肖徽
- 作品数：27 被引量：74H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划卫生部临床学科重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 奥沙利铂诱导人骨髓造血细胞凋亡及DNA损伤修复被引量：3
- 2015年
- 目的探讨在细胞毒药物奥沙利铂诱导下,人骨髓CD34^+前体造血细胞与CD34^-成熟造血细胞发生细胞凋亡及DNA损伤修复信号通路上相关基因表达的情况。方法采用免疫磁珠法分选出16例人骨髓单个核细胞中的CD34^+及CD34^-细胞,并应用流式细胞术检测其纯度。用奥沙利铂(终末浓度为10μg/mL)诱导2种细胞凋亡,检测诱导不同时间的2种细胞凋亡率的差异。提取细胞RNA,并利用基因芯片技术,分析比较药物诱导前后的CD34^+及CD34^-细胞中DNA损伤修复信号通路相关基因的表达情况。结果16份骨髓样本CD34^+阳性率为(4.75±1.82)%;免疫磁珠法分选后,流式细胞术检测CD34^+细胞的纯度为(81.24±5.68)%,所得CD34^-细胞的纯度为(97.67±1.21)%。CD34^+细胞在经过奥沙利铂诱导后4、8、12h,凋亡率分别为(27.44±4.12)%、(53.58±7.89)%,(84.65±6.20)%,CD34^-细胞在诱导后4、8、12h,凋亡率分别为(18.40±3.07)%、(39.11±5.28)%、(71.65±7.73)%,各时间点2种细胞的凋亡率差异均有统计学意义(均P<0.05)。基因芯片结果显示,在加入奥沙利铂诱导前,CD34^+细胞与CD34^-细胞表达差异2倍以上的基因有9种,其中前者有7种基因表达高于后者,2种基因表达低于后者,在奥沙利铂诱导8h后,CD34^+细胞与CD34^-细胞表达差异2倍以上的基因有14种,均为前者高于后者。结论在奥沙利铂诱导下,骨髓前体CD34^+细胞和成熟的CD34^-细胞相比,其DNA损伤修复系统相关基因表达水平较高,但更易于发生细胞凋亡。
- 邹游黄丹李小兰肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：CD34细胞凋亡DNA损伤奥沙利铂
- 鼠源TRAIL真核表达质粒的构建及其抑瘤效应的初步观察被引量：1
- 2002年
- 采用 RT- PCR自小鼠脾细胞 RNA中扩增出鼠 TRAIL 基因的全长 c DNA,利用 DNA重组技术将其插入到真核表达载体 pc DNA3.1中获得重组质粒 p X1。经酶切鉴定及序列分析 ,表明成功构建 TRAIL 的真核表达质粒。通过直接肌肉内注射进行基因转染 ,p X1具有诱导肝癌细胞凋亡、抑制肝癌生长的作用。表明 TRAIL
- 薛胜利冯作化张桂梅黎培员王洪涛肖徽
- 关键词：TRAIL凋亡诱导配体肝癌基因治疗
- HAX1和EGFP共表达重组腺病毒载体的构建、鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建和鉴定HAX1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体。方法采用DNA重组技术，将目的基因HAX1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒pAdTrack—CMV中，并转化于大肠埃希菌DH5a；筛选出重组质粒pAdTrack—CMV—HAX1，并在BJ5183细菌中与pAdEasy-1质粒进行同源重组，产生重组腺病毒载体；用lipofectamine将其转染HEK293细胞，包装携带全长HAX1的重组复制缺陷型腺病毒pad—HAX1-EGFP，酶切和序列测定鉴定；用制备好的Ad—HAX1-EGFP感染HEK293细胞，流式细胞术检测其感染效率，RT—PCR、Western印迹鉴定外源基因HAX1的表达。BrdU检测感染了Ad—HAX1-EGFP的HEK293细胞增殖情况。结果pAdTrack—CMV—HAX1重组质粒构建成功。pAdTrack—CMV—HAX1质粒与pAdEasy-1质粒同源重组后与预期结果相符。构建好的Ad—HAX1-EGFP能有效感染HEK293细胞；外源基因能在239细胞中有效表达。HAX1高表达的HEK293细胞其增殖率得以提高。结论成功构建了表达HAX1和EGFP共表达的重组腺病毒载体，HAX1能够促进结肠癌细胞HEK293细胞的增殖。
- 李小兰徐向上李兆明王桂华魏欣罗学来刘慎沛肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：重组腺病毒增殖
- 大肠癌细胞周期状态与临床病理因素及细胞周期蛋白水平的相关性被引量：3
- 2011年
