薛鹏浩 作品数:9 被引量:21 H指数:3 供职机构: 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 农业科学 更多>>
人博卡病毒TaqMan探针实时定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:1 2010年 目的:建立人博卡病毒(HBoV)核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时定量PCR检测方法,并对临床样本进行检测。方法:比对编码HBoV非结构蛋白NP-1的基因序列,选取其保守片段设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并与传统PCR方法进行比较,然后分别对两者的灵敏性、特异性、稳定性及临床样本检验的适用性等进行评价。结果:所建立的实时定量PCR检测方法可用于HBoV的特异性检测;相对于传统PCR所达到的250拷贝/反应的检测灵敏度,实时定量PCR的检测灵敏度可高达10拷贝/反应,检测范围为109~101拷贝/反应,且具有良好的特异性和重复性;初步用于76份临床呼吸道标本检测,检出阳性5例,高于普通PCR方法(3/76)。结论:建立了HBoV TaqMan探针实时定量PCR检测方法,并可用于临床鼻咽拭子样本的检测,为开展HBoV流行病学监测及早期临床诊断提供了技术手段。 薛鹏浩 张淼涛 张骞 张钫 袁武梅 麻粉莲 王翔 郑丽舒关键词:人博卡病毒 TAQMAN探针 实时定量PCR 人博卡病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备 被引量:2 2012年 目的表达纯化人博卡病毒(human Bocavirus,HBoV)VP2蛋白,采用杂交瘤方法制备抗HBoVVP2蛋白的单克隆抗体。方法应用原核表达载体pET-30a和大肠埃希菌表达VP2蛋白,并用固定化金属亲和层析,纯化后的蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术和间接ELASA方法筛选阳性的杂交瘤细胞,并对单克隆抗体进行分型检测和滴度测定。结果表达并纯化获得了重组HBoVVP2蛋白,利用杂交瘤技术得到单克隆IgG抗体,抗体效价达到1:4×10^5。结论利用HBoVVP2蛋白免疫制备了单克隆抗体,并具有较高的效价。本研究为快速诊断和研究HBoV打下基础。 赵智慧 薛鹏浩 魏建民 张骞 郑文芝 麻粉莲 袁武梅 郑丽舒关键词:人博卡病毒 人博卡病毒和人偏肺病毒核酸检测方法的建立及初步应用 儿童急性呼吸道感染(ARTI)是世界范围内小儿最常见的致病和致死原因之一,在过去几十年里,由于更先进仪器的应用及高灵敏性检测方法的建立,使得越来越多的呼吸道病毒被人们发现,人博卡病毒和人偏肺病毒即是近些年新发现的呼吸道病... 薛鹏浩关键词:人博卡病毒 人偏肺病毒 文献传递 恩诺沙星微囊在猪体内的药物动力学 被引量:2 2011年 为了给兽医临床合理用药提供依据,分析恩诺沙星微囊(Enrofloxacin Microcapsules,EM)和恩诺沙星原粉(Enrofloxacin,ENR)在猪体内的药物代谢动力学过程。猪单剂量分别灌服EM和ENR30mg.kg-1,72h内16次前腔静脉采血,高效液相色谱法(HPLC)测定猪血浆中ENR的质量浓度。结果表明,6头猪灌服EM和ENR后,其药动学配置均符合有吸收因素二室药代动力学模型。最佳药时曲线方程为ρ(EM)=11.326 3e-0.353 8t+5.420 6e-0.066 1t-16.746 9e-0.979 8t和ρ(ENR)=11.251 1e-0.934 7t+5.330 1e-0.079 9t-16.581 2e-2.965 7t。恩诺沙星微囊在猪体内的吸收相半衰期(t1/2ka)为(0.769 5±0.250 9)h,分布相半衰期(t1/2a)为(2.160 3±0.704 1)h,消除相半衰期(t1/2β)为(10.522 4±0.719 5)h,药时曲线下面积(AUC)为(92.924 3±5.308 4)mg.L-1.h。说明恩诺沙星微囊在猪体内吸收迅速,消除相对较慢。 赵瑞娇 胡亚南 张凤凤 严元宠 赵建乐 薛鹏浩 孔蓓 卢怡竹 李引乾关键词:药动学 高效液相色谱法 重组人干扰素λ1的表达、纯化及生物活性研究 被引量:1 2010年 目的:利用大肠杆菌系统表达重组人Ⅲ型干扰素λ1(rhIFN-λ1),并进行纯化,以比较其与重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)生物学活性的差异。方法:密码子优化的rhIFN-λ1基因与pET-44a载体连接构建原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物经系列层析纯化;采用细胞病变抑制法比较纯化的rhIFN-λ1与rhIFN-α2b、市售rhIFN-λ1的抗病毒活性;采用MTS法比较这些干扰素的抗肿瘤细胞增殖活性。结果:基因优化后的rhIFN-λ1在大肠杆菌中得以高效表达,用所建立的纯化工艺可制备得到纯度达95.7%的rhIFN-λ1;rhIFN-λ1的抗病毒比活性为3.2×105 U/mg,比市售rhIFN-λ1的比活性(1.1×105 U/mg)略高,抗肿瘤细胞增殖活性为rhIFN-α2b的1.7倍。