目的:通过比较多种辅酶A测定方法总结出适合注射用辅酶A的效价测定方法。方法:对多批注射用辅酶A制剂进行3种方法的效价测定,分别为《卫生部颁标准二部六册》上的磷酸转乙酰化酶法、高效液相色谱法及辅酶A测定试剂盒法,其中高效液相色谱法以磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇(90:10)为流动相,采用Phenomenex C18色谱柱,流速1.0ml/min,259nm为检测波长同时利用二极管阵列检测器对200nm-400nm波段进行监视,并利用磷酸盐缓冲液(pH5.8)对样品进行溶解后进行测定。辅酶A试剂盒法是采用BioVision的Coenzyme A Assay Kit,BioVision公司开发了一种简单快捷的检测多种生物样本中辅酶A水平的方法,利用探针技术捕获游离的辅酶A,生成的产物在可见光波段有吸收。最后对3种方法的结果进行比较。结果:高效液相色谱法中辅酶A在1U/ml-100U/ml的范围内,峰形及线形关系良好(r2=1),样品溶液室温放置长时间稳定。试剂盒法中辅酶A在每孔0.032U-3.2U范围内线形关系良好(r2=0.9976)。结论:高效液相色谱法与辅酶A测定试剂盒法要优于磷酸转乙酰化酶法。实现了室温条件下稳定测定多批注射用辅酶A,改良后的高效液相色谱法可以作为辅酶A效价测定的裁定方法,试剂盒法可以作为快速筛查与检验的方法。
