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邹国民
作品数:
1
被引量:3
H指数:1
供职机构:
广州医学院第一附属医院
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发文基金:
国家自然科学基金
广东省自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
罗伶俐
广州医学院第一附属医院
冉丕鑫
广州医学院第一附属医院
李冰
广州医学院实验医学研究中心
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中国病理生理...
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2008
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人γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因E-box元件功能初步分析
被引量:3
2008年
目的:探讨人支气管上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列E-box元件的功能。方法:利用PCR法克隆人GCLC基因上游调控序列,PCR重叠延伸法对2个E-box元件分别和同时进行定点突变。扩增获得的突变体片段克隆入PMD18-T载体,DNA测序鉴定后,亚克隆入野生型GCLC-Luc荧光素酶报道载体。将3个突变体质粒和野生型质粒转染人肺泡上皮细胞A549和人支气管上皮细胞16HBE,检测转染后细胞荧光素酶活性值。结果:测序结果证实,成功将E-box1CACGGG突变为AGCGGG;E-box2CACGTG突变为CACGGA。GCLC-Luc、GCLC-mEbox1-Luc(突变E-box1)、GCLC-mEbox2-Luc(突变E-box2)、GCLC-mEbox12-Luc(突变E-box1和E-box2)转染A549细胞后荧光素酶活性值分别为(5197852±132206)U、(5455692±127431)U、(5315722±244197)U、(5174303±183179)U,转染16HBE细胞后荧光素酶活性值分别为(141157±18907)U、(126454±23724)U、(137315±22179)U、(132441±28970)U。经过统计学分析,各组荧光酶活性没有显著差别,均P>0.05。结论:E-box元件不参与基础状态下A549细胞和16HBE细胞GCLC基因转录调控。
罗伶俐
邹国民
李冰
冉丕鑫
关键词:
16HBE细胞
A549细胞
基因
Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶
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