陈希
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：河北师范大学更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Arg77和Glu80定点突变同时去除葡激酶中的T和B细胞抗原表位(英文)被引量：4
- 2011年
- 【目的】对葡激酶的T和B细胞抗原表位重叠的关键氨基酸Arg77和Glu80进行定点突变以降低葡激酶的免疫原性。【方法】基于Arg77和Glu80的溶剂可及表面积设计葡激酶的突变体;突变体在大肠杆菌DH5α中进行表达。经过三步层析法纯化后,分析突变体的纤溶活性和免疫原性。【结果】免疫学实验提示,葡激酶导致Th2免疫反应;Glu80突变为丙氨酸和丝氨酸减少了溶剂可及表面积,同时去除了部分T和B细胞抗原表位;Arg77突变为天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸仅去除了部分T细胞抗原表位;6个组合突变体中,Sak(R77Q/E80A)和Sak(R77Q/E80S)有效去除了部分B和T细胞抗原表位,降低了葡激酶的免疫原性;Sak(R77Q/E80A)and Sak(R77Q/E80S)的纤溶活性和催化效率与r-Sak相当。
- 徐瑞光贺进田贾锴陈希刘建伟朱科
- 关键词：葡激酶B细胞抗原表位免疫原性蛋白质工程
- 一种低免疫原性葡激酶突变体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种低免疫原性的重组葡激酶突变体的蛋白结构和制备方法。本发明涉及了低免疫原性的重组葡激酶突变体的分子结构，通过PCR定点突变技术直接得到重组葡激酶突变体的表达质粒，转化大肠杆菌，经过发酵培养，诱导表达，破碎菌...
- 贺进田徐瑞光陈希贾锴
- 具有抗血小板聚集功能的新型葡激酶突变体的表达、纯化及性质被引量：5
- 2008年
- 【目的】为解决溶栓后再栓塞问题,构建N-端含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的葡激酶双功能突变体。研究突变体的表达和纯化,并进行性质分析。【方法】将突变后的葡激酶突变体序列连入pBV220质粒,转化大肠杆菌BL21进行表达。阳离子交换、凝胶过滤和阴离子交换三步层析法纯化表达产物,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定,并测定纯化产物对血小板聚集的抑制效应。【结果】PAGE扫描结果显示,葡激酶突变体蛋白在大肠杆菌BL21中的表达量约占菌体蛋白总量的40%～50%;三步层析纯化后,HPLC测定其纯度可达95%。酪蛋白凝胶板溶圈法测得其比活性分别为10.8×104和11.0×104HU/mg,与野生型葡激酶活性相当;且具有明显的抗血小板聚集活性,血小板聚集仪测定其血小板聚集抑制率分别为10.72%和19.71%,明显高于野生型葡激酶血小板聚集抑制率。本实验利用pBV220载体高效表达了葡激酶突变体基因,得到了高纯度、高活性的突变体蛋白,为葡激酶生产产业化和临床应用奠定了良好的基础。
- 狄静芳贺进田徐瑞光陈希赵宝华
- 关键词：葡激酶RGD抗血小板聚集
- N-末端引入RGD序列的葡激酶突变体表达、纯化及性质研究被引量：2
- 2009年
- 为解决葡激酶存在的溶栓后再栓塞问题，利用PCR介导的定点突变技术，在野生型葡激酶（wt-SAK）N-末端的第3、4位氨基酸之间插入Arg-Gly-Asp（RGD）序列构建了葡激酶突变体MD2-SAK，另将N-末端的前3位氨基酸替换为RGD序列构建了葡激酶突变体MD4-SAK。将突变体基因分别连接表达载体pBV220，转化大肠杆菌DH5α，经过热激诱导后，突变体均以可溶性形式得到高效表达，表达蛋白占菌体总蛋白的50％以上。破菌上清液通过SP-Sepharose FF、Sephadex G-50和Q-Sepharose FF三步连续的色谱层析纯化得到纤溶活性分别为10．1×10^4AU／mg、11．2×10^4AU／mg，纯度均大于96％的突变体蛋白。进一步研究了突变体的性质，结果表明葡激酶突变体不仅保留了野生型葡激酶的纤溶酶原激活活性，并具有较强的抗血小板聚集活性。同时发现，葡激酶突变体的N-末端序列会影响其N-末端甲硫氨酸的酶切加工。
- 狄静芳贺进田徐瑞光陈希赵宝华
- 关键词：葡激酶
- 一种低免疫原性葡激酶突变体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种低免疫原性的重组葡激酶突变体的蛋白结构和制备方法。本发明涉及了低免疫原性的重组葡激酶突变体的分子结构，通过PCR定点突变技术直接得到重组葡激酶突变体的表达质粒，转化大肠杆菌，经过发酵培养，诱导表达，破碎菌...
- 贺进田徐瑞光陈希贾锴
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