赵爱志
- 作品数：31 被引量：139H指数：6
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人髓性白血病细胞系U937定向克隆cDNA表达文库的构建及其意义被引量：1
- 2003年
- 本研究的目的是构建髓性白血病U937细胞系表达型cDNA文库 ,为肿瘤抗原的筛选奠定工作基础。提取U937细胞总RNA ,分离mRNA ,反转录合成双链cDNA ,消平cDNA末端 ,连接EcoRⅠ适配子 ,磷酸化EcoRⅠ适配子 5′端 ;XhoⅠ酶切后 ,丙烯葡聚糖凝胶 S4 0 0柱除去小于 4 0 0bpcDNA片段 ,与λZAP表达载体连接 ,包装蛋白包装后建成cDNA文库 ;取出 1μl倍比稀释感染大肠杆菌XL1 Blue MRF′ ,测定文库大小、重组率 ;随机挑取 10个噬斑 ,在ExAssist辅助性噬菌体的作用下 ,释放出PBK CMV噬菌粒 ;感染大肠杆菌XLOLR ,铺于卡那霉素抗性的LB平板 ;挑取克隆 ,37℃震摇过夜 ;抽提质粒 ,经EcoRI和XhoI酶切后 ,初步确定片段的大小及多样性。结果 :构建成含 2 .87× 10 6重组子的U937细胞cDNA文库 ,重组子平均插入外源片段长约 1.7kb。结论 :所建文库合格 ,适合用于筛选目的cDNA克隆。
- 陈刚张王刚付杰曹星梅赵万红赵爱志韩月恒李福洋刘新平药立波
- 关键词：U937细胞系CDNA表达文库
- 全人源肝癌噬菌体单链抗体的筛选及特异性鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性及特异性进行鉴定。方法PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率。先以人成纤维细胞吸附后再以体外培养的肝癌细胞SMMC7721为抗原对所建抗体库进行3轮“吸附洗脱扩增”的亲和筛选。将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定;通过ELISA法及FCM鉴定其与人肝癌细胞及正常细胞的结合活性。结果ScFv基因插入率为70%。在亲和筛选过程中,肝癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第3轮为第1轮的214倍。筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定,均可检测到目的基因。ELISA分析结果显示18个克隆与SMMC7721呈阳性反应,阳性率为90%,15个克隆与成纤维细胞有交叉反应。得到3株肝癌单链抗体。ScFv的FCM鉴定表明,以正常胎肝细胞L02为对照,ScFv与肝癌结合比率为41.3%。特异性鉴定表明,其与肝癌细胞结合活性明显高于正常细胞。结论利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因,且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性。
- 薛国柱窦科峰赵爱志药立波
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体肝肿瘤
- 人乳腺癌全套抗体可变区基因的扩增与克隆被引量：3
- 2004年
- 目的 扩增人乳腺癌抗体全套可变区基因 ,将其克隆到T载体来构建T载体文库。方法 收集乳腺癌患者外周转移淋巴结 30例 ,TRIzol法提取总RNA、纯化mRNA ,行RT PCR扩增 ,制备T载体 ,用于PCR产物的克隆。结果 总RNA纯度高 ,完整性好 ,mRNA获得率为 1%。经RT PCR ,VH、Vλ、Vκ的每一条 5 '端引物均与其相应的 3'端引物成功地扩增出了可变区基因片段 ,轻、重链T载体库分别为 1.7× 10 8和 3.5× 10 8。结论 所采用的引物能够10 0 %扩增目的片段 ,T载体过渡能显著提高克隆效率 ,为噬菌体抗体库的构建和筛选奠定了基础。
