马云龙
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
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- 胃肠肿瘤患者外周血树突状细胞功能失调与CD4^＋CD25^＋T细胞失衡的临床意义
- 2008年
- 目的:探讨胃肠肿瘤(GIC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)来源树突状细胞(DCs)和CD4+CD25+T细胞(Tregs)的免疫功能状态,以及其与肿瘤临床病理分期和手术的关系。方法:收集早期胃肠癌(Ⅰ/Ⅱ期)患者术前、术后第7天以及晚期癌(Ⅲ/Ⅳ期)患者外周血,以健康成人外周血为对照。提取单个核细胞(PBMCs),流式细胞术(FACS)分别检测Tregs占CD4+T细胞的比例。PBMCs经贴壁法分离提取DCs,经rhGM-CSF、rhIL-4体外扩增培养至第5天,获得未成熟DCs(imDCs),FACS检测表型;imDCs经rhTNF-α诱导培养至第7天,获得成熟DCs(mDCs),MTT法和ELISA法分别检测mDCs与自体T细胞混合培养时mDCs刺激T细胞增殖能力以及上清液中IFN-γ的含量。结果:晚期胃肠癌患者imDCs表型HLA-DR、CD80及CD86均显著低于健康成人和早期癌患者(P<0·01);早期胃肠癌术后第7天患者imDCs表型HLA-DR及CD86表达显著低于健康成人(P<0·05)。晚期胃肠癌患者mDCs刺激自体T细胞增殖及分泌IFN-γ的能力与健康成人相比均有所减弱(P=0·073,P=0·182)CD4+T细胞中Tregs的比例显著低于健康成人和早期癌患者(P<0·001);早期胃肠癌患者术后Tregs比例略低于术前(P=0·148)及健康成人(P=0·068)。HLA-DR、CD86表达与Tregs比例呈负相关性。结论:胃肠肿瘤患者尤其晚期和术后患者外周血DCs功能失调以及Tregs失衡可能和机体抗肿瘤细胞免疫耐受密切相关。
- 马云龙郑峥李保东谢绍建李桂馨薛平蔡建辉
- 关键词：胃肠肿瘤树突状细胞CD4^+CD25^+T细胞免疫耐受
- 细胞周期相关蛋白在大肠癌中的表达及其意义被引量：3
- 2007年
- 目的探讨细胞周期相关蛋白在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化S-P法对70例大肠癌组织及距癌灶3cm以外的癌旁组织、10cm以外的正常组织中Cyclin D1、CDK4、p16和Rb进行检测。结果Cyclin D1和CDK4在大肠癌中过度表达,分别为36/70(51.4%)和28/70(40.0%),并与肿瘤的分化程度呈反比,有淋巴结转移的大肠癌,其CyclinD1和CDK4的阳性率分别为70.0%和60.0%,无淋巴结转移的大肠癌阳性率分别为44.0%和32.0%,两者相比差异有显著性(P<0.05),p16在大肠癌中为低表达33/70(47.1%),癌旁组织和正常组织中p16的表达分别为57.1%和71.4%,Rb在大肠癌、癌旁及正常组织中的表达分别为65.7%、78.6%和85.7%。Cyclin D1与CDK4呈正相关关系(P<0.05)。Cyclin D1与p16、p16与Rb是负相关关系(P<0.05、P<0.05)。结论CyclinD1、CDK4的过度表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关;p16的表达可能受Rb蛋白的负调控;CyclinD1的过度表达和p16的低表达在大肠癌发生中起协同作用;
- 陈小贺孟文格李保东马云龙付泽娴谢绍建蔡建辉
- 关键词：大肠癌细胞周期素D1CDK4P16蛋白RB蛋白
- 树突状细胞疫苗联合胸腺肽α1对人源化免疫重建裸鼠结肠癌生长的抑制效应被引量：5
- 2007年
- 目的观察胸腺肽α1(Ta1)联合结肠癌细胞裂解物致敏树突状细胞(LyDCs)对人源化免疫重建裸鼠结肠癌的免疫治疗效应。方法常规DCs负载结肠癌细胞裂解物制备LyDCs疫苗,流式细胞仪(FCM)检测Tα1体外刺激前、后的LyDCs表型。HT-29结肠癌裸鼠模型成瘤后,经尾静脉注射人外周血T淋巴细胞6×10~6个/只,2d后,FCM检测裸鼠外周血人源性CD4^+、CD8^+ T细胞;将人源化免疫重建裸鼠分为3组,分别用LyDCs+Tα1、LyDCs和生理盐水皮下免疫注射治疗;治疗后7 d,体外观察各组裸鼠脾脏淋巴细胞的肿瘤杀伤作用及IFN-γ、IL-4分泌水平,实验结束时,观察LyDCs联合Tα1对荷瘤裸鼠的体内抑瘤作用。