陈萌萌
- 作品数：73 被引量：84H指数：5
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 鉴别检测兔出血症病毒1型、2型双抗体夹心ELISA方法的建立及应用被引量：1
- 2023年
- 为实现对兔出血症病毒1型(RHDV1)和兔出血症病毒2型(RHDV2)的有效鉴别诊断,从而有效预防和控制兔出血症,将抗RHDV广谱单抗2A11作为捕获抗体包被于ELISA板,以HRP标记的抗RHDV1特异性单抗1D4、抗RHDV2特异性单抗6B3分别作为检测抗体,经条件优化,建立了鉴别检测兔出血症病毒1型、2型的双抗体夹心ELISA方法,并进行敏感性、特异性试验,对送检的60份兔肝脏样品用该双抗体夹心ELISA方法和RT-PCR方法进行检测,比较这2种方法的符合率。结果显示,该双抗体夹心ELISA方法的最佳工作条件为:捕获抗体浓度为4μg/mL,2种HRP标记的检测抗体的浓度均为0.5μg/mL;判定标准为:以检测抗体HRP-1D4检测样品D值>0.195判为RHDV1阳性,以检测抗体HRP-6B3检测样品D值>0.166判为RHDV2阳性;通过特异性和敏感性试验发现,该双抗体夹心ELISA方法具有较强特异性和较高敏感性。检测60份送检的兔肝脏样品,发现本方法与RT-PCR方法相比,检测RHDV1阳性样品的符合率为100%(9/9),RHDV2阳性样品的符合率为82.61%(19/23),阴性样品的符合率为87.5%(28/32),总符合率为93.33%(56/60),且该方法阳性样品检出率高于RT-PCR方法。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法可有效地鉴别检测RHDV1和RHDV2这2种不同基因型的病毒,为兔出血症的流行病学研究提供有力的技术支撑。
- 陈兴继魏后军范志宇范志宇宋艳华胡波仇汝龙宋艳华王芳
- 关键词：兔出血症病毒双抗体夹心ELISA单抗
- 新西兰兔Nrf2基因的克隆、序列分析及组织表达被引量：1
- 2020年
- 为分析Nrf2基因在新西兰兔不同组织的表达差异情况,本试验根据GenBank公布的穴兔Nrf2基因序列设计了特异性引物,从兔肝脏中扩增出Nrf2基因并进行了生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR技术研究了Nrf2基因在新西兰兔各组织中的表达差异。结果显示,扩增出的新西兰兔Nrf2基因长度为1 758 bp,编码585个氨基酸。序列比对结果显示,新西兰兔与穴兔、人、牛、鼠、斑马鱼等各种属动物Nrf2基因的核苷酸一致性为50.70%~99.83%。进化树分析表明Nrf2在物种间具有较高的保守性。实时荧光定量PCR结果显示,Nrf2基因在新西兰兔的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑中均有表达,且肾脏中表达量最高,脾脏中表达量最低。本试验克隆了新西兰兔Nrf2基因,并研究了其mRNA在兔各组织中的表达情况,为开展兔Nrf2/ARE信号通路的研究奠定了基础。
- 胡波魏后军范志宇仇汝龙陈萌萌宋艳华朱伟峰徐为中王芳
- 关键词：克隆新西兰兔
- 江苏及周边地区家兔腹胀发病情况调查
- 本文对江苏及周围地区家兔腹胀的发病情况、临床症状、发病原因等进行了调查和分析,并结合实际情况采取了相应的防控措施。调查和分析结果显示,这些地区家兔腹胀主要发生于断奶后至4月龄兔,发病率一般在30%～50%,死亡率50%以...
