郭东星
- 作品数：25 被引量：90H指数：5
- 供职机构：首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技计划项目首都卫生发展科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术电气工程更多>>
- 人免疫缺陷病毒Ⅰ型Vif蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体制备被引量：1
- 2009年
- 目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)Vif蛋白,制备其单克隆抗体。方法:提取感染了HIV的细胞基因组DNA,PCR扩增vif基因,插入表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,Western印迹鉴定目的蛋白,亲和层析纯化目的蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体。结果:构建了Vif蛋白的原核表达载体vif-pET32a,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以包涵体形式存在;纯化获得高纯度的重组Vif蛋白,蛋白浓度可达0.56mg/mL;建立了抗Vif蛋白单克隆抗体细胞株,制备了腹水,滴度可达1∶16×106,抗体纯化后保持了活性和特异性。结论:在原核表达系统中表达、纯化了重组Vif蛋白,制备了针对Vif蛋白的单克隆抗体,为研究Vif蛋白的功能和抗原性奠定了基础。
- 隋洪帅郭东星刘思扬鲍作义刘永健庄道民李韩平李敬云李林
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 荧光定量聚合酶链反应检测肺炎支原体方法的建立被引量：12
- 2016年
- 目的建立检测肺炎支原体的荧光定量PCR法,并与市售试剂盒和传统巢式PCR法的检测性能进行比较。方法设计针对肺炎支原体社区获得性肺炎呼吸窘迫综合征毒素基因的特异性引物,构建含相应目的片段的质粒作为标准品,采用SYBR Green染料法进行实时定量PCR,并绘制标准曲线。通过检测其他细菌和170例儿童临床咽拭子样本,比较新建荧光定量PCR法、市售试剂盒和传统巢式PCR法在临床应用中的差异。结果新建荧光定量PCR法和巢式PCR法能够检出的肺炎支原体标准株DNA最低模板量为10拷贝,市售试剂盒检出最低模板量为102拷贝。在特异性实验中3种方法均可区分肺炎支原体和其他菌种。在检测的170例儿童临床咽试子样本中,新建荧光定量PCR法、市售试剂盒和传统巢式PCR法的阳性率分别为60.00%、50.00%和53.53%。新建荧光定量PCR法与市售试剂盒的结果具有高度相关性(r=0.953),2种方法的总符合率为86%,Kappa值为0.729。新建荧光定量PCR法与传统巢式PCR法的结果总符合率为90%,Kappa值为0.797。结论新建荧光定量PCR法与市售试剂盒相比灵敏性更高,特异性相同,成本低;与传统巢式PCR法相比操作简单,耗时短且污染少,具有良好的科研和临床应用前景。
- 郭东星胡文娟李丹李静宜栗绍刚吴赵永田秀君辛德莉
- 关键词：肺炎支原体呼吸道感染儿童
- 同一家庭中耐药肺炎支原体感染临床分析被引量：3
- 2016年
- 目的分析同一家庭中耐药肺炎支原体（MP）感染患儿的治疗转归情况。方法收集同一家庭密切接触的2例MP感染患儿的临床资料，进行咽拭子MP耐药基因检测、血清抗体检测。结果2例患儿的MP－PCR均为阳性，存在大环内酯类抗生素作用靶位23S rRNA V区2063位点A－G的突变。7岁患儿经阿奇霉素治疗7 d后病情无改善，临床诊断为难治性MP肺炎，加用糖皮质激素和纤维支气管镜灌洗治疗后好转。另1例3岁患儿经阿奇霉素治疗5 d后病情改善，诊断为MP肺炎。结论耐药MP引起的MP肺炎可在家庭成员中传播，可为难治性MP肺炎，应关注阿奇霉素对耐药MP感染的作用。
- 史大伟冯雪莉王良玉胡文娟郭东星徐保平辛德莉
- 关键词：难治性肺炎支原体肺炎阿奇霉素耐药
- 两种HIV-1耐药准种分析方法的比较被引量：4
- 2010年
