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麦广良
作品数:
2
被引量:1
H指数:1
供职机构:
同济大学医学院
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发文基金:
上海市结核病(肺)重点实验室开放基金
江苏省卫生厅科研基金
江苏省卫生厅预防医学科研基金
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相关领域:
医药卫生
生物学
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合作作者
黄利华
无锡市第五人民医院
蒯守刚
无锡市第五人民医院
刘君
无锡市第五人民医院
裴豪
无锡市第五人民医院
崔振玲
同济大学医学院
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作者
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刘忠华
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蒯守刚
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麦广良
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2013
1篇
2012
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结核分枝杆菌Rv3671c基因的克隆表达及免疫印迹检测
被引量:1
2012年
目的构建结核分枝杆菌Rv3671c蛋白的重组质粒,在大肠埃希菌中表达并纯化重组蛋白Rv3671c,并评价结核分枝杆菌Rv3671c结构域多肽的免疫学特性。方法将编码结核分枝杆菌Rv3671c蛋白的基因克隆到pET-28a载体,并在大肠埃希菌中表达,镍亲和层析和离子层析法纯化重组Rv3671c蛋白,透析复性和Lowry法测定蛋白质浓度。对蛋白质悬液进行SDS-PAGE分析并进行免疫印迹检测。结果结核分枝杆菌Rv3671c蛋白在大肠埃希菌中成功表达,层析纯化获得纯度为95.0%的重组Rv3671c蛋白,免疫印迹检测显示重组表达蛋白与结核病患者混合血清具有良好亲和性。结论 Rv3671c结构域多肽可作为新的结核病血清学检测方法的候选抗原肽组分。
蒯守刚
崔振玲
黄利华
刘忠华
麦广良
裴豪
刘君
何琳静
关键词:
结核分枝杆菌
结核
抗原
细菌蛋白质类
结核分枝杆菌Rv3671c蛋白诱导人巨噬细胞死亡及TNF-α和IL-1β水平检测
2013年
目的评价MTBRv3671c蛋白对人巨噬细胞(THP-1)的影响及机制。方法将编码MTBRv3671c蛋白的基因克隆到pET-28a质粒,并在大肠埃希菌中进行表达,采用镍亲和层析和离子层析法纯化重组Rv3671c蛋白,Lowry法测定蛋白浓度,并用纯化蛋白刺激分化成熟巨噬细胞,采用Hochest染色法观察细胞的转归(凋亡及坏死)情况,同时取上清液用ELISA法检测TNF-α和IL-1β的浓度。结果MTBRv3671c蛋白在大肠埃希菌中成功表达,层析纯化获得纯度为95.0%的重组Rv36710蛋白,蛋白浓度可达0.4mg/ml。Rv3671c蛋白刺激下经Hochest染色可见巨噬细胞核以坏死状多见,上清液中TNF-α和IL-1B水平最高分别可达19000、16500pg/ml;而未加蛋白干预组TNF-α和IL-1β水平最高仅为2100、3800pg/ml,均明显低于干预组。结论MTBRv36710蛋白可诱导人THP-1坏死,而该死亡可能与细胞因子TNF-α和IL-1β高表达有关。
蒯守刚
裴豪
黄利华
刘忠华
麦广良
刘君
崔振玲
关键词:
细胞死亡
细菌蛋白质类
巨噬细胞
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