许永伟
- 作品数：9 被引量：27H指数：4
- 供职机构：北京大学口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外贮存对人富血小板血浆生物学活性的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:探索各种贮存条件对人富血小板血浆(human platelet-rich plasma,hPRP)生物学活性的影响,研究hPRP释放生长因子的浓度作为评价hPRP生物学活性指标的可行性,为最终确定一整套应用hPRP的标准化方法奠定基础。方法:制备健康志愿者的hPRP,记录血小板计数。将每份hPRP释放生长因子分为3组,分别贮存在4℃,-20℃和-70℃,在制备后0,2,4,6,8,10d测定3组标本中转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和血小板衍生生长因子AB(platelet-derived growth factor AB,PDGF-AB)的浓度。同时,应用不同温度(4℃,-20℃,-70℃)贮存10d的hPRP释放生长因子培养人脂肪基质细胞,以MTT法比较各组标本促进细胞增殖的生物学活性。结果:在体外贮存过程中,hPRP释放生长因子TGF-β1和PDGF-AB的浓度下降很快。低温是保存hPRP释放生长因子相对适宜的环境。当贮存10d后,在-20℃和-70℃贮存的标本其TGF-β1的浓度分别为(238.55±36.00)μg/L和(261.12±55.10)μg/L,PDGF-AB的浓度分别为(46.03±17.67)μg/L和(50.78±18.70)μg/L,显著高于贮存在4℃时两种生长因子的浓度[(113.03±16.29)μg/L和(23.27±8.22)μg/L(P<0.01)]。MTT实验结果显示,不同温度贮存hPRP,其生物学活性也有显著差异,且与生长因子浓度差异基本一致。结论:hPRP释放生长因子只能在低温环境中短时间贮存,生长因子定量分析是评价hPRP生物学活性较为可靠的指标。
- 刘云松周永胜朱姗姗曾百进许永伟
- 关键词：血浆血小板源性生长因子转化生长因子Β
- rhTNF-α对成骨向分化前后的人脂肪基质细胞分泌血管生成相关生长因子的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:研究在重组人肿瘤坏死因子(recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α)刺激下人脂肪基质细胞(human adipose tissue-derived stromal cells,hADSCs)增殖的改变及成骨向分化前后血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)和胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)分泌的变化。方法:采用吸脂术获得的第4代hADSCs,以终浓度为0、1、5、10、50、100μg/L的rhTNF-α刺激hADSCs,分别在48、72、96 h后行MTT法检测不同浓度rhTNF-α对hADSCs增殖的影响;并以该浓度梯度的rhTNF-α刺激hADSCs,24 h后收集上清,以ELISA法检测VEGF、FGF-2和IGF-1的分泌情况;在成骨向诱导的第1、3、7、14天收集细胞上清,ELISA法检测上述3种生长因子分泌的变化,收集细胞上清前24 h更换培养基,并在相应孔中加入rhTNF-α,使其终浓度为10μg/L。所有ELISA数据均以相应培养孔的细胞数进行校正。结果:rhTNF-α能促进hADSCs的增殖,其作用表现为一定的浓度和时间依赖。相比于对照组,48 h时,10μg/LrhTNF-α对增殖的促进作用并不明显,但96 h时则表现为促进作用(P<0.01),而100μg/L rhTNF-α在48 h表现为抑制作用(P<0.01),96 h时则表现为明显的促进作用(P<0.01)。相对于对照组,rhTNF-α可以显著促进hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1(P<0.01);hADSCs经成骨向诱导后,上述3种生长因子的分泌有增加的趋势;不同成骨向分化阶段的hADSCs用10μg/L rhTNF-α刺激后,在诱导第1天,rhTNF-α显著促进VEGF的分泌(P<0.01),但对FGF-2和IGF-1的分泌无显著性影响;在诱导第3天和第7天,rhTNF-α对VEGF(P<0.01)、FGF-2(P<0.05)和IGF-1(P<0.05)的分泌均有促进作用;但在第14天则抑制VEGF(P<0.01)、FGF-2(P<0.05)和IGF(P<0.05)的分泌。结论:一定浓度的rhTNF-α对hADSCs的增殖有促进作用;hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1具有rhTNF-α的浓度依赖;在不同成骨向分化阶段,rhTNF-α对hADSCs分
