马瑞娟
- 作品数：9 被引量：4H指数：1
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省科技厅省部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人腺苷激酶在大肠杆菌中的表达与纯化
- 2010年
- 目的诱导人腺苷激酶重组蛋白在大肠杆菌中表达,并对表达的重组蛋白进行纯化。方法将由人腺苷激酶基因开放阅读框与原核表达载体pET30a(+)连接构建的重组蛋白表达载体pET30a(+)/ADK转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞。1mmol/L的IPTG诱导重组蛋白表达。离心收集菌体后结合使用溶菌酶、冻融和超声破碎的方法裂解菌体。用含2mol/L和4mol/L尿素的结合缓冲液洗涤包涵体去除部分杂蛋白。随后用含8mol/L尿素的结合缓冲液变性溶解剩余包涵体沉淀。用Ni-NTA柱通过亲和层析纯化重组蛋白,用含8mol/L尿素的洗脱缓冲液洗脱,收集样品透析复性。结果成功构建人腺苷激酶原核表达载体且目的蛋白以包涵体形式表达。经包涵体洗涤、变性溶解,亲和层析及分步透析复性获得纯度达85%以上的重组蛋白。结论人腺苷激酶表达载体的成功构建以及重组蛋白的纯化,为进一步进行其结构和功能的研究奠定了基础。
- 黄湘马瑞娟孙敏英杨学习
- 关键词：腺苷激酶纯化包涵体复性
- 人14-3-3β蛋白的原核表达、抗血清制备及真核表达载体的构建
- 2009年
- 目的纯化原核表达的14-3-3β（YWHAB）重组蛋白并制备多抗血清，构建适用于哺乳动物细胞的真核表达载体。方法将重组蛋白表达载体pET30a（＋）／YWHAB转化大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）感受态细胞，异丙基-β—D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达，镍-四齿螯合剂mi_NTA）亲和层析柱纯化重组蛋白；以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB／c小鼠，应用ELISA和Western blot方法分别检测抗血清的效价和特异性；应用PCR扩增添加BamHI和EcoRI酶切位点把YWHAB的ORF亚克隆至真核表达载体pEGFP-N1，添加BamHI和HindllI酶切位点把YWHAB的开放阅读框（ORF）亚克隆至真核表达载体pCDNA3．1（＋），对重组载体进行酶切和PCR鉴定。结果YWHAB重组蛋白以可溶性形式表达，分子量为32000，与预期分子量一致；纯化后的重组蛋白纯度达90％以上，ELISA结果显示其抗血清的效价为1：50000，Western blot结果表明抗血清的特异性较好：酶切和PCR鉴定结果表明真核表达载体pEGFP-N1／YWHAB和pCDNA3．1（＋）／YWHAB构建成功。结论通过亲和层析纯化获得人14—3—3β重组蛋白，进而免疫BALB／c小鼠制备多抗血清．为进一步研究人14-3-3β的功能成功构建了其真核表达载体。
- 杨学习孙敏英马瑞娟徐伟文李明
- 关键词：原核表达纯化抗血清
- GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11及其制备方法和应用
- 本发明公开了GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11及其制备方法和应用，属于细胞工程技术领域。本发明的GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11，保藏编号为CGMCCNo.5426。该杂交瘤细胞株7D11的制备方法为：以GPC...
- 徐伟文马瑞娟王穗海李明
- 文献传递
- 肝癌早期诊断用新标志物GPC3临床检测试剂研发及应用研究
- 研究背景及目的恶性肿瘤是威胁人类生命的严重疾病,恶性肿瘤死亡率已占据我国人类疾病谱的第1位。其中肝细胞肝癌(hepatocellulaur carcinoma,HCC)是全球第六大肿瘤,据估计,全世界每年有超过100万新...
- 马瑞娟
- 关键词：GPC3克隆化学发光免疫分析免疫组织化学
- 文献传递
- GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6及其制备方法和应用
- 本发明公开了GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6及其制备方法和应用，属于细胞工程技术领域。本发明的GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6，保藏编号为CGMCC No.5427。该杂交瘤细胞株8G6的制备方法为：以GPC3蛋...
- 马瑞娟徐伟文李明
- 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3特异性抗体对肝细胞癌临床诊断的初步应用被引量：4
- 2013年
- 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)对肝细胞癌(HCC)的诊断具有很高的敏感性和特异性,是具有前景的肿瘤标志物.本文的目的是应用抗人-GPC3单克隆抗体7D11(7D11McAb),通过免疫组化(IHC)的方法检测HCC组织中的GPC3蛋白,并初步评价其诊断HCC的临床应用价值.通过对HCC病理组织、正常肝脏组织和胆管细胞癌(ICC)病理组织进行免疫组化染色来评价7D11McAb的可应用性.同时,应用7D11McAb作为检测抗体对40例HCC,7例ICC和50例正常人的血清GPC3进行检测.免疫组化结果显示,GPC3蛋白在85%(34/40)HCC组织高表达,而在正常人和ICC病人的组织中阳性率均为0%(0/50和0/7).血清学检测结果显示,GPC3在HCC,正常人和ICC病人的血清中阳性率分别为:42.5%(17/40),0%(0/50%)和0%(0/7).7D11McAb的制备为GPC3能大规模应用于临床奠定了基础.
- 余娟平马强张斌马瑞娟许细广李明松徐伟文李明
- 关键词：肝细胞癌免疫组化
- GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11及其制备方法和应用
- 本发明公开了GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11及其制备方法和应用，属于细胞工程技术领域。本发明的GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11，保藏编号为CGMCCNo.5426。该杂交瘤细胞株7D11的制备方法为：以GPC...
- 马瑞娟徐伟文李明
- GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6及其制备方法和应用
- 本发明公开了GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6及其制备方法和应用，属于细胞工程技术领域。本发明的GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6，保藏编号为CGMCCNo.5427。该杂交瘤细胞株8G6的制备方法为：以GPC3蛋白...
- 徐伟文马瑞娟王穗海李明
- 文献传递
- X染色体连锁凋亡抑制蛋白的表达、纯化及多抗血清的制备
- 2011年
- 目的:纯化原核表达载体表达的XIAP重组蛋白并制备多抗血清。方法:将重组蛋白原核表达载体Pet30a(+)/XIAP转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞,1 mmol/L的IPTG诱导重组蛋白表达。离心收集菌体后结合使用溶菌酶、冻融和超声破碎的方法裂解菌体,用含2 mol/L和4 mol/L尿素的结合缓冲液洗涤包涵体去除部分杂蛋白,随后用含8 mol/L尿素的结合缓冲液变性溶解剩余包涵体沉淀。用Ni-NTA柱通过亲和层析纯化重组蛋白且目的蛋白用含8 mol/L尿素的洗脱缓冲液洗脱,收集样品透析复性。以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用ELISA方法检测抗血清的效价。结果:成功构建人XIAP重组蛋白原核表达载体且目的蛋白以包涵体形式表达,分子量约54 kD,与预期的一致,经包涵体洗涤、变性溶解,亲和层析及分步透析复性获得纯度达90%以上的重组蛋白,ELISA结果显示其抗血清的效价为1∶50 000。结论:成功构建人XIAP表达载体以及纯化重组蛋白,免疫小鼠制备多抗血清,为进一步研究XIAP的功能、研制诊断试剂奠定了基础。
- 马瑞娟孙敏英杨学习徐伟文
- 关键词：XIAP原核表达纯化包涵体抗血清
