陈元
- 作品数：13 被引量：19H指数：3
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- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金贝朗麻醉科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 吞蛋白在神经元突触囊泡回收中的作用
- 2012年
- 脑内神经元间的信息交流依赖于神经递质的释放,这一过程的有效维持离不开神经细胞突触囊泡的回收。内吞蛋白(endophilin)是神经元突触囊泡回收过程中一个重要的辅助蛋白,通过C末端的SH3结构域,en-dophilin与包括发动蛋白(dynamin)和突触囊泡磷酸酶(synaptojanin)在内的多个内吞相关蛋白结合,在网格蛋白介导的内吞中参与了从早期的膜内陷到后期的囊泡剪切和脱包被等多个环节的调控。另外,endophilin也在受体转运和神经退行性疾病中扮演着重要角色。
- 陈元张吉凤
- 关键词：ENDOPHILIN神经元突触囊泡
- EndophilinⅠ在瑞芬太尼致痛敏大鼠海马组织中表达水平的变化被引量：1
- 2016年
- 目的观察Endophilin I在瑞芬太尼致痛敏的大鼠海马组织中表达水平的变化,并研究其在痛觉过敏的作用。方法取12只雄性SD大鼠随机分为2组(每组6只),分为瑞芬太尼组和对照组。采用尾静脉输注瑞芬太尼的方法建立痛觉过敏模型,分别利用Von Frey及Hargreaves法检测瑞芬太尼输注后2h至72h的机械及热刺激撤足阈值变化。采用免疫印迹(Western blot)方法检测大鼠海马组织中Endophilin I、μ阿片受体和NR1的表达变化,并用免疫荧光(Immunofluorescence)观察Endophilin I在大鼠海马组织中的表达定位情况。结果在尾静脉输注瑞芬太尼后,机械及热刺激的结果均显示大鼠的痛觉阈值出现明显下降(P<0.01)。免疫荧光和免疫印迹的结果显示瑞芬太尼的输注可以上调大鼠海马组织中Endophilin I的表达(P<0.01),NR1和μ阿片受体则在免疫印迹的检测结果中分别呈现上调(P<0.01)和下调(P<0.01)的趋势。结论尾静脉输注瑞芬太尼可致大鼠痛觉过敏,使Endophilin I在大鼠海马组织中的表达出现上调,这可能是瑞芬太尼诱导的痛觉过敏的机制之一。
- 江文婷叶柳白雪李媛苟晨雨陈元
- 关键词：瑞芬太尼痛觉过敏ENDOPHILIN海马
- 大鼠海马神经元PKCε特异性shRNA对神经元突起生长的影响
- 2011年
- 目的构建shRNA特异性干扰海马神经元内PKCε,研究PKCε干扰后海马神经元突起长度的变化。方法设计并构建PKCε的小分子干扰shRNA载体。分别在293T细胞中共转染PKCε和各干扰片段,Western blot验证干扰效果。将有干扰作用的载体转染海马神经元,用细胞免疫荧光法验证干扰内源PKCε的效果。激光共聚焦显微镜观察并统计海马神经元突起生长的变化。结果海马神经元内部PKCε被干扰,干扰发生24 h后海马神经元突起的长度与scvamble对照相比,差异有统计学意义(P=0.02)、48 h后二者的差异无统计学意义(P=0.343)。结论海马神经元内PKCε被成功干扰,干扰后PKCε对神经元突起生长有抑制作用。
- 李秀博田琪张吉凤陈元
- 关键词：发夹RNA海马神经元蛋白激酶C
- PDLLM5与α7烟碱乙酰胆碱受体的相互作用及作用位点的研究
- 2017年
- 目的研究支架蛋白PDLIM5与神经元α7烟碱乙酰胆碱受体(α7nAChR)间的相互作用及其作用位点。方法构建PDLIM5基因及其截短片段原核、真核重组表达载体和构建α7nAChR真核重组表达载体,并在大肠杆菌中表达与纯化相关蛋白。采用GST pull down及免疫共沉淀(CO-IP)方法检测PDLIM5与α7nAChR分子间相互作用及结合位点。结果 GST pull down和CO-IP方法检测结果显示PDLIM5与α7nAChR具有相互作用,且α7nAChR与PDLIM5中的PDZ结构域具有特异的相互作用,但不与PDLIM5中的LIM结构域发生反应。结论 PDLIM5通过其PDZ结构域介导同α7nAChR的相互作用。
- 李媛李紫霖段晶晶陈元
- 关键词：GSTPULL免疫共沉淀PDZ结构域
- 脊髓PKCε和μ阿片受体参与瑞芬太尼诱导大鼠痛觉过敏被引量：8
- 2020年