- 曾百进余日月周永胜徐军倪永伟刘云松许永伟
- 关键词：间质细胞血管生成诱导剂
- 原代人脂肪基质细胞体内成骨能力的检测被引量：6
- 2012年
- 目的:检测原代人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal sells,hASCs)的体内成骨能力,为应用其构建组织工程化骨奠定基础。方法:酶消化法分离原代hASCs,细胞经成骨向和成脂肪向诱导后,碱性磷酸酶(al-kaline phosphatase,ALP)染色和茜素红矿化染色检测其成骨向分化的能力,油红O染色检测其成脂肪向分化的能力。体内实验使用12只裸鼠,于其背部一侧皮下植入原代hASCs+支架材料作为实验组,同一裸鼠的另一侧植入单纯支架材料作为对照组。植入4周和8周后取材,制成组织切片,进行HE染色和免疫组织化学染色观察。结果:300 mL脂肪组织中可以获得约6×107个原代hASCs。体外实验证实原代hASCs具有成骨向和成脂肪向分化的潜能。HE染色可见,植入4周和8周后植入物中有类骨组织形成,免疫组织化学染色显示骨钙素、ALP和抗人核抗体呈阳性表达。结论:原代人脂肪基质细胞与支架材料构建的复合物可以在裸鼠体内成骨。
- 刘云松周永胜葛雯姝马桂娥张晓许永伟
- 关键词：脂肪组织干细胞细胞培养技术
- rhTNF-α对人脂肪基质细胞成骨能力的影响
- 目的了解重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)对人脂肪基质细胞(hADSCs)成骨能力的影响材料与方法采用吸脂术获得的第4代hADSCs。细胞以4000/cm2的密度接种于细胞培养板中,当细胞达到70%左右融合后把细胞分...
- 曾百进周永胜余日月倪永伟许永伟刘云松
- 文献传递
- 抑制视网膜母细胞瘤结合蛋白2基因表达促进人脂肪基质细胞成骨向分化的研究被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨视网膜母细胞瘤结合蛋白2（retinoblastoma binding protein 2,RBP-2）在人脂肪基质细胞（human adipose-derived stromal cell,hASC）成骨向分化中的作用.方法 设计靶向RBP-2小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列4对,将相应寡核苷酸构建到慢病毒载体pLL 3.7中,于293T细胞进行病毒包装用于RBP-2基因敲低.采用RBP-2敲低效果好的两个siRNA序列进行病毒包装,并以非沉默siRNA的pLL 3.7质粒包装的慢病毒为对照组,感染hASC,培养第14天定量检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性并行ALP染色及茜素红矿化结节染色,检测hASC成骨向分化的差异.结果 成功构建RBP-2基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应慢病毒.慢病毒感染hASC后,RBP-2 mRNA及蛋白表达均被明显抑制.RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组的敲低效果较好,以此两组感染hASC.成骨诱导培养第14天RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组ALP活性[（299.2±22.7）、（224.3±17.7）U/g]高于对照组[（129.9±12.9）U/g,P＜0.05],RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组茜素红及ALP染色强于对照组.结论 成功构建的RBP-2 RNA干扰慢病毒能显著抑制RBP-2表达,并促进hASC向成骨细胞分化,即RBP-2可以抑制hASC的成骨向分化.
