
- 杨闽楠黄志强丁壮赛度张泉鹏
- 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒腺病毒载体