- 目的研究大肠癌组织的细胞周期分布状态与临床病理因素的关系,以及和细胞周期调节蛋白的表达水平是否相关。方法应用流式细胞术检测45例大肠癌临床标本细胞周期中G0/G1、S、G2/M期所占的比例,并检测每例标本的细胞周期蛋白CyclinD1、CyclinE、CyclinA、CyclinB1的表达水平。结合临床病理因素进行统计分析。结果肿瘤细胞G0/G1、S、G2/M期所占的比例和患者性别、年龄、肿瘤部位、病理分级、浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期均无明显相关性,均P>0.05。G0/G1期的比例与CyclinD1、CyclinE,S期与CyclinE、CyclinA,G2/M期与CyclinA的表达水平均不相关,均P>0.05;但是G2/M期的比例与CyclinB1的表达水平正相关,r=0.335,P=0.035。结论大肠癌肿瘤细胞的周期分布和临床病理因素无关,肿瘤细胞周期蛋白的表达特点与体外培养的细胞系不同,表现得更加复杂多样。
- 于冬冬张永红邹游李小兰肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：大肠肿瘤细胞周期细胞周期蛋白
- 质粒DNA及其协同IFN-γ、CH50在巨噬细胞免疫功能激活中的作用被引量：5
- 2003年
- 目的 :研究真核表达质粒DNA在巨噬细胞免疫功能激活中的作用及其机制。方法 :体外培养巨噬细胞 ,检测巨噬细胞一氧化氮 (NO)分泌水平、FACS检测巨噬细胞表面分子的表达、MTT法测定巨噬细胞的细胞毒作用 ,以这些指标测定质粒DNA、质粒DNA IFN γ、质粒DNA CH5 0多肽对体外巨噬细胞的直接激活作用。或腹腔注射质粒DNA ,取腹腔巨噬细胞进行功能检测。结果 :pCH5 10质粒和pcDNA3 1质粒在体内、外均可刺激巨噬细胞产生NO。激活的巨噬细胞表面分子MHC Ⅱ、B7 1表达增加 ,细胞毒作用增强。在体外 ,质粒DNA协同IFN γ对巨噬细胞产生更强的激活作用 ,而CH5 0多肽与质粒DNA没有协同作用 ;腹腔注射质粒DNA后 ,取出巨噬细胞再与IFN γ共培养时 ,巨噬细胞的激活程度没有改变 ,而再与CH5 0作用时 ,巨噬细胞的激活明显增强。结论 :质粒DNA在体内外能够激活巨噬细胞 ,但在体内、外的作用显然具有不同的机制 ,体外可以直接刺激巨噬细胞 ,且与IFN γ有协同作用 ;体内则是间接激活巨噬细胞 ,这些巨噬细胞随后可被CH5 0多肽进一步激活。真核表达质粒用于肿瘤的基因治疗时 ,除了其表达产物的功能之外 ,质粒自身的免疫激活作用将进一步增强肿瘤治疗作用。
- 肖徽冯作化张桂梅李东
- 关键词：质粒巨噬细胞免疫激活
- 共转染CDK1、CDK2siRNA对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响
- 2009年
- 目的研究共转染CDK1、CDK2siRNA同时抑制CDKI、CDK2蛋白表达对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响，探讨细胞周期主要调控分子在肿瘤细胞凋亡中的作用。方法以人宫颈癌细胞株HeLa细胞为研究对象，用脂质体lipofectamine2000同时转染CDKl和CDK2siRNA。在转染后48、60h收集细胞，用Western印迹检测CDKl、CDK2蛋白的表达，AnnexinV／PI检测转染细胞的凋亡，流式细胞术DNA含量检测分析细胞周期。转染细胞进行瑞氏一姬姆萨染色（Wright—Giemsa）后在显微镜下观察其形态变化i结果共转染CDKl、CDK2siRNA后48和60h，Western印迹结果显示CDKl和CDK2蛋白的表达都同时降低。共转染CDKl、CDK2siRNA后，细胞周期S期和G1／M期比例与对照相比有明显增加；共转染细胞经瑞氏一姬姆萨染色后在显微镜下可见双核或多核细胞增多；AnnexinV／PI检测结果显示共转染CDK1、CDK2siRNA的细胞在48和60h细胞凋亡率与对照相比有显著的升高。结论siRNA干扰导致的CDKI、CDK2表达同时降低不仅导致细胞周期s期和G1／M期的阻滞，也诱导了肿瘤细胞的凋亡。
- 肖徽魏欣于东东徐向上黄丹王贵华李小兰陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：细胞周期依赖性蛋白激酶细胞周期阻滞肿瘤细胞凋亡
- 胃黏膜单细胞悬液的制备及其周期蛋白的表达
- 2008年