- 葛雯姝周永胜冯海兰马桂娥刘云松许永伟
- 关键词：慢病毒人脂肪基质细胞
- 缓释人富血小板血浆生长因子壳聚糖微球的制备被引量：5
- 2010年
- 目的:制备载人富血小板血浆(hPRP)生长因子壳聚糖微球,观察其体外缓释效果。方法:选用离子凝胶法制备壳聚糖微球,利用微球吸附hPRP生长因子;以微球对hPRP中主要生长因子TGF-β1的吸附率作为评价指标,优化微球制备配方,并观察优化配方微球体外缓释TGF-β1效果;以hPRP中PDGF-AB为对象考察优化配方微球对其吸附率、载生长因子率,验证微球吸附效果。结果:当壳聚糖溶液浓度为2.5mg/ml、10mg/ml多聚磷酸钠溶液滴加量为2.5ml时可获得优化的壳聚糖微球制备配方。优化配方微球对hPRP中主要生长因子TGF-β1、PDGF-AB吸附率分别为78.02%、58.28%,载生长因子率分别为3.70ng/mg、1.31ng/mg;载hPRP生长因子的微球体外21天缓释TGF-β1累计35.80ng,占吸附总量的85.52%。结论:本实验制备的壳聚糖微球可初步实现吸附hPRP复合生长因子,并初步达到体外缓释效果。
- 许永伟周永胜冯海兰
- 关键词：血浆壳聚糖微球缓释
- 人、兔、大鼠脂肪基质细胞的生物学性状对比被引量：8
- 2009年
- 目的:探讨在同一质量控制条件下,人、兔、大鼠来源脂肪基质细胞(adipose tissue-derived stromal cells,ADSCs)的体外生物学性状的异同。方法:分离培养人吸脂来源ADSCs、兔及大鼠腹股沟皮下脂肪垫来源ADSCs,体外观察3种细胞原代和传代细胞的形态及生长情况,MTT法检测细胞增殖情况。以相同密度将第2代细胞接种于24孔板,并诱导其成骨及成脂向分化。成骨诱导培养基包含100 nmol/L地塞米松、50μmol/L抗坏血酸二磷酸酯和10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠,在成骨向诱导后的第3、7、14、21天行碱性磷酸酶染色,第14、28天行茜素红染色,定量分析3种细胞体外钙沉积能力。成脂向诱导培养基包含1μmol/L地塞米松、10μmol/L胰岛素、200μmol/L吲哚美辛和0.5 mmol/L异丁基黄嘌呤,在成脂向诱导后的第7、14天行油红O染色检测细胞的成脂分化状况。结果:3种来源的脂肪均可分离培养出"成纤维细胞样"细胞,均能成脂向分化和成骨向分化,但兔ADSCs在成骨向分化时碱性磷酸酶染色呈弱阳性,无明显钙结节形成,与其他两种细胞比较,兔ADSCs的成骨向分化能力较差。结论:与人来源和大鼠来源ADSCs比较,兔皮下脂肪来源ADSCs的体外成骨能力较差,将其用于体内成骨研究时需慎重。
- 倪永伟周永胜刘云松曾百进许永伟
- 关键词：脂肪组织间质细胞细胞分化
- rhTNF-α刺激下人脂肪基质细胞分泌血管生成相关生长因子及表达成骨相关基因的机制
- 目的探讨重组人肿瘤坏死因子α影响人脂肪基质细胞(hADSCs)血管生成相关生长因子的分泌以及不同成骨向分化阶段成骨相关基因表达可能的信号机制。材料与方法采用吸脂术获得第4代hADSCs。生长因子检测组细胞种于24孔板成骨...
- 曾百进周永胜余日月倪永伟许永伟刘云松
- 文献传递
- 辛伐他汀应用于可注射型组织工程化骨的研究
- 目的探讨将辛伐他汀应用于人脂肪基质细胞(human ad pose tissue der ved stroma cel s hADSCs)和人富血小板血浆(human p atelet r ch p asma hPRP)...
- 倪永伟周永胜刘云松曾百进许永伟
- 文献传递
