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赵艳敏: 作品数：15 被引量：27H指数：4; 供职机构：上海市农业科学院更多>>; 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目上海市科委重大科技攻关项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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大肠杆菌热敏性肠毒素双突变体作为疫苗黏膜免疫佐剂: 本发明公开了一种分离的大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白，所述蛋白的A亚基相对于野生型大肠杆菌热敏性肠毒素的A亚基，其氨基酸序列第63位为K，且第192位为G；或其第72位为R，且第192位为G。本发明还公开了所述蛋白的编码...; 刘惠莉赵艳敏唐思静潘洁饶柏忠; 文献传递

大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的原核表达及其活性研究被引量：6: 2012年; 为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获得了替换。IPTG诱导表达目的蛋白经SDS-PAGE电泳检测,表达出突变体重组蛋白为约30 ku和10 ku的两个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量相吻合。Western blot检测结果表明两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应。目的蛋白经纯化后进行ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,突变重组蛋白与野生型LT相比其酶活性和毒性均明显降低。纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡,ELISA结果显示,突变体LTR72/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高滴度的抗新城疫病毒的IgG和IgA。; 唐思静刘惠莉马勋赵艳敏; 关键词：免疫原性

粘膜佐剂肠毒素LT蛋白制备及配伍疫苗研制: 刘惠莉赵艳敏师小潇唐思静哈卓殷秀辰陶洁倪建平董端凝李星潘洁饶柏钟; 项目属于兽医学领域-新型疫苗及疫苗佐剂研制。大肠杆菌热敏性肠毒素(Heat-labile toxin，LT)是高效粘膜佐剂，基因改造的无毒mLT粘膜佐剂蛋白与畜禽疫苗配伍，研制可经粘膜免疫的新型疫苗，提升免疫的针对性和...; 关键词：; 关键词：兽医学

大肠杆菌热敏性肠毒素双突变体作为疫苗黏膜免疫佐剂: 本发明公开了一种分离的大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白，所述蛋白的A亚基相对于野生型大肠杆菌热敏性肠毒素的A亚基，其氨基酸序列第63位为K，且第192位为G；或其第72位为R，且第192位为G。本发明还公开了所述蛋白的编码...; 刘惠莉赵艳敏唐思静潘洁饶柏忠; 文献传递

大肠埃希菌不耐热肠毒素双突变体的表达及活性研究被引量：1: 2014年; 为了使大肠埃希菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,通过PCR和重叠—延伸PCR扩增突变体LTK63/G192基因片段,IPTG诱导表达目的蛋白,经Western免疫印迹检测目的蛋白,在HPLC系统上纯化目的蛋白,经ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡。结果表明:制备的突变体LTK63/G192的基因片段经酶切和测序发现,所构建的表达载体pLTK63/G192阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换;经SDS-PAGE电泳检测,野生型LT及双突变体均表达出约33.0ku和13.0ku的两条蛋白带,与LTA、LTB亚基分子质量相吻合;经Western bolt检测,两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应;双突变蛋白的酶活性和毒性与野生型LT相比酶活性和毒性都有所降低;突变体LTK63/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高抗新城疫病毒的IgG和IgA。说明LTK63/G192是一个良好的免疫佐剂。; 唐思静姜云吕转平刘惠莉马勋赵艳敏; 关键词：免疫原性

大肠杆菌不耐热肠毒素双突变体的佐剂活性研究: 2012年; 选取1日龄的雏鸡,随机分成五组,接种N D V、LTK63/G 192+N D V、LTR 72/G 192+N D V、LT+N D V、PBS,每组10只,0,11,25,35,55天采取血清和鼻液,通过间接ELISA检测抗体水平,实验结果显示,LTK63/G 192+N D V、LTR 72/G 192+N D V、LT+N D V组的血清和鼻液都比仅使用N D V组的抗体水平高,LTR 72/G 192+N D V组最高。经M TT法,检测N D V不同病毒稀释度诱发免疫鸡T淋巴细胞产生增殖反应,LTR 72/G 192+N D V组的淋巴细胞增殖反应也最好。表明双突变体LTR 72/G 192具有强的黏膜佐剂作用。; 唐思静刘惠莉马勋赵艳敏; 关键词：NDV 增殖黏膜佐剂

猪流感监测、诊断技术研究: 刘惠莉童光志潘洁赵艳敏张春玲邢继兰周艳君饶柏忠王英崔尚金杨秋峰仇华吉田志军; 采用重组表达蛋白为抗原，建立监测猪流感病毒血清抗体的间接ELISA方法，用于猪流感病毒感染的血清学检测。针对猪流感病毒不同血清亚型，筛选到型保守序列，建立针对不同血清亚型保守区的扩增体系，组建多重RT-PCR体系，可同时...; 关键词：; 关键词：猪流感病毒

大肠杆菌热敏性肠毒素对NDV疫苗免疫增强效果研究: 大肠杆菌热敏性肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)是产肠毒素大肠杆菌分泌的一种不耐热肠毒素,具有很强的毒性。由于LT蛋白具有免疫原性并且能够增强共免疫原的免疫效果,是良好的粘膜佐剂。但LT的毒性...; 唐思静赵艳敏潘洁师小潇刘惠莉; 文献传递

猪流感病毒抗原表位基因表达载体构建与免疫原性分析被引量：7: 2008年; 根据猪流感病毒血凝素蛋白基因(Heamuglutinine,HA)的核苷酸序列,设计、筛选HA蛋白氨基酸序列的主要表位多肽4个,将4个片段以柔性连接串联成模拟蛋白,核苷酸约为300 bp,体外扩增该模拟蛋白基因,插入到原核表达载体pET30a(+)中,转染宿主菌诱导表达,结果获得分子量为20 kD的表达蛋白,该蛋白可与抗His-tag抗体、抗猪流感病毒H1N1、H3N2亚型高免血清发生免疫学反应。纯化后免疫小鼠,ELISA及血凝抑制(Heamuglutinine inhibitor,HI)试验检测,小鼠产生针对多肽抗原的血清抗体,同时还可检测到H1N1、H3N2亚型SIV血凝抗体。流氏细胞仪检测免疫组外周血淋巴细胞高于对照组,说明该模拟蛋白具有与H1N1、H3N2亚型猪流感病毒相似的免疫原性及反应原性,为H1N1、H3N2血清亚型猪流感病毒疫苗研制提供了新手段。; 刘惠莉邢继兰潘洁杨秋峰赵艳敏; 关键词：猪流感病毒抗原表位新型疫苗