- 目的比较两种HIV-1耐药准种分析方法 ---克隆PCR产物测序法和单基因扩增法(单基因组测序法,single-genome sequencing,SGS)。方法以本室贮存的某接受高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviraltherapy,HAART)的艾滋病患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)为样本,分别用克隆PCR产物序列测定法和SGS方法得到HIV-1pol区准种序列,对准种序列进行离散率、耐药相关突变组合构成比等分析。结果克隆方法得到19条pol区序列,SGS方法得到18条pol区序列。对两种方法的核苷酸和蛋白质序列的平均离散率进行成对样本均值分析,采用t检验,P值(单尾)为0.311,差异没有显著性意义;两种方法检测出各种突变组合构成比的2检验结果 ,P>0.25,差异也没有显著性意义。但是,准种中占较少比例的突变模式在两种方法检测的结果不一致,如T215Y/K103N/Y181C/H221Y以及M41L/F116L/T215Y/K103N/Y181C/H221Y两种突变组合模式只在克隆方法中检测到,而携带M41L/A62V/T69Si/T215Y/A98G/K103N/Y181C以及K103N突变的两种毒株仅在SGS方法中出现。结论两种分析HIV-1耐药突变准种方法检测该例样本的核苷酸序列和蛋白质准种序列无显著性差异,检出的主要突变组合的构成比也无显著性差异,对优势准种的检测中两种方法差异不大,但在劣势准种的检测中两种方法有一定差异。
- 焦丽燕刘永健郭东星王铮耿庆茂李林庄道民鲍作义刘思扬李韩平李敬云
- 关键词：克隆测序聚合酶链反应
- 肺炎衣原体实验室诊断技术研究进展被引量：7
- 2016年
- 肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)是急性呼吸道感染最常见的非典型病原之一,可引起肺炎、支气管炎及咽炎等,也可能与动脉粥样硬化、心内膜炎及冠心病等肺外疾病有关,严重者可造成人体多系统、多器官的损伤。Cpn感染全球范围存在,可引起区域内暴发流行,但由于其临床表现无特征性,常须要结合实验室检测结果做出诊断。因此,国内外学者不断改良各种Cpn诊断技术,力求找到感染早期快速准确的诊断方法。本文拟综述近年来Cpn实验室诊断技术的研究进展及应用价值。
- 胡文娟郭东星辛德莉
- 关键词：肺炎衣原体呼吸道感染
- 实时定量PCR检测肺炎支原体方法的建立及临床应用被引量：9
- 2015年
- 目的利用实时定量PCR技术（SYBR Green染料法）建立一种快速、特异、敏感、经济、准确检测肺炎支原体的方法，并评价其在临床上的应用价值。方法选择肺炎支原体的23S rRNA耐药相关基因作为扩增区，设计特异性引物，然后提取相应质粒作为标准品，建立绝对定量的标准曲线。比较荧光定量PCR方法与传统巢式PCR方法和市售试剂盒的特异度和灵敏度；分别利用上述三种方法和培养法检测临床咽拭子样本，进行相关系数、符合率及kappa系数的分析。结果实时定量PCR和巢式PCR检测肺炎支原体的灵敏度为10拷贝；市售试剂盒为10^2拷贝。特异性检验中，肺炎支原体样本检测为阳性，人型支原体和其他4种细菌均检测为阴性。临床样本检测中，实时定量PCR、巢式PCR、市售试剂盒和培养法的阳性率分别为55．49％、52．75％．47．25％和39．0l％。统计学分析结果显示，新建实时定量PCR与传统巢式PCR的结果总符合率为89．6％，Kappa系数为0．790。实时定量PCR方法与市售试剂盒检测结果的相关系数R=0．923，P〈0．001；两种方法的总符合率为89．6％，Kappa系数为0．792。实时定量PCR与培养法的结果总符合率为83．5％，Kappa系数为0．678。结论采用实时定量PCR方法检测肺炎支原体与其它几种方法相比，快速经济，且污染少，特异性强，灵敏度高，具有很重要的科研和临床实用价值。
- 胡文娟郭东星王红黄慧姜越王良玉辛德莉
- 关键词：肺炎支原体儿童荧光定量PCR
- 检测黄热病毒双基因引物探针组、试剂盒及应用
- 本发明公开了一种检测黄热病毒双基因引物探针组，包括同时检测黄热病毒两个目的基因的引物和探针，引物包括上游引物PF1、下游引物PR1及检测探针P1，上游引物PF1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物PR1的核...