- 范志宇薛家宾王芳胡波魏后军宋艳华仇汝龙陈萌萌朱伟峰
- 关键词：腹胀病因防控措施
- 文献传递
- 4种重要外来病毒高通量液相芯片检测方法的建立
- 2021年
- 为建立小反刍兽疫病毒(PPRV)、西尼罗病毒(WNV)、裂谷热病毒(RVFV)和南非型口蹄疫病毒(SAT FMDV)的高通量液相芯片检测方法,根据GenBank上公布的PPRV的N蛋白基因序列、WNV的E蛋白基因序列、RVFV的S片段基因序列和FMDV的5′UTR区基因序列,并基于各基因保守区设计相应的引物和探针。通过对多重PCR的上游、下游引物比例、杂交温度、杂交时间进行条件优化,并验证检测方法的特异性和敏感性。敏感性试验显示,该方法对于PPRV、WNV、RVFV以及FMDV 4种病毒最低检出量分别为5.78×10^(3)、2.15×10^(3)、2.98×10^(5)、9.54×10^(4) copies/μL。本研究建立的高通量液相芯片检测方法能够同时快速地检测4种外来病病毒,具有良好的特异性、敏感性和稳定性,对于流行病学调查和防范外来动物疫病具有重要的意义。
- 仇汝龙阮智杨胡波魏后军范志宇宋艳华陈萌萌徐为中王芳
- 关键词：液相芯片基因序列流行病学
- PCV2人工感染对猪肺泡巨噬细胞干扰素信号通路的调控研究被引量：1
- 2016年
- 通过建立PCV2亚临床感染模型,探究感染仔猪肺泡巨噬细胞中干扰素的变化及其调控,为PCV2复制和发病机制研究提供补充。30日龄猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性的仔猪15头,随机分成PCV2阴性对照0d组、PCV2感染14d组和PCV2感染28d组。感染后荧光定量PCR方法检测肺泡巨噬细胞中干扰素、模式识别受体和模式识别受体接头分子mRNA水平。结果显示,IFN-β和IFN-γmRNA转录水平在14和28d均显著高于对照组(P<0.05);模式识别受体RIG-1、MDA-5、TLR4和TLR9mRNA转录水平在14和28d显著升高(P<0.05);DAI mRNA转录水平在14d显著升高(P<0.05),但28d迅速下降;TLR3、TLR7和TLR8mRNA转录水平无明显变化。接头分子MAVS、MyD88、IRF3和IRF7mRNA转录水平在14和28d均显著高于对照组(P<0.05)。以上结果表明,PCV2亚临床感染仔猪后导致肺泡巨噬细胞内IFN-β和IFN-γ的表达量上调,其上调和PCV2激活的TLR4/TLR9/MyD88和RIG-1/MDA-5/DAI/MAVS/IRF3信号通路有关。
- 赵其岭张新晨陈萌萌孙嘉瑞鲍恩东张书霞吕英军
- 关键词：PCV2仔猪肺泡巨噬细胞干扰素模式识别受体
- 我国首株兔出血症病毒2型的致病性及病理学初步研究被引量：6
- 2020年
- 为深入研究国内首次发现并鉴定的兔出血症病毒2型(RHDV2)四川分离株SC2020/04的致病性,用SC2020/04 RHDV2分离株,以皮下注射方式感染25日龄仔兔和4月龄成年兔,记录家兔发病情况,对病死兔进行剖检,并取肝脏样品进行血凝(HA)和核酸检测,取心、肝、脾、肺、肾、十二指肠等组织制作病理切片,进行病理学研究。试验结果显示,感染后仔兔18 h出现死亡,成年兔40 h出现死亡,死亡率均为5/5;感染后试验兔出现典型兔瘟临床症状,濒死时四肢抽搐、角弓反张,部分死亡兔可见口鼻流出红色血液;剖检主要病变为肝脏肿大并伴有明显的小叶样改变,脾肿大,肺、肝、脾和肾出现充血和弥漫性瘀点出血,腹腔内有血样渗出物;血凝试验结果显示,病死仔兔和成年兔肝脏血凝效价没有明显差异;采用鉴别经典RHDV/RHDV2的RT-PCR方法检测攻毒死亡兔肝脏样品,结果显示为RHDV2阳性;病理学观察可见多脏器严重出血、肿胀,淋巴细胞和中性粒细胞大量浸润,病死仔兔十二指肠组织严重糜烂,成年兔十二指肠病变较轻。本研究对我国首个RHDV2毒株进行了致病性初探和病理学观察,研究结果可以为RHDV2疫苗研发和致病机理研究奠定基础。
