陆凤先
- 作品数：22 被引量：29H指数：4
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- 发文基金：国家自然科学基金天津市科技发展战略研究计划项目天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人促甲状腺激素受体膜外区N端基因免疫诱导Balb／c小鼠实验性格雷夫斯病被引量：2
- 2008年
- 目的观察人促甲状腺激素受体（human thyrotropin receptor，hTSHR）膜外区N端（氨基酸29-280区域）的抗原性及其与格雷夫斯病（Graves病）发病的关系。方法提取人正常甲状腺组织总RNA．反转录后进行PCR，扩增产物与表达载体pcDNA3．1进行连接得到重组质粒pcDNA3．1／hTSHR188-940bp。用重组质粒免疫Balb／c小鼠，检测小鼠血清中甲状腺素（thyroxin，T4）、抗TSHR抗体（anti-TSHR antibody，TRAb）、甲状腺刺激抗体（thyroid stimulating antibody，TSAb）水平的变化，光镜下观察甲状腺组织的结构变化。结果 PCR扩增得到hTSHR膜外区N端753bp的基因片段hTSHRl％～％bD，该片段与表达载体pcDNA3．1连接后，经HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定证实hTSHR180-940bp片段插入序列和方向正确。用pcDNA3．1／hTSHR180-940bp免疫Balb／c小鼠后发现，血清TRAb水平从第6周（0．148±0．018）开始升高，到第10周（0．134±0．011）一直维持在比较高的水平，与第0周（0．106±0．006）比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。血清T4、TSAb水平在第10周[（62．20±12．77）μg／L、1．392±0．615]出现明显升高，与第0周[（41．02±7．97）μg／L、0．864±0．076]比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。甲状腺病理学检查发现大部分小鼠甲状腺滤泡上皮增生，滤泡腔增大，偶见炎细胞浸润。结论TSHR188-940bp编码的hTSHR膜外区N端氨基酸29-280区域抗原决定簇使机体产生TSAb，从而导致甲状腺功能亢进，出现类Graves病表现，说明偈HR的这个区域与Graves病密切相关，可能是导致该病的重要因素。
- 朱云娟赵紫琴李兰英陆凤先姚智
- 关键词：受体促甲状腺素格雷夫斯病
- hTSHR膜外区氨基端基因原核表达载体的构建和鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的:为研究人促甲状腺素受体膜外区氨基端(hTSHR462bp)肽段的免疫学特性,将hTSHR462bpcDNA片段在原核表达系统中表达,故构建原核表达载体。方法:以人Graves病患者甲状腺组织中提取mRNA为模板,利用RT-PCR方法扩增双链甲状腺组织cDNA,又以PCR技术扩增目的基因,定向克隆法构建融合基因的原核表达载体pET102-hTSHR462bp。结果:获得了重组目的基因原核表达载体并经PCR鉴定、酶切鉴定插入片段方向、大小正确,DNA测序分析表明插入处接头和读框与预期序列相符。结论:成功构建了融合基因的原核表达载体pET102-hTSHR462bp,为进一步的蛋白表达、其生物学功能研究和未来临床应用奠定了基础。
- 陈慧方佩华陆凤先李宁吕枚许静
- 关键词：基因克隆测序
- 反义肽研究进展
- 1996年
- 介绍反义肽的概念及其结合特性，并对其作用机理以及在生物技术上的应用前景进行了探讨。
- 陆凤先张庆长
- 关键词：分子识别抗独特型抗体
- TSH受体活性片段反义肽的免疫调节作用被引量：8
- 2004年
- 目的通过观察TSH受体(TSHR)活性片段及其反义肽(RHST)对大鼠免疫活性的影响,探讨反义肽的免疫调节作用。方法TSHR片段TR1、TR2、TR3及相应的反义肽RT1、RT2、RT3,或3对互补肽被分别注入不同组大鼠体内,观察免疫前后各组大鼠血清中TT3、TT4、TSH受体抗体(TRAb)、甲状腺刺激型抗体、甲状腺刺激抑制型抗体和TSH抗体(TSHAb)等指标以及甲状腺组织的病理变化。结果3条TSHR片段均刺激TRAb的产生;RT1和RT2可同时诱导出TRAb和TSHAb;TR2引发的甲状腺上皮细胞增生和淋巴细胞浸润可因RT2的注入而缓解。结论实验证明,3条TSHR片段均具有免疫源性;RT1和RT2具有免疫调节作用,可能是TSHR片段的独特型;反义肽可减轻由天然肽引发的体液和细胞免疫,证明了反义肽通过免疫网络进行免疫调节的可能性。
- 陆凤先戴承恺叶静汤特王伟
- 关键词：免疫调节作用TSH受体TR片段体液
- 实时定量RT-PCR方法检测豚鼠TSHR免疫BALB/c小鼠甲状腺TSHR的表达被引量：1
- 2005年
