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pcDNA3/VP1—hIL—2双表达重组质粒的构建及免疫效果观察: 本研究构建了pcDNA3/VPl—hIL—2的共表达质粒并进行了免疫效果观察。1 材料与方法1.1 人类白细胞介素2与柯萨奇病毒VPl基因双表达质粒的构建。根据pcDNA3/VPl(本室构建)CMV启动子上游序列和BGH...; 王永祥周雪燕金玉怀金士香房文亮; 文献传递

CVB3 VP1和hIL-15基因真核双表达质粒的构建及免疫效果观察被引量：3: 2003年; 房文亮王永祥金玉怀金士香于丹军方艳辉; 关键词：CVB3 VP1 免疫效果

白细胞介素-2基因佐剂对柯萨奇病毒B3VP1基因疫苗的免疫增强作用被引量：4: 2004年; 目的探讨白细胞介素 2 (interleukin 2 ,IL 2 )基因佐剂对柯萨奇病毒B3(CoxsackievirusB3,CVB3)基因疫苗的免疫增强作用。方法将 pcDNA3/IL 2 +pcDNA3/VP1、pcDNA3/VP1、pcDNA3/IL 2、空白质粒 pcDNA3和生理盐水分别肌内注射免疫BALB/C小鼠 ,1次 /周 ,共注射 3次 ,每次注射后的第 6天断尾取血 ,用微量中和试验方法检测血清中和抗体 ;第 3次注射后的第 7天用 80 0TCID50 CVB3感染小鼠 ,观察各组小鼠的生存情况。结果pcDNA3/IL 2 +pcDNA3/VP1和 pcDNA3/VP1组小鼠能产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加而提高 ,pcDNA3/IL 2 +pcDNA3/VP1组抗体水平高于同期 pcDNA3/VP1组抗体水平 ,但各组小鼠的生存率无显著性差异(P >0 .0 5 )。结论IL 2基因佐剂对 pcDNA3/VP1诱导抗体产生有一定免疫增强作用。; 王永祥周雪燕金玉怀金士香房文亮; 关键词：柯萨奇病毒B组白细胞介素-2 质粒

人IL-2信号肽基因增强柯萨奇病毒B3型VP1 DNA疫苗诱导的中和抗体应答被引量：14: 2004年; 目的　将人白细胞介素 2 (hIL 2 )信号肽基因与柯萨奇病毒B组 3型 (CVB3)的VP1基因融合 ,构建分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1;免疫小鼠后 ,通过测定血清特异性中和抗体效价及对致死量CVB3攻击的保护作用 ,评价疫苗的免疫效果。方法　采用重叠区基因扩增法 ,将hIL 2信号肽基因连同其下游 11个氨基酸残基的基因与CVB3VP1基因拼接 ,获得分泌型VP1(sVP1)的基因 ;将sVP1基因克隆至真核表达载体pcDNA3,构建分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1;肌注免疫小鼠 ,测定血清中CVB3特异性中和抗体的效价 ;第 3次免疫后 2周 ,腹腔内注射 10 0 0TCID50 的CVB3,观察小鼠生存情况。结果　成功构建了分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1,插入的sVP1基因中含有hIL 2信号肽及其下游 11个氨基酸残基的基因以及VP1基因 ;pcDNA3/sVP1可比对照质粒pcDNA3/VP1诱导小鼠产生更高水平的中和抗体。结论　hIL 2信号肽基因增强了柯萨奇病毒B3型VP1DNA疫苗诱导的中和抗体应答。; 方艳辉金玉怀王永祥于丹军金士香谢立新; 关键词：DNA疫苗柯萨奇病毒信号肽

