蔡厚安
- 作品数：14 被引量：29H指数：3
- 供职机构：第二军医大学长征医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项上海市科委重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 血清代谢组学技术在2型糖尿病肾病早期诊断中的应用被引量：9
- 2010年
- 目的探讨基于液质联用(LC/MS)的代谢组学技术在2型糖尿病肾病动物模型KK-Ay小鼠不同病程的诊断应用价值。方法试验组KK-Ay小鼠和对照组C57BL/6J小鼠各15只,从8周龄开始,每4周收集24 h尿液测尿微量白蛋白,乙醚麻醉后空腹采血,分离血清检测空腹血糖、甘油三酯、尿素氮、肌酐、白蛋白等,同时对血清样品预处理进行LC/MS检测及代谢组学分析。第8、12、20周龄两组各处死3只小鼠,灌洗取肾后进行病理学检查。结果12周龄后KK-Ay小鼠空腹血糖、甘油三酯、尿微量白蛋白与C57BL/6J小鼠有统计学差异(P<0.01)。KK-Ay小鼠12周龄系膜基质增加明显,20周龄出现基底膜增厚等病理改变。代谢组学主成份分析显示,各周龄KK-Ay小鼠与C57BL/6J小鼠血清代谢图谱差异显著,早于血生化和肾脏病理变化,代谢物模式的经时变化轨迹图能够反映2型糖尿病肾病的进展规律。结论基于LC/MS的代谢组学技术对动物血清的检测分析能准确区分各周龄试验组和对照组小鼠,并揭示病程进展规律,其作为一种辅助手段,可能在2型糖尿病肾病的早期诊断中具有应用前景。
- 董哲毅周伟华参高翔蔡厚安华振浩付莉莉梅长林
- 关键词：糖尿病肾病代谢组学液质联用主成份分析
- 早期应用低蛋白加α酮酸饮食对延缓KK-Ay小鼠糖尿病肾病进展的作用被引量：1
- 2009年
- 目的:观察早期应用低蛋白加α酮酸饮食对2型糖尿病肾病动物模型KK-Ay小鼠肾脏病变的影响,并探讨其作用机制。方法:雄性KK-Ay小鼠30只,12周龄开始给予不同饮食干预,分为正常蛋白组(22%酪蛋白,NPD组)15只和低蛋白加α酮酸组(5%酪蛋白+1%α酮酸,Keto组)15只;另设性别周龄相同的C57/BL6J小鼠15只为对照(CON组),始终给予正常蛋白饮食。检测第8、14、20周龄各组小鼠尿白蛋白,血清中葡萄糖、胰岛素、糖化血红蛋白、胆固醇、三酰甘油、尿素氮、肌酐、白蛋白等生化变化。对20周龄小鼠肾组织病理进行图文分析和半定量检测,免疫组化方法测定肾组织中TGF-β、FN表达量。结果:Keto组小鼠14周龄时血糖、ACR(白蛋白/肌酐)、尿白蛋白排泄率、三酰甘油低于NPD组(P<0.05),20周龄时糖化血红蛋白、血胰岛素、肾小球面积及系膜区面积显著降低(P<0.05)。免疫组化结果显示NPD组小鼠肾内TGF-β蛋白表达及肾小球FN沉积明显增多(P<0.05)。结论:早期应用低蛋白加α酮酸饮食能够显著降低KK-Ay小鼠尿白蛋白,减轻系膜基质增生和结节性硬化,而不引起营养不良,并可能通过减少TGF-β表达抑制FN等系膜基质增加而延缓糖尿病肾病的进展。
- 董哲毅高翔周伟华参华振浩蔡厚安付莉莉梅长林
- 关键词：限制蛋白质糖尿病肾病肾间质纤维化
- 塞来昔布对多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖及细胞周期的影响被引量：3
- 2006年
- 环氧化酶-2（COX-2）的表达除与已知的炎症反应有关外，其在肿瘤的发生发展中也起重要作用。动物实验及流行病学资料表明，COX-2特异性抑制剂塞来昔布可有效抑制结直肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌等肿瘤的发生发展。多囊肾囊肿衬里上皮细胞具有类似良性肿瘤的高增殖抒性，如能抑制其增殖活性，则可阻止囊肿的产生与长大，达到干预性治疗的目的。本研究观察了塞来昔布对囊肿衬里上皮细胞增殖及周期的影响，并初步探讨其作用机制。
- 许涛梅长林曲巍叶朝阳付莉莉蔡厚安李丹
- 关键词：囊肿衬里上皮细胞上皮细胞增殖塞来昔布细胞周期肾囊肿多囊肾COX-2特异性抑制剂