- 吕勇刚窦科峰吴昱彤赵爱志刘杰陈刚陶开山药立波
- 关键词：聚合酶链式反应乳腺癌抗体基因T载体
- VEGF、KDR的表达对肝癌的血管生成、生长、转移的影响被引量：18
- 2000年
- 目的 研究血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体KDR(kinaseinsertdomaincontainingre ceptor)对肝细胞肝癌的血管生成、生长、转移等方面的影响。 方法 对 45例肝癌、2 1例肝硬化、8例正常肝标本进行了免疫组化、原位杂交染色 ,然后行图像分析 ,观察VEGF、KDR的表达与肝癌病理特点之间的关系 ,并进行统计学分析。 结果 肝细胞肝癌中VEGF高表达 ;并与肝癌的血管生成相关 ;VEGF的表达强度与表达率均与肝癌的转移、包膜形成相关 ;KDR不仅表达于血管内皮细胞 ,还表达于部分肝癌细胞。 结论 VEGF在肝癌的血管生成、癌细胞转移、包膜形成中可能起到重要作用 ,KDR在肝癌细胞的表达可能是一种自分泌行为。
- 赵爱志窦科峰李开宗付由池
- 关键词：肝细胞癌血管内皮生长因子血管生成KDR
- 基于RT-PCR基础上的体内重组法构建人源性胶质瘤单链抗体库被引量：2
- 2002年
- 目的 构建人源性胶质瘤噬菌体抗体库 .方法 经逆转录、套式PCR从脑胶质瘤患者血淋巴细胞中扩增出抗体轻链Vκ 和重链VH 基因 .先构建Vκ 基因库 ,并使连接Vκ 和VH基因的Linker与Vκ 基因连接 ,再将VH 基因克隆入Vκ 基因库 ,即构建成约为 3.5× 10 6 的单链抗体 (ScFv)基因库 .以Loxp5 11序列替代Linker序列 ,并将ScFv克隆入pDNA5内进行重组、鉴定 ,得到新的ScFv噬菌体抗体库 .结果 表明原初级噬菌体抗体库经Cre Loxp5 11系统重组后库容量达到 8.5× 10 8,部分测序证实抗体基因与人源性抗体基因数据库同源 .结论 利用体内重组系统明显提高了所建的抗体库容量 。
- 王彦刚章翔费舟张剑宁付洛安刘卫平赵爱志郭庆东刘先珍
- 关键词：胶质瘤噬菌体抗体库单链抗体脑肿瘤
- 乳腺癌抗hEGF单链抗体的筛选和活性鉴定
- 2010年
- 目的：从噬菌体单链抗体库筛选特异性的抗人表皮生长因子（hEGF）抗体并进行活性鉴定。方法：以hEGF为抗原，对所建抗体库进行3轮“吸附-洗脱-扩增”的亲和筛选。将筛选后的单链抗体（scFv）通过ELISA和基因测序分析等方法进行鉴定；利用MTT法在体外培养的人乳腺癌细胞系MCF-7／Her-2^＋中检测抗体的生物结合活性。结果：在亲和筛选过程中，乳腺癌噬菌体scFv得到富集，收获率逐轮得到提高，3轮筛选之后，得到了3株高亲和力的抗hEGF抗体；ELISA检测筛选出的3种有较高活性；测序结果与人hEGF抗体基因序列高度一致；该抗体对MCF-7／Her2^＋乳腺癌细胞系有特异性杀伤作用。结论：成功地筛选到特异性抗hEGF的scFv抗体，为今后的研究和应用提供依据。
- 吕勇刚史明常鹏王廷李南林赵爱志凌瑞王岭
- 关键词：噬菌体抗体库乳腺肿瘤单链抗体
- 提高柱式胶回收试剂盒DNA回收效率的最佳条件被引量：8
- 2002年
- 目的 确定提高柱式胶回收试剂盒 DNA回收效率的最佳条件 .方法 回收的基本步骤遵循试剂盒附带的厂家说明 ,在此基础上 ,改变其中所用试剂的剂量 ,或者添加原试剂盒中没有的试剂 ,并在不同条件组合下分别进行 DNA回收 .电泳后 ,通过比较条带的亮度来比较不同条件下 DNA回收效率的大小 ,逐步确定最佳的胶回收条件 .结果 提高柱式胶回收试剂盒 DNA回收效率的最佳条件为 :切胶要尽量的小 ;每 l g胶用 6 0 0 μL的 S1;溶胶时间 :5 5℃ ,10 min;沉淀时加入 3/ 5总体积的异丙醇和 1/ 10总体积的乙酸钠 (3mol· L- 1 ,p H5 .2 ) ;沉淀时间 2 0 m in;沉淀温度为 2 5℃ (室温 ) ;用 T1液溶解效率高于用水溶 ;溶解时间为 2 0 m in (5 5℃ ) .这些最佳条件中 ,大部分都对原来的条件进行了改良 .结论 应用了改良后的胶回收条件后 ,胶回收的效率提高到原来的3～