- 【目的】在瑞芬太尼诱导痛觉过敏的大鼠脊髓组织中观察PKCε和μ阿片受体(MOR)的表达水平变化,探讨PKCε和MOR两者之间的关系。【方法】18只成年雄性SD大鼠随机平均分为3组(每组6只),分为空白对照组(C组)、生理盐水对照组(S组)和瑞芬太尼组(R组)。通过大鼠尾静脉输注瑞芬太尼4μg/(kg·min)给药2 h建立瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏模型。采用Hargreaves法观察瑞芬太尼输注后6、24 h的大鼠热刺激撤足阈值。通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测大鼠脊髓组织中的PKCε和MOR的表达水平,并用免疫荧光观察PKCε和MOR在大鼠脊髓组织中的分布情况。瑞芬太尼输注前30 min预先鞘内注射不同的PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I(BIS,PKC广谱抑制剂)和Gö6983(抑制PKC的亚型不包括PKCε),观察不同的PKC抑制剂预处理对瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏的影响以及检测大鼠脊髓组织MOR蛋白表达变化。【结果】输注瑞芬太尼24 h后可显著引起大鼠热痛阈值降低[PWTL=(5.31±0.87)s,P<0.01]。同时,蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR结果表明,PKCε表达上调(P<0.001)、MOR表达下降(P<0.001)。免疫荧光结果表明,在大鼠脊髓背角PKCε和MOR均与神经元存在共定位。预先鞘内注射BIS可以缓解大鼠痛觉过敏以及抑制MOR表达上调(P<0.001),而注射Gö6983则无影响(P>0.05)。【结论】脊髓背角神经元PKCε和MOR参与瑞芬太尼诱导大鼠痛觉过敏,且PKCε可能调控MOR表达水平变化,本研究将为探明瑞芬太尼诱导痛觉过敏机制提供新的理论依据。
- 于萍王晓娥崔宇陈元
- 关键词：瑞芬太尼痛觉过敏PKCΕΜ阿片受体
- 活性氧激活的脊髓星形胶质细胞参与瑞芬太尼诱发的痛觉过敏被引量：3
- 2016年
- 【目的】观察活性氧能否通过激活脊髓星形胶质细胞从而介导瑞芬太尼诱发的痛觉过敏。【方法】72只SD大鼠随机分成6组,每组12只:对照组(C)、瑞芬太尼组(R)、瑞芬太尼+腹腔注射生理盐水组(R+Si.p)、瑞芬太尼+腹腔注射活性氧清除剂N-叔丁基-α-苯基硝酮(PBN)组(R+PBN)、瑞芬太尼+鞘内注射生理盐水组(R+Si.t)、瑞芬太尼+鞘内注射星形胶质细胞抑制剂L-α-氨基己二酸(L-α-AA)组(R+L-α-AA)。成年雄性SD大鼠静脉输注瑞芬太尼4μg/(kg·min)2 h建立痛敏模型,采用von Frey及Hargreaves法观察抑制活性氧生成或星形胶质细胞激活对瑞芬太尼诱发痛觉过敏的影响。鞘内注射线粒体荧光探针Mito SOX Red探测脊髓线粒体中活性氧产生水平及分布,免疫荧光以及免疫印迹方法观察脊髓背角星形胶质细胞的激活。【结果】静脉输注瑞芬太尼后24 h后引起大鼠机械阈值(R组:30±2.58;C组:50±1.80;P<0.05)和热痛阈值(R组:5.5±1.70;C组:10.0±1.21;P<0.05)显著下降。与对照组相比,瑞芬痛敏组大鼠脊髓GFAP于输注瑞芬后2h表达显著上调(R组:0.16±0.009;C组:0.10±0.008;P<0.01),且脊髓神经元活性氧水平显著增加(R组:0.14±0.008;C组:0.04±0.005;P<0.01)。预先腹腔内注射PBN后第1天不仅显著抑制大鼠脊髓星形胶质细胞激活(R组:0.16±0.009;R+PBN组:0.10±0.007;P<0.01),且减轻瑞芬太尼诱导的机械痛敏(R组:30.0±2.58;R+PBN组:45.0±2.81;P<0.05)和热痛敏(R组:5.5±1.70;R+PBN组:9.4±1.00;P<0.05)。【结论】活性氧激活的星形胶质细胞介导了瑞芬太尼诱发的痛觉过敏,抑制活性氧介导的星形胶质细胞激活可能是减轻瑞芬太尼诱发痛觉过敏的潜在靶点。
- 叶柳杨诗颖肖力白雪崔宇段晶晶陈元陈宇
- 关键词：瑞芬太尼痛觉过敏活性氧星形胶质细胞
- 脊髓CCL2在瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏中的作用机制被引量：5
- 2019年