- 罗格列酮对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用及其机制.方法 MTT法检测罗格列酮对ADPKD囊肿衬里上皮细胞系（WT9-12）细胞增殖的作用;流式细胞术检测罗格列酮对WT9-12细胞周期及凋亡的影响;Western印迹法检测罗格列酮对哺乳类动物的雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-p70核糖体S6激酶（p70S6K）信号通路的影响.给予PPARγ特异性抑制剂GW9662及PPARγsiRNA瞬时转染WT9-12细胞,检测罗格列酮对细胞增殖及对mTOR信号通路的作用是否为PPARy依赖性的.结果 罗格列酮抑制WT9-12细胞增殖,此作用在0～200 μmol/L范围内呈剂量依赖性及时间依赖性,作用72 h的50%抑制率浓度为100μmol/L.细胞周期分析显示,罗格列酮（50、100 μmol/L）作用后,G0/G1期细胞较对照组显著增多（65.43%、64.02%比49.65%,P＜0.05）.50、100 μmol/L罗格列酮对细胞凋亡影响不大,高浓度（200 μmol/L）罗格列酮可使凋亡细胞达6%（正常对照组为4%）.罗格列酮可呈时间及剂量依赖性下调WT9-12细胞p70S6K磷酸化表达,而对mTOR及其另一个下游4E结合蛋白1（4E-BP1）磷酸化水平无明显影响.加入GW9662及转染PPARγsiRNA阻断PPARγ表达后,可部分阻断罗格列酮对p70S6K磷酸化的影响（P＜0.01）.结论 罗格列酮可抑制ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖和阻滞细胞周期,可不依赖于mTOR途径直接下调p70S6K磷酸化表达.罗格列酮对ADPKD囊肿衬里上皮细胞p70S6K磷酸化的影响是PPARγ依赖性的.
- 刘春艳梅长林袁莉张懿付莉莉蔡厚安
- 关键词：细胞周期罗格列酮P70S6K
- 达依泊汀α在维持性血液透析患者中单次静脉给药的安全性和耐受性
- 2009年
- 目的评估长效红细胞生成素达依泊汀α在维持性血液透析（MHD）患者中单次静脉给药的安全性和耐受性。方法采用单中心、开放性临床试验方法。选择MHD3个月以上，病情稳定的患者43例，其中男26例，女17例，分为5个剂量组，分别给予达依泊汀α 0．225、0．45、0．9、1．8、3．6μg／kg单次静脉注射，观察给药前后患者的生命体征、临床症状、心电图（ECG）和生化指标等变化，评价其安全性和耐受性。结果达依泊汀α的最大耐受剂量达3．6μg／kg。与达依泊汀α可能有关的不良反应为高血压加重（7％）。1例出现严重不良事件（患者死亡），但与达依泊汀α无关。观察期间未发现与达依泊汀α相关的严重不良反应。结论达依泊汀α的安全性和耐受性良好。
- 孙琳琳戎殳叶朝阳孙丽君蔡厚安马晓红陈静赵学智徐成钢孙建军梅长林
- 关键词：血液透析药物耐受性
- 塞来昔布诱导多囊肾囊肿衬里上皮细胞凋亡的实验研究被引量：7
- 2006年
- 目的通过观察特异性环氧酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib,CXB)诱导人多囊肾囊肿衬里上皮细胞凋亡,初步探讨该药诱导细胞凋亡的作用机制。方法(1)原代培养囊肿衬里上皮细胞,分为对照组、CXB组,采用Brdu法检测细胞增殖状态。(2)应用透射电镜观察细胞超微结构。(3)TUNEL法检测细胞凋亡及凋亡率。(4)应用AnnexinV+流式细胞术检测CXB诱导细胞凋亡及凋亡率。(5)应用免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果(1)Brdu结果显示,CXB能抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞的增殖,在24～72 h,浓度为(0．25～2)×10^(-5) mol/L的范围内呈时间和剂量依赖性。(2)电镜下可见细胞核浓缩、染色质聚集、胞浆空泡化、凋亡小体出现、沟裂和裸核形成等典型凋亡征象。(3)TUNEL法显示,对照组细胞凋亡率为(2．8±0．2)%,2×10^(-5) mol/L CXB作用24、48 h细胞凋亡率为(28．5±1．6)%和(48．5±1．