苏岩 作品数:2 被引量:4 H指数:2 供职机构: 哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心 更多>> 发文基金: 北京市自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
AMPK与心血管疾病 被引量:2 2013年 AMPK(AMP-activated protein kinase,腺苷酸活化蛋白激酶)是一种异源三聚体酶,存在于多种组织,如肝脏、骨骼肌、心肌、脑等。AMPK对调节体内能量平衡起到至关重要的作用,被称为"细胞能量感受器"。当机体受到生理或病理刺激导致能量消耗时,AMPK被激活,关闭合成代谢途径,抑制ATP消耗;开启分解代谢途径,维持细胞内ATP总水平。研究表明,AMPK的激活能够通过一些生理和药理作用因子,对心血管疾病产生积极的调节。因此,进一步深入对AMPK调节作用的研究,将为治疗心血管疾病提供新的治疗靶点。 苏岩 季宇彬 郭鹏关键词:心血管疾病 治疗靶点 能量代谢 AMPKγ基因沉默对AMPK活化及调血脂作用的影响 被引量:2 2013年 构建针对AMPKγ基因的siRNA慢病毒载体,检测其介导的RNA干扰对人肝癌细胞株HepG2中AMPKγ基因表达的沉默作用,并考察AMPKγ基因沉默对天然AMPK激动剂虫草素激活AMPK和调节脂质合成的影响。设计并合成了特异针对AMPKγ基因的shRNA Oligo片段,经退火、酶切、连接将目的片段插入到慢病毒干扰载体中,经感受态细胞转化、PCR鉴定挑选阳性克隆测序后,与包装质粒和包膜质粒共转染至293T细胞包装病毒,收集浓缩病毒进行滴度测定。通过荧光观察和Western blotting筛选可有效沉默AMPKγ基因的慢病毒株。在AMPKγ基因稳定沉默细胞株中,利用Western blotting考察AMPKγ基因沉默对虫草素促AMPK磷酸化活性的影响,油红O染色观察虫草素对细胞内脂质堆积情况的影响,并用试剂盒测定细胞内TC、TG含量。结果表明,成功构建了4种特异针对AMPKγ基因的慢病毒干扰载体(GR084、GR085、GR086、GR087),Western blotting检测结果显示重组慢病毒株GR085的基因沉默效率最高;给予虫草素并不会影响AMPKγ蛋白的表达,但能够显著上调正常细胞内AMPK蛋白的磷酸化水平。利用慢病毒稳定沉默AMPKγ基因的表达后,虫草素促AMPK磷酸化作用和下调脂质合成作用被显著抑制。研究表明,AMPKγ亚基可能与虫草素活化AMPK和调节脂质合成作用相关。 苏岩 郭鹏 季宇彬关键词:HEPG2细胞系 慢病毒载体