许文
- 作品数：20 被引量：66H指数：4
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 自适应放射治疗的研究进展被引量：2
- 2011年
- 近年来,肿瘤放射治疗技术发展迅猛,由初期的粗放二维（常规照射）治疗模式,进展到三维适形放疗（3D-CRT）,再到三维调强放疗（IMRT）,进而发展到多维（如四维CT和图像引导放疗）,放疗已经进入了精确治疗的时代。精确治疗意味着在提高肿瘤剂量的同时,有效保护正常组织,从而提高患者的生存质量。自适应放射治疗（ART）是在3D-CRT和IMRT的基础上发展而来的新技术。本文就ART的研究进展作一综述。
- 胡庆许文王阁
- 关键词：适形放射治疗调强放射治疗螺旋断层放射治疗
- MicroRNA在HepG_2肝癌细胞表达差异谱的研究被引量：9
- 2007年
- 目的建立HepG2人肝癌细胞株与LO2正常肝细胞株microRNA(miRNA)表达的差异谱,为研究miRNA在肝细胞癌变机制中的作用提供新线索。方法体外培养HepG2人肝癌细胞和LO2人正常肝上皮细胞,Trizol法抽提细胞总RNA,Ambion′s miRNA Isolation Kit进一步分离miRNA;利用基因芯片技术,将细胞miRNA与哺乳动物miRNA芯片杂交,采用Lux-Scan3.0图像软件和SAM version 2.1进行数据分析。结果HepG2细胞与LO2细胞表达的miRNA中有146个存在着明显差异(fold change>4.0),其中80个低表达和66个高表达,最高fold change达36倍,部分miRNAs与肿瘤关系密切,其中has-miR-224为肝癌癌变相关miRNA。结论HepG2较LO2细胞miRNA低表达数多于高表达数,反映其基因表达数量更丰富,细胞代谢和增殖更活跃;部分miRNAs可能参与肝细胞癌变分子机制。
- 李琼王阁王红中杨志祥单锦露陈川张志敏许文王东李增鹏
- 关键词：肝癌细胞
- miRNA-122a靶基因预测及生物信息学分析被引量：6
- 2011年
- 目的:利用基因芯片技术分析肝癌HepG2细胞和正常肝上皮LO2细胞中miRNA的表达,并对HepG2细胞中低表达的miRNA-122a进行靶基因预测及相关生物信息学分析,为以miRNA-122a为靶点的基因治疗提供理论和实验基础。方法:利用基因芯片技术检测HepG2细胞和LO2细胞中miRNA-122a表达水平,通过生物信息学预测miRNA-122a的靶基因,并对其靶基因进行功能富集分析(GO-analysis)、信号转导通路富集分析(Pathway-analysis)和蛋白质相互作用网络分析。结果:与LO2细胞比较,miRNA-122a在HepG2细胞中呈低表达。miRNA-122a预测靶基因有1104个,其靶基因集合功能分别富集于碳水化合物生物合成、核苷酸代谢、细胞因子受体结合、细胞周期等生物学过程(P<0.001);信号转导通路显著富集于JAK-STAT信号通路、Wnt信号通路、MAPK信号通路、ErbB信号通路、细胞周期等信号转导通路(P<0.001)。结论:miRNA-122a在HepG2细胞中呈现低表达,miRNA-122a预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中。
- 蒋永容陈川张志敏郑继军许文罗美林戴楠李梦侠杨宇馨李增鹏王东王阁
- 关键词：基因芯片靶基因生物信息学
- 肿瘤转移抑制基因Nm23-H1融合蛋白的表达纯化及其功能的初步研究被引量：4
- 2010年
- 目的利用人Nm23-H1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,并对蛋白其活性进行初步分析。方法将重组质粒pET28a-Nm23-H1转化入E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定。用金属螯合层析技术进行蛋白纯化,得到Nm23-H1融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blot鉴定纯化蛋白,并用RP-HPLC法、电泳迁移率变动分析实验检测Nm23-H1融合蛋白的核苷二磷酸激酶(NDPK)活性及核酸内切酶(AP)修复活性。