2)%,两者差异有统计学意义(P＜0．05)。(4)AnnexinV+流式细胞仪法结果显示,不同浓度(0．5、1、2×10^(-5) mol/L)CXB处理24 h凋亡率分别为(7．15±0．11)%、(7．76±0．08)%和(12．15±0．07)%,显著高于无血清对照组(3 15±0．05)%；不同浓度CXB处理48 h的凋亡率分别为(18．36±0．17)%、(24．87±0．25)%和(53．66±0．32)%,显著高于无血清对照组(13．53±0．21)%,组间差异均有统计学意义(P均＜0．01)。(5) Western印迹结果显示,随CXB作用时间延长,Bcl-2的表达逐渐减弱而Bax的表达逐渐增强,Bcl-2/Bax的比值逐渐减少。结论塞来昔布呈时间和剂量依赖性抑制囊肿衬里上皮细胞增殖,通过下调Bcl-2,上调Bax,减少Bcl-2/Bax的比值诱导细胞凋亡。本研究结果为将CXB用于治疗常染色体显性多囊肾病提供了实验依据。
- 许涛梅长林曲巍叶朝阳付莉莉蔡厚安李丹
- 关键词：多囊肾常染色体显性凋亡塞来昔布
- 多囊蛋白1氨基段融合蛋白对肾小球系膜细胞细胞外基质及其降解基因表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的研究多囊蛋白-1氨基段（PC-INF）融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞（RMC）Ⅳ型胶原及其降解调控基因表达的影响。方法用实时荧光定量RT-PCR法检测PC-1NF融合蛋白对RMCIV型胶原和细胞外基质（ECM）降解调控基因基质金属蛋白酶、金属蛋白酶1组织抑制剂（MMP-2、TIMP-1）表达的作用。ELISA方法检测培养的细胞上清液中Ⅳ型胶原含量的变化。免疫细胞化学方法观察融合蛋白对细胞核因子c-jun和c-fos表达的影响。Western印迹检测融合蛋白对蛋白激酶C（PKC）-α信号转导通路的影响。结果4mg／LPC-1NF融合蛋白作用48h后，RMCⅣ型胶原mRNA从（103±16）降至（82±11）拷贝，106GAPDH，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），培养上清液中的IV型胶原含量也明显降低；MMP2mRNA从（1150±90）升至（2770±）拷贝，106GAPDH，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而TIMP-1mRNA从（5530±480）降至（3040±370）拷贝，106GAPDH，与对照组差异有统计学意义（P〈0．01）。DAB染色显示，融合蛋白作用后，RMC的c-jun和c-fos表达受到明显抑制。RMC经不同浓度PC-1NF融合蛋白作用48h后，随着融合蛋白浓度升高。PKC-α的表达逐渐减弱。结论PC-1NF融合蛋白可通过上调促进ECM降解的MMP-2和抑制ECM降解的TIMP-1之间的比值而促进Ⅳ型胶原降解；还可能通过PKC-α信号转导通路，抑制c-ju．和c-fos表达，从而抑制RMC的增殖和ECM的合成。
- 关天俊梅长林王文靖付莉莉赵海丹蔡厚安
- 关键词：常染色体显性多囊肾病细胞外基质系膜细胞
- 雷帕霉素抑制人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖及VEGF表达被引量：2
- 2010年
- 目的探讨雷帕霉素对常染色体显性多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的抑制作用及其机制。方法 MTT法检测WT9-12细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;Western blot检测周期相关蛋白(cyclinD、P21)、凋亡相关蛋白(BCL-2/BAX)及VEGF表达。结果雷帕霉素可抑制WT9-12细胞的增殖,使细胞周期停滞在G0/G1期并促进细胞凋亡。雷帕霉素可下调WT9-12细胞cyclinD、上调P21表达,下调BCL-2、上调BAX表达。原代培养的多囊肾囊肿衬里上皮细胞及WT9-12细胞的VEGFmRNA表达明显高于正常肾小管上皮细胞(P<0.05)。雷帕霉素可抑制WT9-12细胞VEGF的表达(P<0.05)。结论雷帕霉素可通过抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖、促进凋亡及降低VEGF表达而减少血管形成,从而抑制多囊肾病进展。