柯萨奇病毒B组3型VP1和IL-15双表达基因疫苗对小鼠的免疫效果: 2004年; 目的构建柯萨奇病毒B3(CoxsackievirusB3,CVB3)VP1与白细胞介素 15 (interleukin 15 ,IL 15 )双表达基因疫苗 ,并观察其对小鼠的免疫效果。方法从CVB3VP1基因的重组质粒 pcDNA3/VP1上扩增出带有完整表达构件的VP1基因 ,克隆至IL 15基因重组质粒 pcDNA3/IL 15 ,构建成双表达重组质粒 pcDNA3/VP1 IL 15 ,转化DH5a大肠杆菌 ,大量扩增后 ,肌内注射Balb/c小鼠 ,1次 /周 ,共 3次 ,每次免疫后第 6天取血清 ,用微量中和试验方法检测血清中和抗体。第 3次免疫后的第 7天 ,用 80 0TCID5 0CVB3感染小鼠 ,观察各组小鼠的生存情况。结果构建的 pcDNA3/VP1 IL 15重组质粒目的基因与CVB3 VP1和IL 15的序列相同 ;免疫小鼠后 pcDNA3/VP1 IL 15重组质粒能诱导机体产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加而提高 ;病毒攻击后 pcDNA3/VP1 IL 15和 pcDNA3/VP1+pcDNA3/IL 15组较其他组生存时间明显延长 (P <0 .0 5 )。结论本研究成功构建了 pcDNA3/VP1 IL 15真核双表达重组质粒 ;该质粒能诱导机体产生中和抗体 ,对CVB3毒株的攻击有一定程度的保护作用。; 房文亮金玉怀金士香揣侠; 关键词：柯萨奇病毒B组小鼠

多聚酶链反应检测狂犬病毒的研究: 1993年; 应用一对狂犬病毒特异性引物,经逆转录和循环的扩增,从狂犬病毒感染的细胞及加热灭活的这种样本中,都扩增出了与预期相符的带,表明结合热灭活技术可用作狂犬病毒的安全,敏感,特异,快速检测手段。; 金玉怀金士香王永祥王玉坤顾葆良; 关键词：多聚酶链反应狂犬病毒

IL-15基因真核表达质粒的构建及其对CVB3 VP1基因疫苗的免疫增强作用被引量：5: 2003年; 目的探讨人白细胞介素 15 (humaninterleukin 15 ,hIL 15 )基因佐剂对柯萨奇B3病毒 (CoxsackievirusB3 ,CVB3 )VP1基因疫苗的免疫增强效果。方法从人胚肺二倍体细胞提取hIL 15的mRNA ,用逆转录聚合酶链反应 (reversetranscriptase polymerasechainreaction ,RT PCR)扩增出cDNA ,构建成真核表达克隆 pcDNA3 IL 15。将pcDNA3 VP1、pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15、pcDNA3 IL 15、pcDNA3和盐水分别肌内注射Balb/c小鼠 ,每次免疫后 6天取血清用微量中和试验测CVB3中和抗体 ,3次免疫后用 80 0TCID5 0CVB3感染小鼠 ,观察小鼠的生存率。结果 pcDNA3 IL 15重组质粒的目的基因与hIL 15基因序列相同 ;pcDNA3 VP1和pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15能诱导小鼠产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加而提高 ;pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15组抗体滴度和生存率均高于 pcDNA3 VP1组。结论本研究成功构建了hIL 15重组质粒 ,该质粒对真核表达重组质粒 pcDNA3; 房文亮王永祥金玉怀金士香周雪燕; 关键词：真核表达质粒免疫增强效果柯萨奇病毒B组

IL-22基因克隆及其真核表达质粒pcDNA3/hIL-22的构建: 2003年; 目的克隆人白细胞介素 2 2 (humaninterleukin 2 2 ,hIL 2 2 )基因及构建其真核表达质粒 pcDNA3 /hIL 2 2。方法从人外周血分离淋巴细胞 ,加刀豆蛋白A培养 ;提取总RNA ,进行逆转录聚合酶链反应 (reversetranscriptase polymerasechainreaction ,RT PCR)扩增 ;获得目的基因片段后 ,与 pGEM T载体连接成 pGEM T/hIL 2 2 ,转化大肠杆菌E .coli DH5a大量繁殖后 ,提取质粒DNA ,酶切鉴定、测序。用BamH1和Xho1将目的片段从pGEM T/IL 2 2切下 ,与 pcDNA3连接成pcDNA3 /hIL 2 2 ,转化大肠杆菌E .coli DH5a大量繁殖后 ,提取质粒DNA ,酶切鉴定。结果 pGEM/hIL 2 2内插入片段序列与hIL 2 2基因序列完全一致 ;pcDNA3 /hIL 2 2经酶切鉴定与预期结果一致。结论本实验成功完成了hIL 2 2基因克隆和pcDNA3 /hIL 2; 于丹军金玉怀王永祥金士香方艳辉房文亮; 关键词：IL-22 基因克隆真核表达质粒

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金士香