结论:获得的rhIFN-λ1具有剂量依赖的抗病毒活性和抗增殖活性,其抗病毒活性比市售rhIFN-λ1略高,抗细胞增殖活性高于rhIFN-α2b,提示rhIFN-λ1有较大的应用前景。 张钫 郑丽舒 袁武梅 王翔 薛鹏浩 麻粉莲 张骞关键词:纯化 抗病毒活性 抗增殖活性 甲型H1N1流感病毒HA基因RT-LAMP检测方法的建立与初步应用 被引量:9 2011年 目的:建立反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)检测甲型H1N1流感病毒HA基因的方法,并用于检测临床样本。方法:通过在线软件Primer Explorer V4设计H1N1 HA基因的RT-LAMP引物,建立RT-LAMP检测方法,并评价其灵敏度和特异度。结果:与传统RT-PCR方法相比,RT-LAMP检测方法具备更高的灵敏度,达到10个拷贝,并且具有良好的特异性;在76份呼吸道感染儿童的咽拭子标本中检测到2份阳性,与RT-PCR方法检测结果相同。结论:建立的H1N1 RT-LAMP检测方法灵敏特异,简单快速,具备H1N1现场检测应用前景。 王翔 张骞 张钫 袁武梅 麻粉莲 薛鹏浩 赵智慧 郑文芝 郑丽舒关键词:甲型H1N1流感病毒 RT-PCR RT-LAMP 人博卡病毒LAMP检测方法的建立及初步应用 被引量:3 2010年 目的 建立环介导等温扩增技术(LAMP)检测人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)基因的方法,并用于检测临床样本.方法 通过在线软件设计工具Ptimer Explorer V4设计HBoV NP-1基因的LAMP引物,建立LAMP检测方法,并评价其灵敏度和特异度.结果 与传统PCR方法相比,LAMP法检测灵敏度更高,可达到10拷贝,特异性较强;在76份呼吸道感染儿童的咽拭子标本中检测到5份阳性.结论 建立HBoV LAMP检测方法灵敏特异,简单快速,有望进行临床检测HBoV. 王翔 许信刚 张骞 张钫 袁武梅 麻粉莲 薛鹏浩 郑丽舒关键词:基因 核酸扩增技术 氟苯尼考微囊在猪体内的药物动力学研究 被引量:3 2011年 为了给兽医临床合理用药提供依据,分析氟苯尼考微囊(Florfenicol Microcapsules,FM)和氟苯尼考原粉(Florfenicol,FF)在猪体内的药物代谢动力学过程。猪单剂量分别灌服FF和FM 30 mg.kg-1,36 h不同时间16次前腔静脉采血,高效液相色谱法测定血药质量浓度。结果表明,FM和FF在猪体内的药物动力学配置均符合有吸收因素一室开放模型,其药-时曲线最佳方程分别为ρFM=3.772 7(e-0.047t-e-0.847 7t)和ρFF=0.375 9(e-0.258 1t-e-4.670 9t)。吸收半衰期(t1/2Ka)分别为(0.944 6±0.507 5)h,(0.155 0±0.030 1)h;消除半衰期(t1/2Ke)分别为(15.214 0±3.024 9)h,(2.694 5±0.169 5)h;药-时曲线下面积(AUC)为(77.3111±13.312 7)mg.L-1.h,(1.374 7±0.606 0)mg.L-1.h;峰质量浓度(ρmax)为(2.937 1±0.232 2)mg.L-1,(0.298 3±0.023 9)mg.L-1;达峰时间(tmax)为(3.951 0±1.533 9)h,(0.675 3±0.104 6)h。结果表明,氟苯尼考微囊口服给药吸收较慢但完全,达峰时间较长,消除缓慢,能够发挥长效作用。 胡亚南 李引乾 张凤凤 薛鹏浩 赵建乐 孔蓓 卢怡竹 赵瑞娇关键词:药物动力学 呼吸道合胞病毒TaqMan探针实时定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:1 2012年 目的:建立呼吸道合胞病毒(RSV)核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,并对临床样本进行检测。方法:比对编码RSV非编码蛋白的基因序列,选取其保守片段设计引物和探针,建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,并与传统RT-PCR方法进行比较,分别对两者的灵敏性、特异性、重复性及临床样本检验的适用性进行评价。结果:所建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法可用于RSV的特异性检测。相对于传统RT-PCR方法100拷贝,反应的检测灵敏度,实时荧光定量RT-PCR的检测灵敏度达到10拷贝/反应,检测范围为1010-101拷贝/反应,且具有良好的特异性和重复性。从169份临床呼吸道标本中检出RSV阳性40例,高于普通PCR方法(31/169)。结论:建立了RSV的TaqMan探针实时定量PCR检测方法,并可用于临床鼻咽拭子样本的检测,在临床上具有较好的应用前景。 郑文芝 张骞 魏建民 薛鹏浩 王翔 赵智慧 郑丽舒关键词:呼吸道合胞病毒 TAQMAN探针 实时定量RT-PCR