- 杨光郭东星
- 成人社区获得性肺炎肺炎支原体感染率和耐药率的调查被引量：5
- 2016年
- 目的了解北京地区成人住院社区获得性肺炎（CAP）患者肺炎支原体（MP）感染、耐药情况及健康成人的MP携带率。方法入选2014年1月至2014年12月就诊于首都医科大学附属北京友谊医院呼吸内科病房的CAP患者109例及同期同科室无呼吸道症状健康医护人员18例,采集咽拭子标本进行巢氏PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳,记录CAP患者病史、吸烟史、饮酒史、采样前是否应用喹诺酮或大环内酯类药物。结果 1住院CAP患者咽拭子标本MP阳性率为52.3%（57/109）,耐药率为57.9%（33/57）;无呼吸道症状健康医护人员MP阳性率为33.3%（6/18）,耐药率为0;住院CAP患者与无呼吸道症状健康医护人员的MP阳性率无显著差异（χ~2=2.222,P=0.136）,住院CAP患者MP耐药率明显高于无呼吸道症状健康医护人员（P=0.009）。2CAP患者MP阳性率春季高于其它季节（χ~2=15.576,P=0.001）,在性别、年龄方面无明显差异。3是否有呼吸系统基础疾病、吸烟、饮酒,采样前是否应用喹诺酮类和/或大环内酯类药物对CAP患者MP阳性率和耐药率无显著影响（所有P〉0.05）。结论成人对MP普遍易感,北京地区成人住院CAP患者MP感染率和耐药率不容忽视,合理应用抗生素至关重要。健康成人MP携带率需进一步研究。
- 翟惠芬胡文娟郭东星王良玉蔚然徐波辛德莉
- 关键词：社区获得性肺炎肺炎支原体大环内酯
- 肺炎支原体耐药诊断试剂盒
- 本发明公开一种肺炎支原体耐药诊断试剂盒。该试剂盒包括上游引物序列P1：5'TCCAGGTACGGGTGAAGACA'3；下游引物序列P2：5'GTCCTGATCAATATTAAGCTACAGTAAAGCT'3；探针序列T...
- 李静宜辛德莉孙岚郭东星姜越
- 文献传递
- 小儿肺热咳喘口服液治疗肺炎支原体气管炎、支气管炎的多中心疗效观察被引量：29
- 2016年
- 目的观察小儿肺热咳喘口服液治疗肺炎支原体（MP）气管炎、支气管炎的临床疗效，为中药治疗儿童MP感染提供临床依据。方法本研究为前瞻性、随机、开放、平行、阳性药物对照的多中心临床观察。2014年9月至2015年4月期间，将符合人选标准的MP气管炎、支气管炎的患儿作为研究对象，随机分为治疗组和对照组，对照组应用阿奇霉素，治疗组应用小儿肺热咳喘口服液。收集所有患儿的临床资料、咽拭子标本。应用巢式PCR检测其咽拭子标本中MP23SrRNA。对PCR阳性的气管炎、支气管炎患儿的临床资料进行总结分析。结果符合入选标准、咽拭子MP—DNA阳性的气管炎、支气管炎患儿共118例。其中对照组59例，治疗组59例。23SrRNA的红霉素作用靶位的2063位点发生碱基突变患儿98例。其中对照组46例（占77．8％），治疗组52例（占88．1％）。对照组非耐药菌株13例，治疗组非耐药菌株7例。治疗结束时，治疗组患儿退热时间、咳嗽减轻及消失时间、咳痰减轻及消失时间均较对照组短，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。治疗组治愈32例，显效15例，有效9例，有效率95．00％；对照组治愈28例，显效13例，有效12例，有救率89．90％。治疗组有效率和治愈率与对照组比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。治疗后，对照组非耐药菌株的退热时间、咳嗽减轻及消失时间、咳痰减轻及？肖失时间均较耐药菌株短，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。治疗后，治疗组患儿非耐药菌株的退热时间、咳嗽减轻及消失时间、咳痰减少及消失时间与耐药菌株比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论小儿肺热咳喘口服液对改善儿童MP感染引起的气管炎、支气管炎症状具有较好疗效，而且治疗耐药MP气管炎、支气管炎的效果优于阿奇霉素，为临床应用中医药治疗儿童MP
- 辛德莉王红秦选光周薇吴力群李静徐保平董艳胡文娟郭东星侯安存申昆玲
- 关键词：小儿肺热咳喘口服液肺炎支原体气管炎支气管炎