- 目的寻找一种方法能够有效去除胃黏液，把胃黏膜制备成单细胞悬液以进行胃黏膜流式细胞术等单细胞的蛋白分析研究，为即将在胃组织开展细胞组学做好准备。方法应用酶反应去除胃黏液和分离黏膜层后．再使用机械法制备成单细胞悬液，并应用细胞免疫组织化学流式细胞术和激光共聚焦显微镜技术初步检测胃黏膜细胞主要周期蛋白cyclin D、E、A、B1的表达。结果0．1％的胃蛋白酶和1．2-2．4U／L的中性蛋白酶分别能够较好地去除胃黏液，获得黏膜层，从而制备成胃黏膜单细胞悬液，从流式中首次系统地显示出其细胞主要周期蛋白的时相性表达规律：cyclin D3、B1明显表达，cyclin D2较弱，cyclin D1、A、E表达不明显，并得到激光扫描共聚焦显微镜的验证。结论利用胃蛋白酶，中性蛋白酶作用后能够去除胃黏液．较容易获得胃黏膜单细胞悬液；并提示体内的细胞周期蛋白的表达规律与体外培养的细胞系的表达规律不同。
- 曹金鹏胡丽娟李小兰肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：胃黏液单细胞悬液细胞周期蛋白类流式细胞术
- CH50多肽真核表达载体pCH510的构建、表达及体内趋化和抑瘤作用被引量：8
- 2001年
- 目的 :构建重组人FN多肽的真核表达载体 ,研究体内表达对免疫细胞的趋化作用及抑制肿瘤生长的作用。方法 :采用重组DNA技术构建表达质粒 ;体内外进行基因转染 ;用Westernblot方法鉴定表达产物 ;肌肉组织切片与染色观察体内基因转染后的趋化作用 ;小鼠实体瘤模型研究基因转染抑制肿瘤生长的作用。结果 :将人FNcDNA 5′端非编码区及信号肽编码区、CH5 0多肽编码区cDNA、人FNcDNA的 3′端非编码区重组连接并插入pcDNA3.1质粒 ,构建出pCH5 10。以pCH5 10转染小鼠NIH3T3细胞 ,可以表达产生CH5 0多肽。肌肉内注射转染pCH5 10可对免疫细胞产生趋化作用 ,抑制实体肿瘤的生长。结论 :质粒pCH5 10可在细胞中及小鼠体内表达 ;体内表达可对免疫细胞产生趋化作用 。
- 叶仕桥冯作化李东张桂梅张慧黄波肖徽
- 关键词：纤维粘连蛋白肿瘤真核表达载体基因治疗
- 一种新的双向电泳蛋白样品制备方法被引量：3
- 2006年
- 目的探讨双向凝胶电泳(2-DE)样品裂解液对蛋白质分离和双向凝胶电泳结果的影响。方法以MOLT-4细胞为例,采用3种溶解性能不同的裂解液提取细胞中的蛋白质组,并分别进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果通过对2-D PAGE图谱的比较分析,发现采用8 mol/L Urea,2 mol/L Thiourea,4%CHAPS,1%NP-40,4%TritonX-100,65 mmol/L DTT,0.5 mmol/L PMSF,0.5%pharmalyte 3-10,能获得质量较高的2-DE图谱。结论采用高浓度脲、三去污裂解液有利于获得优质的蛋白质样品,从而提高蛋白质提取率和双向电泳分辨率等。
- 李小兰谢大兴肖徽吴剑宏姚静冯永东陶德定刘双又胡俊波龚建平
- 关键词：蛋白质组双向电泳固相PH梯度MOLT-4细胞
- 香烟烟雾提取物对人呼吸道上皮细胞DNA损伤和凋亡的影响被引量：9
- 2006年
- 背景与目的:香烟烟雾可以致多种细胞发生DNA损伤已有报道证实。本研究旨在进一步阐明香烟烟雾提取物(cigarettesmokeextract,CSE)作用于正常人类支气管上皮细胞系(normalhumanbronchialepithelialcells,NHBE)和肺腺癌细胞系SPC-A1后引起的DNA损伤和凋亡情况。方法:不同浓度的CSE作用于NHBE和SPC-A1细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测两种细胞活性。荧光标记的磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)抗体特异性标记细胞核内DNA双链断裂(DNAdouble-strandbreaks,DSBs)处的γ-H2AX,然后用流式细胞仪定量检测并分析DNA损伤。用免疫印迹检测γ-H2AX表达。同时,亚G1峰法(SubG1peak)和AnnexinⅤ-FITC/碘化丙啶双染色流式细胞术检测CSE诱导的细胞凋亡。用激光共聚焦显微镜观察细胞损伤和凋亡形态学变化。结果:MTT结果显示,随CSE浓度和作用时间增加,细胞活性均逐渐降低。CSE可引起细胞DNA双链断裂,γ-H2AX最大值在作用后4h左右,然后逐渐降低。DNA损伤后平均12h可以出现凋亡。另外,激光共聚焦显微镜观察到两种细胞内的γ-H2AX量在细胞受到CSE刺激后快速大量的积聚,呈现典型细胞损伤的形态学变化,较为明显的凋亡形态学特征4h后方可出现。结论:CSE能直接引起NHBE和SPC-A1细胞的DNA损伤和凋亡,且存在着浓度和时间依赖关系。
- 付强成静韩中博李小兰陈小燕张鹏肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：Γ-H2AX凋亡