- 苏明窦科峰赵爱志李福洋
- 关键词：DNA提纯抗体库
- SARS病毒N蛋白特异性单链抗体的筛选被引量：2
- 2005年
- 目的利用大容量人源性SARS单链抗体库筛选N蛋白的特异性单链抗体。方法利用RTPCR的方法克隆了SARS病毒的N蛋白基因,克隆入原核表达载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中进行表达并经离子交换色谱纯化后得到了纯度达95%以上的N蛋白,然后以此蛋白包被25cm2组织培养瓶,对SARS单链抗体库进行先松弛,后严谨的筛选、富集,进行4轮筛选后对所筛的抗体进行ELISA鉴定。结果经过4轮的筛选、富集,得到了1株高亲和力的N蛋白单链抗体N18。结论在对SARS疾病的早期检测或筛查、SARS病毒的生活周期及发病机理的研究中N18将起到重要的作用。
- 赵爱志杨宇袁振华董小岩连忠辉崔莲仙吴小兵何维
- 关键词：SARS冠状病毒N蛋白单链抗体库SARS病毒N蛋白基因PBV220
- 全人源肝癌噬菌体单链抗体库的鉴定及筛选被引量：1
- 2004年
- 目的:对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性进行鉴定. 方法:PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率.先以人成纤维细胞黏附后再以肝癌细胞SMMC-7721为抗原对所建抗体库进行3轮“黏附-洗脱-扩增”的亲和筛选. 将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定;通过EIASA 法鉴定其与人肝癌细胞的结合活性. 结果:ScFv基因插入率为70%.在亲和筛选过程中,肝癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第3轮为第1轮的214倍.筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定后,均可检测到目的基因.得到3株特异性肝癌单链抗体. 结论:利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因,且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性.
- 薛国柱窦科峰赵爱志药立波
- 关键词：肝癌细胞
- 用Cre-Loxp系统构建人胶质瘤单链抗体噬菌体抗体库被引量：2
- 2001年
- 目的 构建人源性胶质瘤噬菌体抗体库 .方法 从胶质瘤患者外周血淋巴细胞中提取细胞总 RNA,经逆转录后用套式 PCR分别扩增抗体轻链 Vκ 和重链 VH 基因 .分别构建 Vκ5 .5× 10 6,VH3.5× 10 6基因库 ,连接 Vκ和 VH构建单链抗体 (Sc Fv)基因库 ,并克隆入表达载体 p DNA5内进行重组 ,得到 Sc Fv噬菌体抗体库 .结果 表明经 Cre- L oxp5 11系统重组后 ,噬菌体抗体库库容量达到 6 .0× 10 8,测序证实抗体基因与人源性抗体基因数据库同源 .结论 利用 Cre- L oxp5 11胞内重组系统成功地构建了较大容量的人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库 ,为进一步筛选特异性人源性胶质瘤 Sc Fv奠定了基础 .
- 王彦刚章翔费舟李兵郭庆东刘先珍张永琴赵爱志
- 关键词：胶质瘤噬菌体抗体库单链抗体