结果转化溶原菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,为可溶性蛋白。Ni2+柱纯化后得到Nm23-H1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确。RP-HPLC法就及电泳迁移率变动分析实验证明所纯化的Nm23-H1融合蛋白具有NDPK活性,不具有AP修复活性,但可以增加APE1蛋白的AP修复活性。结论利用原核表达载体pET28a-Nm23-H1在E.coliBL21(DE3)中高效表达和纯化得到具有NDPK活性,但无AP修复活性的Nm23-H1融合蛋白,此蛋白可以增强APE1蛋白的AP修复活性,共同参与细胞的DNA损伤修复。
- 张志敏杨雪琴许文戴楠曾林立李增鹏王东王阁
- 关键词：NM23-H1基因原核表达蛋白纯化
- RAI16基因真核表达载体的构建及在HepG2中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的构建人视黄酸诱导蛋白16(retinoic acid induced 16,RAI16)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)的融合基因真核表达载体pEGFP-C1-RAI16,使RAI16-EGFP融合蛋白在人肝癌细胞株HepG2中得到表达。方法采用PCR技术,从含有目的基因的质粒克隆模板中钓取并扩增出RAI16全长编码基因,构建RAI16与EGFP的融合基因真核表达载体pEGFP-C1-RAI16,用脂质体转染技术将pEGFP-C1-RAI16导入HepG2,激光共聚焦分析RAI16亚细胞定位及Western blot检测RAI16-EGFP融合蛋白的表达。结果经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实,RAI16基因已正确插入pEGFP-C1中EGFP基因的下游,获得融合基因表达载体pEGFP-C1-RAI16。将pEGFP-C1-RAI16导入HepG2细胞24 h后,激光共聚焦分析显示RAI16-EGFP融合蛋白主要表达于细胞质内。Western blot结果显示,转染pEGFP-C1-RAI16 24、48 h和72 h后,RAI16基因在蛋白水平的表达逐渐增高,而AFP的表达逐渐下调。结论成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-RAI16,并在HepG2细胞中进行了表达。
- 雒喜忠王阁郑继军陈川张志敏李琼许文胡庆王东李增鹏
- 关键词：融合蛋白增强型绿色荧光蛋白HEPG2细胞
- PAK4在肝细胞肝癌组织中的表达及其临床意义被引量：2
- 2008年
- 目的:研究原发性肝细胞肝癌(HCC)组织中磷酸化PAK4(Phospho-PAK4)的表达水平及其临床意义。方法:利用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测59例HCC组织和4例正常肝组织中磷酸化PAK4蛋白的表达情况,并分析其与肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移和TNM分期等临床病理因素之间的关系。结果:59例HCC组织中磷酸化PAK4在肝癌细胞核表达阳性率100.0%,胞浆表达率仅5.1%,其中癌细胞核表达强阳性率32.2%,并与肝癌分化程度的高低、有无淋巴结转移和TNM分期具有明显相关性(P<0.05)。结论:PAK4磷酸化可能是其在HCC的发生发展过程中重要的调控方式之一。
- 李琼王阁杨志祥单锦露张志敏陈川许文雒喜忠王东
- 关键词：肝细胞肝癌磷酸化免疫组织化学组织芯片
- APE1在DEN诱导大鼠肝细胞癌形成过程中作用的研究被引量：3
- 2008年
- 目的:研究DNA损伤修复关键酶脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1Aep1)在大鼠肝细胞癌形成过程的动态变化,初步探讨Apel与肝细胞癌发生、发展的关系。方法:采用改良法建立二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱发大鼠原发性肝癌模型应用免疫组化SP法检测Ape1和PCNA在不同诱癌阶段的表达情况。结果:正常大鼠肝脏组织中Ape1呈胞核高表达,在不同诱癌阶段的肝脏组织中Ape1表达特征有所改变,呈核浆共同表达或、单纯胞浆表达;随着诱癌时间的延长PCNA表达逐渐增加。结论:在DEN诱导大鼠肝细胞癌模型的过程的同时Ape1具有表达由核内转向浆内的特征,提示核内DNA损伤修复减少导致基因突变增加,可能是肝细胞癌发生、发展的重要机制之一。