结果LyDCs的表型HLA-DR、CD80、CD86、CD83较刺激前明显上调;免疫重建裸鼠均检测到人源性CD4^+、CD8^+T细胞;LyDCs+Tα1组裸鼠脾脏T淋巴细胞的肿瘤杀伤作用与LyDCs组比较差异有统计学意义(P<0.01),LyDCs+ Tα1组T细胞的IFN-γ分泌水平与LyDCs组比较差异有统计学意义(P<0.01);接种HT-29细胞58 d后,LyDCs+Tα1组、LyDCs组抑瘤率分别为60.41%、37.20%,两组之间抑瘤效应比较差异有统计学意义(P<0.01),两组的抑瘤效应与对照组比较分别(P<0.01)。结论Tα1能增强LyDCs诱导的CD4^+Th1细胞反应和CTLs杀伤效应,对DCs疫苗的抗癌免疫治疗功效具有明显的放大作用。
- 马云龙郑铮郭华李保东谢绍建李桂馨刘津刘三光闫庆辉薛平蔡建辉
- 关键词：树突状细胞胸腺肽
- 树突状细胞疫苗在人源化裸鼠体内的抗肿瘤免疫保护作用
- 2007年
- 目的探讨树突状细胞(DCs)疫苗在人源化裸鼠体内的抗胃癌免疫保护作用。方法制备DCRNA疫苗;建立人源化裸鼠模型;15只人源化裸鼠随机分为DCRNA组、DCs组和PBS组,每组5只,分别用DCRNA、DCs和PBS皮下免疫注射2次,间隔1周,末次免疫后3天皮下接种胃癌细胞。各组裸鼠外周血人源性CD4(T细胞和CD8(T细胞的检测和观察GVHD反应。观察裸鼠瘤体积和瘤重。检测细胞因子IL-12和IFN-γ水平。结果各组HuPBTL-裸鼠外周血中均检测到人源性CD4(T细胞和CD8(T细胞,无GVHD反应。DCRNA组瘤体积明显小于DCs组和PBS组(P<0.05);DCRNA组瘤重明显小于DCs组和PBS组(P=0.0452、P=0.0004),但DCs组和PBS组差异无统计学意义(P=0.0618);DCRNA组抑瘤率(53.7%)显著高于DCs组(25.1%)(P<0.05)。DCRNA组IL-12和IFN-γ水平明显高于DCs组和PBS组(P<0.05、P<0.01)。结论HuPBTL腹腔注射,可成功构建裸鼠人细胞免疫功能;DC疫苗在人源化裸鼠体内能诱导产生较强的抗胃癌免疫保护作用。
- 李保东付泽娴马云龙薛平蔡建辉
- 关键词：树突状细胞裸鼠人源化细胞免疫
- 载体介导的RNAi对胰腺癌细胞交叉抑制的研究
- 2008年
- 国内外研究结果显示，以K-ras基因突变位点在内的mRNA片段作为靶序列设计的shRNA（短发卡RNA），能有效的抑制相应突变型K—ras基因的表达和细胞的增值，且不影响野生型K—ras基因的表达。我们针对突变类型为GAT和GTT的K—ras基因序列，分别设计shRNA，并构建pGenesile-1 GAT和pGenesil-1 GTY质粒，将其分别交叉转染到具有该两种突变类型的PANC-1和CFPAC-1细胞株中，观察shRNA质粒对突变型K—ras基因的特异性抑制和交叉抑制效应。
- 郑峥郑志刚郭华张国建段国强马云龙李桂馨孟繁杰闫庆辉薛平蔡建辉
- 关键词：胰腺癌细胞RNAI载体介导RAS基因K-RAS基因突变位点
- 胸腺肽α1联合DC疫苗对结肠癌体内外抗肿瘤的效应被引量：5
- 2007年
- 目的:观察胸腺肽α1(Tα1)对结肠癌细胞裂解物(TuLy)负载DC(LyDC)的表型和功能的影响,以及二者联合应用对裸鼠结肠癌的治疗作用。方法:从健康人外周血单个核细胞中常规诱导培养未成熟DC(imDC),并负载TuLy后制备LyDC疫苗。Tα1体外刺激imDC、LyDC,流式细胞术(FCM)检测DC表型变化;ELISA法检测LyDC与自体T细胞共培养时,Tα1对LyDC分泌IL-12以及活化T细胞分泌IFN-γ水平的影响;MTT法检测LyDC经Tα1刺激后所诱导的细胞毒活性的变化。对HT-29结肠癌裸鼠模型行人源化T细胞免疫重建,观察LyDC与Tα1联合应用时的体内抗肿瘤效果。结果:Tα1刺激后的imDC、LyDC表型HLA-DR、CD80、CD86、CD83均上调(P<0.01);Tα1刺激组上清液中细胞因子IL-12和IFN-γ的水平较未刺激组增加(P<0.05,P<0.01);LyDC经Tα1刺激后诱导的CTL细胞毒活性较未经Tα1刺激组增强(P<0.01)。结肠癌裸鼠模型体内的人源化细胞免疫重建成功,在接种HT-29细胞58d后,LyDC+Tα1组和LyDC组的抑瘤率分别为60.41%和37.20%,二组之间瘤体积及瘤质量比较具有统计学意义(P<0.01)。结论:Tα1可促进DC分化成熟,并能增强LyDC诱导的CD4+Th1细胞反应和CTL的杀伤效应。Tα1与LyDC疫苗联合应用时具有较好的免疫佐剂活性和抗肿瘤作用。
- 马云龙郑铮李保东谢绍建李桂馨闫庆辉蔡建辉
- 关键词：树突状细胞胸腺肽Α1结肠肿瘤免疫治疗