- 范志宇陈萌萌胡波魏后军宋艳华仇汝龙薛家宾王芳
- 关键词：临床症状剖检病变病理学观察
- 一株兔源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的分离和鉴定被引量：2
- 2021年
- 为确定山东某兔场母兔子宫内膜炎病原,从病死兔子宫内膜炎的子宫脓液中分离到一株细菌,并对细菌进行了鉴定。结果显示,通过瑞氏染色、特异性PCR以及荚膜血清分型PCR鉴定,确定该株致病菌为荚膜血清D型的多杀性巴氏杆菌,命名为SDZG0324;通过多位点序列分析,确定该株致病菌为ST11型;利用Mega X生物学软件进行基因进化分析,表明该菌与多杀性巴氏杆菌经典菌株处于同一大分支,但是却为独立的分支;药敏试验表明,该菌对氨苄西林和庆大霉素2种药物耐药,对青霉素、环丙沙星和复方新诺明等6种抗生素敏感。说明在发生兔子宫内膜炎的样本中分离到荚膜D型多杀性巴氏杆菌,丰富了子宫内膜炎病原学资料,同时为该病的防控提供了理论指导。
- 仇汝龙范志宇薛家宾胡波魏后军陈萌萌宋艳华朱伟峰徐为中王芳
- 关键词：子宫内膜炎多杀性巴氏杆菌抗生素
- 无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白的自诱导分泌表达及免疫原性分析
- 2022年
- 为获得分泌表达的无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白并分析其免疫原性,根据A型产气荚膜梭菌α毒素基因序列,对α毒素的第176位组氨酸突变为天冬酰胺,同时对信号肽序列进行密码子优化,将化学合成的该序列插入到载体pET32a,获得重组质粒pET32a-αH176N,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),通过自诱导的方法分泌表达重组αH176N蛋白。SDS-PAGE及Western blot分析结果显示,αH176N蛋白在乳糖1~2 g/L、28℃诱导条件下高效分泌表达。卵磷脂酶试验及小鼠毒力试验显示,αH176N蛋白失去磷脂酶C活性及毒性。免疫保护试验结果显示,αH176N蛋白与氢氧化铝胶配制成的疫苗,以0.25 mL/只免疫试验兔就能达到100%(6/6)的免疫保护效果,优于传统灭活疫苗免疫2 mL/只的保护效果。
- 魏后军范志宇胡波仇汝龙陈萌萌宋艳华徐为中王芳
- 关键词：产气荚膜梭菌Α毒素分泌表达免疫原性
- PCV2通过NF-κB信号途径调节体外培养仔猪淋巴细胞IL-4和IL-12的分泌
- 研究目的：研究猪圆环病毒2 型(porcine circovirus 2, PCV2)对仔猪淋巴细胞分泌IL-4 和IL？12动态影响及其调控的信号途径,旨在进一步了解PCV2 引起仔猪免疫抑制的机制及防治PCVD 的新...
- 段滇宁郭华李晓琳陈萌萌张亚群韩俊源张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型感染信号途径淋巴细胞
- PCV2诱导PAMs分泌Ⅰ型干扰素信号途径初探
- 为了研究PCV2引发的仔猪肺泡巨噬细胞(PAMs)分泌Ⅰ型干扰素的机制.选用14头经ELISA和荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体和抗原均为阴性的普通断奶仔猪,...
- 陈萌萌张亚群韩俊源段滇宁张书霞
- 关键词：猪圆环病毒猪肺泡巨噬细胞信号途径