- 目的:建立外标准法SYBRGREENI实时定量(real-time)RT-PCR方法,以检测豚鼠TSHR分子免疫对BALB/c小鼠甲状腺TSHRmRNA的表达的影响。方法:取正常BALB/c小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA,逆转录后进行PCR,得到333bp扩增产物。经回收纯化后作为real-timePCR的标准品,稀释为106、105、104、103、102、101拷贝,制作标准曲线;并同时进行普通PCR,比较其灵敏度。优化反应条件使溶解曲线有特异扩增。检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB/c小鼠甲状腺TSHRmRNA的表达。结果:建立的外标准法SYBRGREENI实时定量RT-PCR方法可以灵敏的检测到10copy的核酸,灵敏度为普通PCR的104倍;溶解曲线只有特异峰,溶解温度为82.9℃。没有明显的引物二聚体和非特异峰出现。不同标准点批间变异系数范围为5.8%￣14.3%(n=6)。与对照组比较,TSHR大分子免疫的BALB/c小鼠甲状腺组织TSHRmRNA水平显著升高(P<0.05)。结论:外标准法SYBRGREENI实时定量RT-PCR具有灵敏度高,特异性强,重复性好的特点,比普通PCR更精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHRmRNA的水平。
- 朱云娟黄丽娟陈宁沈炳玲陆凤先
- 关键词：TSHRMRNASYBR
- hTSHR胞膜外区片段真核表达载体的构建和表达
- 2008年
- 目的：构建人类促甲状腺激素受体（hTSHR）胞膜外区氨基端的两个片段hTSHRf（aa29-100）、hTSHRe（aa101-278）的真核表达载体pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hT-SHRe,并在CHO细胞中进行表达。方法：RT-PCR法从人甲状腺正常组织的cDNA中扩增hTSHRf和hTSHRe,定向插入真核表达载体pcDNA3.1（D）/V5-His-TOPO中,经酶切、PCR和测序鉴定后通过脂质体介导转染至CHO细胞中进行表达,RT-PCR扩增转染细胞的cDNA、Western blot分别鉴定hTSHR在CHO细胞中mRNA和蛋白水平的表达。结果：RT-PCR分别扩增两个片段的阳性克隆株,所得片段大小与预期一致,经Western blot鉴定,相对分子质量（Mr）分别为11900、23600左右,与预期的大小相符。结论：真核表达载体pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe构建成功,RT-PCR和Western blot检测证实重组质粒能在CHO细胞中高效表达,为进一步研究pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe在体内的基因表达,建立Graves＇病的动物模型奠定了基础。
- 赵紫琴李兰英陆凤先朱学良朱云娟
- 关键词：TSH受体真核表达
- 分子识别理论在促甲状腺激素受体系统的应用被引量：3
- 2004年
- 目的观察促甲状腺激素受体(TSHR)分子上的特定片段-TR1(aa37-45)、TR2(aa353-366)和TR3(aa648-655)与其相应的反义肽-RT1(aa45-37)、RT2(aa366-353)和RT3(aa655-648)之间的选择性识别。方法制备固相反义肽亲和层析柱-RT1-sepharose4B,RT2-sepharose4B和RT3-sepharose4B,采用阶段洗脱法,观察相应天然肽-TR1、TR2和TR3在柱上的滞留行为。结果TR1、TR2和TR3与其相应的反义肽之间存在选择性识别,而反义肽RT1且能识别TSHR大分子;此外,牛促甲状腺激素(bTSH)蛋白还能被TR1识别。结论本实验证实了分子识别理论在促甲状腺激素受体系统的存在,它可能用于生物大分子蛋白质的分离、促甲状腺激素(TSH)与受体(TSHR)结合位点的测定,并用于实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠的实验性治疗。
- 陆凤先戴承恺汤特叶静王伟
- 关键词：受体促甲状腺激素肽类色谱法亲和
- 灵敏的甲状腺微粒体抗体酶联免疫吸附分析的建立
- 1995年
- 甲状腺微粒体抗体（ＴＭＡｂ）或称甲状腺过氧化物酶抗体（ＴＰＯ－Ａｂ）已广泛用于人类甲状腺自身免疫性疾病的诊断，但粗提的人甲状腺微粒体制备物含有残留的甲状腺球蛋白（ＴＧ）和其它膜抗原，影响方法的灵敏度，我们采用亲和层析的方法，得到纯度较高的ＴＭ抗原，建立了灵敏的ＴＭＡｂ－ＥＬＩＳＡ。该方法的批内变异系数为３．２±０．０１％（ｎ＝８０），批间变异系数为８．３±０．０２％（ｎ＝８）；临床甲亢病人的阳性率为８０．０％（ｎ＝４６），与国内同类放免试剂盒相比，对Ｇｒａｖｅｓ病的阳性检出率提高２０％（ｎ＝２０），桥本氏甲状腺炎的阳性检出率提高１１．７％（ｎ＝２６）。
- 陆凤先汤特王伟张天庚叶静张宝泉
- 关键词：甲状腺疾病抗体微粒体甲状腺ELISA
- 甲状腺自身免疫性疾病——细胞自杀的一种表现
- 1999年
- 自身免疫性疾病，如桥本甲状腺炎、糖尿病、类风湿性关节炎等，目前认为是由于免疫系统失调而攻击自身组织引起的。然而，究竟是免疫系统中哪几种类型的杀伤细胞实施攻击？另一个谜是既然由Ｋ细胞实施免疫攻击，为什么在自身免疫疾病组织损伤部位却罕见Ｋ细胞的存在？Ｇｉ...
- 张庆长陆凤先
- 关键词：甲状腺自身免疫性疾病细胞自杀
- 应用固相催产素反义肽识别催产素受体复合物
- 陆凤先王伟汤
- 该成果观察了催产素反义肽对催产素的识别特性。该反议肽是按照牛催产素和它的结合蛋白ＮｅｕｒｏｐｈｙｓｉｎⅠ氨基端１２个氨基酸编码ＤＮＡ的互补序列固相合成的。实验证明，固相催产素反义肽不仅选择性地识别催产素，且与分娩后大鼠乳...
- 关键词：
- 关键词：固相合成受体催产素