- 许文王阁杨志祥陈川张志敏李琼雒喜忠胡庆王东李增鹏
- 关键词：二乙基亚硝胺免疫组织化学
- Tec激酶区作用蛋白RAI16的原核表达和纯化
- 2008年
- 目的:利用原核表达系统构建Tec激酶区作用蛋白RAI16的融合蛋白表达载体,并进行表达条件的优化和初步纯化.方法:设计基因拼接引物,合成RAI16cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的RAI16基因与pGEX4T-2载体相连接、转化、筛选.将鉴定阳性的重组子质粒转人大肠杆菌BL-21表达菌中,采用SDS-PAGE电泳分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白的表达.结果:成功构建RAI16蛋白原核表达载体.采用0.4mmol/LIPTG、30℃诱导4h,获得较高表达目的蛋白.融合蛋白主要以包涵体形式表达,将包涵体进行尿素法变性复性和亲和层析柱处理后,获得可溶的高纯度GST-多肽融合蛋白.结论:Tec激酶区作用蛋白RAI16融合蛋白表达的载体和纯化,是制备RAI16多抗以及进一步验证与Tec体外结合作用实验的基础.
- 许文王阁邓婧杨进郑继军王红中胡庆王东李增鹏杨志祥
- 关键词：核苷酸蛋白质结构
- 干细胞 肿瘤干细胞与肝细胞癌发生关系研究进展被引量：4
- 2007年
- 越来越多的实验结果证实肿瘤起源于干细胞,诸如白血病、乳腺癌、脑肿瘤等已成功分离出肿瘤干细胞,有关肝干细胞与肝癌的研究较为成熟,理论上应存在肝癌干细胞,但因缺乏特异性标志物,相关的肝癌干细胞分离尚未成功。
- 许文王阁
- 关键词：干细胞肿瘤干细胞肝细胞癌癌发生
- 原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的分析(英文)被引量：1
- 2008年
- 背景:近年来,有观点认为原发性肝癌的发生机制可能为肝干细胞分化不全或分化异常所致。目前,肝干细胞研究正处于起步阶段,对人原发性肝癌的"干细胞起源"学说尚需进一步验证。目的:观察原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的活化、分布、来源和免疫表达特征。设计:观察对比实验。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心。对象:实验于2003-09/2004-07在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心完成,选用94例肝细胞癌和12例肝内胆管细胞癌和10例混合型肝癌石蜡包埋组织,同时选用5例肝硬化和4例正常肝组织作为实验对照,均取自病理科存档资料。肝癌组织均为患者首次肝癌切除手术时采取,包括肿瘤组织和癌旁组织,患者均无化疗和放射治疗史,并对受检项目知情同意。实验主要抗体均购自SantaCruz公司。方法:采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学SP方法(检测的免疫标志有鼠抗人细胞角蛋白19单克隆抗体、鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体、鼠抗人细胞角蛋白8&18单克隆抗体、鼠抗人c-kit单克隆抗体、鼠抗人Thy-1单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体)观察各病变类型肝干细胞免疫标志表达情况。主要观察指标:各病变类型肝干细胞免疫标志表达情况。结果:在原发性肝癌不同病理组织类型中干细胞免疫标志均有不同程度的表达,均可观察到肝干细胞向肝癌细胞的转化,以混合型肝细胞癌中肝干细胞免疫表型表达率最高(P<0.05)。正常组和肝硬化组干细胞免疫表型特征为阴性。结论:不同病理组织类型的肝癌组织中均存在不同分化状态和不同来源的肝干细胞。
- 陈川王阁索金友郑继军张志敏李琼许文雒喜中邓婧王红中李增鹏王东
- 关键词：原发性肝癌肝干细胞癌发生免疫组织化学