- 【目的】观察脊髓趋化因子配体2(CCL2)通过激活小胶质细胞介导瑞芬太尼诱导的痛觉过敏。【方法】36只成年雄性SD大鼠随机平均分为6组,每组6只,生理盐水组,瑞芬太尼组,生理盐水+鞘内注射磷酸盐缓冲液(PBS)组,瑞芬太尼+鞘内注射PBS组,生理盐水+鞘内注射CCL2中和抗体组,瑞芬太尼+鞘内注射CCL2中和抗体组。瑞芬太尼组大鼠通过尾静脉连续输注瑞芬太尼4μg/(kg·min)2h,建立瑞芬太尼诱导的痛觉过敏模型。采用免疫荧光组织化学和蛋白印迹法,观察瑞芬太尼痛敏大鼠脊髓CCL2的表达。另外,观察瑞芬太尼输注前30min预先鞘内注射CCL2中和抗体,对瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏以及脊髓小胶质细胞激活的影响。【结果】瑞芬太尼组与生理盐水组相比大鼠热痛和机械痛阈值明显下降(P<0.05),建模后第1天大鼠脊髓CCL2蛋白表达水平(0.66±0.07vs.0.18±0.04;P<0.001)和平均荧光密度(0.170±0.009vs.0.047±0.006;P<0.001)显著升高;预先鞘内注射CCL2中和抗体不仅抑制瑞芬太尼诱导的大鼠脊髓小胶质细胞的激活(P<0.001),而且显著缓解瑞芬太尼引起的大鼠热痛过敏和机械痛过敏(P<0.05)。【结论】CCL2通过激活大鼠脊髓小胶质细胞介导瑞芬太尼诱发的痛觉过敏。
- 王晓娥李琪肖力李紫霖崔宇陈元陈宇
- 关键词：瑞芬太尼痛觉过敏小胶质细胞
- PMA诱导的海马神经元生长锥坦塌中PDLIM5的作用
- 现有研究表明,PKC蛋白激酶家族对神经元生长锥生长具有重要调控作用。我们前期研究证实,PKCε同PDLIM5在神经元中呈钙离子浓度依赖性结合。然而,PDLIM5是否介导了PKCε对神经元生长锥生长的调控作用,尚不明了。本...
- 任冰玉李秀博陈元
- 关键词：PKCΕ生长锥RNA干扰
- 文献传递
- ENH蛋白与病理性疼痛相关性研究
- 2014年
- 【目的】观察ENH(Enigma Homolog)蛋白在大鼠坐骨神经选择性损伤(SNI)疼痛模型引起的病理性疼痛中的表达,并探索其与疼痛的相关性及可能机制。【方法】取15只雄性SD大鼠,分为3组(每组5只),分为SNI组,麻醉治疗组和假手术对照组。另取30只雄性SD大鼠,分为6组(每组5只),按时间点分为非手术组对照组和实施SNI手术的1、4、7、10、14 d组。通过检测大鼠50%机械刺激撤足阈值,观察SNI,SNI+利多卡因和罗哌卡因复合制剂及假手术组在4、7、10 d大鼠痛敏的改变以及SNI手术组大鼠在1、4、7、10、14 d的痛敏变化。免疫荧光组织化学染色方法观察各组术后10 d相应脊髓节段内ENH蛋白的表达。蛋白质印迹法(Western Blot)检测相应各实验组及时间点脊髓节段裂解液内ENH蛋白的表达量。【结果】与假手术组相比,SNI术后10 d大鼠手术侧痛敏明显增高(n=5/组,P<0.01),而SNI+麻醉药组大鼠痛敏则与假手术组接近。免疫荧光染色与蛋白质印迹法显示SNI术后10 d,脊髓L4-6节段手术侧背角内ENH表达明显高于假手术组(n=5/组,P<0.01);SNI+麻醉药组的ENH蛋白表达则与假手术组接近。ENH与正常对照组相比,SNI组术后手术侧痛敏、ENH蛋白及mRNA有一过性增高继而恢复正常,并随时间推移而逐渐再次增高(n=5/组)。【结论】ENH蛋白在大鼠慢性病理性疼痛模型中有表达,且其改变与痛敏的进程一致。这些结果为ENH可能作为一种新的疼痛分子标志物奠定了理论基础。
- 崔家鸣张吉凤任冰玉陈元
- 关键词：病理性疼痛坐骨神经
- PDLIM5 shRNA质粒构建及其稳定转染SH-SY5Y细胞株的建立被引量：2
- 2016年
- 目的构建PDLIM5 shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的SH-SY5Y(成神经细胞瘤细胞)细胞系。方法合成PDLIM5基因干扰序列并插到RNAi真核表达载体p GFP-V-RS质粒中,通过酶切和测序进行鉴定。常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒PDLIM5 shRNA和对照质粒PDLIM5 Scramble经脂质体Lipofectamine 2000介导转染SH-SY5Y细胞,经puromycin持续筛选和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。RT-PCR及Western blot分别检测PDLIM5 mRNA及蛋白表达情况。结果经双酶切及测序鉴定,重组获得的干扰真核表达质粒PDLIM5 shRNA与预期完全相同。PDLIM5 shRNA稳定转染SH-SY5Y细胞在荧光显微镜下呈亮绿色。RT-PCR及Western blot检测显示PDLIM5 mRNA及蛋白表达明显下调。结论成功构建PDLIM5 shRNA真核表达载体及其稳定转染SH-SY5Y细胞系,为进一步研究PDLIM5在精神疾病中的功能奠定实验基础。
- 苟晨雨李媛段晶晶陈元
- 关键词：SHRNARNAI