- 刘春艳梅长林袁莉张懿付莉莉蔡厚安王雪琦
- 关键词：常染色体显性多囊肾病雷帕霉素细胞周期血管内皮生长因子
- 未折叠蛋白反应参与小鼠急性肾缺血/再灌注损伤被引量：6
- 2009年
- 目的探讨未折叠蛋白反应(UPR)在小鼠急性肾缺血/再灌注损伤中的作用。方法将C57B6小鼠分为正常、假手术组和0、4、12、24 h手术组(分别于术后0、4、12和24 h处死小鼠),留取各组小鼠的左侧肾脏。苏木精-伊红(H-E)、过碘酸雪夫反应(PAS)和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色观察各组肾脏组织学变化,Western印迹法和实时聚合酶链反应(PCR)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和caspase12在各组小鼠肾组织中的表达。结果H-E、PAS染色可见24 h手术组的肾小管上皮细胞坏死明显,病变最重的部位为外髓外带近端小管,肾小管坏死评分为(2.930 0±0.131 1)分,显著高于其他组(P值均<0.01)。TUNEL染色可见24 h手术组的肾小管上皮细胞凋亡指数为(36.17±7.53)%,显著高于其他各组(P值均<0.01)。Western印迹法结果显示,12 h手术组的GRP78和caspase12蛋白水平显著高于其他各组(P值均<0.01)。实时PCR结果显示,4 h手术组的GRP78和caspase12 mRNA水平显著高于其他各组(P值分别<0.01、0.05)。结论在夹闭左侧肾动脉致急性肾缺血/再灌注损伤模型中,小鼠左侧肾脏组织学损伤显示再灌注后24 h最严重。GRP78和caspase12在再灌注后其mRNA和蛋白表达水平明显升高或激活,其变化早于组织学改变。提示UPR可能在急性肾缺血/再灌注损伤中发挥重要作用。
- 肖敏王雪琦蔡厚安刘晔刘冬梅梅长林
- 关键词：急性肾损伤未折叠蛋白反应GRP78
- 膜联蛋白Ⅱ基因短发夹RNA表达载体的构建和鉴定
- 2006年
- 目的:构建针对膜联蛋白(annexin)Ⅱ的短发夹RNA(shRNA)的表达载体,观察其对目的基因表达的影响。方法:根据GenBank中annexinⅡ基因已知序列设计了2条序列,即annexinⅡshRNA1、annexinⅡshRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照。据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接人pGenesil1载体,转化扩增后进行序列测定。3种重组表达载体均转染HEK293细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western印迹法分别在基因和蛋白水平上检测各自annexinⅡ的表达,以未转染细胞作为空白对照。结果:3种重组表达载体(pGenesil1-annexinⅡshRNA1、pGenesil1-annexinⅡshRNA2和pGenesil1-negative shRNA)经限制性酶切及测序分析证明基因插入正确。转染HEK293细胞后,转染pGenesil1-annexinⅡshRNA2组细胞annexinⅡ基因和蛋白表达明显低于转染pGenesil1-annexinⅡshRNA1、pGenesil1-negative shRNA以及空转染细胞(P<0.05),而后三者间没有明显差异。结论:成功构建了针对annexinⅡ的shRNA表达载体(pGenesil1-annexinⅡshR-NA2),转染细胞后可抑制annexinⅡ基因表达。
- 刘亚伟戴兵梅长林付莉莉蔡厚安
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA
