聂代邦
- 作品数：14 被引量：7H指数：2
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科技发展计划项目吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 检测Cre重组酶活性的转基因猪成纤维细胞系的构建
- 目的：建立检测Cre重组酶活性的转基因猪成纤维细胞系,为制备转基因报告猪提供供体细胞。
方法：构建条件性表达绿色荧光蛋白的载体,线性化后通过脂质体方法转染到猪胚胎成纤维细胞中,通过G418筛选,获得细胞克隆,...
- 李莉逢大欣任林柱王铁东陈立梅闫森聂代邦赖良学欧阳红生
- 关键词：转基因猪成纤维细胞细胞克隆绿色荧光蛋白
- 文献传递
- 诱导性表达Cre重组酶转基因猪成纤维细胞的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 通过PCR方法分别从pGL3-Mx1载体上和pcDNA3.1(+)载体上扩增猪Mx1启动子和BGHpolyA;利用重叠PCR方法获得猪源的Cre重组酶基因,并从pGCFRT2NeoR上用XholⅠ和SalⅠ酶切得到FRT2NeoR盒子。将上述4个片段利用SOE-PCR及T4DNA连接酶连接,然后利用原核表达载体pET28a(+)构建Cre表达载体Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR。用LipofectamineTM2000介导转染猪成纤维细胞,G418筛选阳性细胞,PCR鉴定。结果表明,成功构建了诱导性表达Cre重组酶表达载体Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR,并成功整合到猪成纤维细胞的基因组中,获得了诱导性表达Cre重组酶的转基因猪成纤维细胞,为最终通过核移植方法获得诱导性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。
- 陈立梅逄大欣李莉李占军杨春聂代邦欧阳红生
- 关键词：CRE重组酶原核表达载体SOE-PCR
- Fat-1基因真核表达载体的构建及其对人口腔鳞癌细胞脂肪酸含量的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:构建真核表达载体pcDNA3.1-Fat1,线性化稳定转染人口腔鳞癌细胞株Tca8113,检测其细胞内脂肪酸含量变化。方法:通过重叠延伸PCR方法人工合成利于真核表达的Fat-1基因,用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1-Fat-1,用脂质体转染真核细胞的方法转染人口腔鳞癌细胞株Tca8113,用气相色谱仪检测脂肪酸的变化情况。结果:测序及酶切鉴定成功合成真核偏好表达的Fat-1基因。与对照组相比,转染Fat-1基因的口腔癌细胞的n-3脂肪酸明显增多,n-6/n-3明显下降。结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-Fat1,并对口腔鳞癌细胞内脂肪酸含量产生明显影响,为进一步研究Fat-1基因在口腔鳞癌中的生物学功能奠定了基础。
- 李栋聂代邦王海军段新平逄大欣欧阳红生
- 关键词：真核表达载体转染口腔鳞癌细胞N-3脂肪酸
- 表达猪源Cre重组酶载体pCEP4-Cre的构建
- 本发明涉及一种表达猪源Cre重组酶载体pCEP4-Cre的构建，其特征在于：首先采用基因工程的方法构建pCEP4-Cre质粒，并用载体pCEP4-Cre与载体pEF-stop-eGFP共转染进入细胞，在表达Cre重组酶的...
- 逄大欣周杨欧阳红生朱建国张明军王铁东李莉聂代邦段新平毛丹
- 文献传递
- 碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞内核心蛋白多糖基因表达的影响
- 2008年
- 目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞内核心蛋白多糖(decorin)的影响,探讨bFGF在牙周再生中的意义。方法体外原代培养人牙周膜成纤维细胞,用外源性bFGF刺激细胞,半定量RT-PCR法检测牙周膜成纤维细胞内decorin基因表达的变化。结果电泳结果表明,bFGF抑制人牙周膜成纤维细胞内decorin的mRNA合成,并且随着质量浓度的增加抑制作用减弱。结论decorin具有很多生物学功能,bFGF对decorin的抑制作用很可能是牙周炎损伤修复过程中一个重要的调节因素,为bFGF在牙周组织再生中的作用提供理论基础。
- 王思聪林崇韬聂代邦欧阳红生
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子核心蛋白多糖牙周膜成纤维细胞牙周组织再生
- 小鼠胚胎成纤维细胞的转染与阳性细胞的初步筛选
- 2008年
- 目的:建立表达白血病抑制因子(LIF)的胚胎成纤维细胞的方法体系,为建立转基因动物模型提供理论依据。方法:以13.5dICR小鼠胚胎为材料,采用胰酶消化方法,培养小鼠原代胚胎成纤维细胞。利用脂质体介导方法,将线性化的pcDNA3.1-LIF真核表达载体转染至小鼠胚胎成纤维细胞中。经G418筛选阳性细胞,提取阳性细胞的基因组DNA并测序。结果:通过对小鼠原代胚胎成纤维细胞的分离、培养,获得原代胚胎成纤维细胞。经过转染,建立了表达LIF的胚胎成纤维细胞,并在倒置显微镜下观察到筛选得到的阳性细胞。对阳性细胞克隆质粒测序表明同源性达99%。结论:pcDNA3.1-LIF真核表达载体成功转染到小鼠胚胎成纤维细胞中。
- 姜秋倪雪岩聂代邦孙宏晨
- 关键词：白血病抑制因子成纤维细胞转染小鼠
- 小鼠LIF编码基因的克隆与真核表达载体pcDNA3．1-LIF的构建
- 2008年
- 目的:通过克隆小鼠LIF编码基因,构建pcDNA3.1-LIF真核表达载体,为下一步建立转基因动物模型奠定基础。方法:采用ICR雌性小鼠子宫组织,提取总RNA,运用RT-PCR技术,扩增出小鼠LIF基因全长编码序列,采用同源重组方法构建具有新霉素抗性的小鼠LIF真核表达载体pcDNA3.1-LIF。结果:通过PCR获得了约612bp大小的特异性cDNA片段。经核苷酸序列分析,扩增得到的片段与小鼠LIFcDNA序列同源性为100%。经PCR及酶切鉴定筛选阳性克隆菌,表明LIF编码序列正确连入pcDNA3.1载体中。结论:成功克隆了小鼠LIF编码基因,并构建了真核表达载体pcDNA3.1-LIF。
- 姜秋艾永华聂代邦孙宏晨欧阳红生
- 关键词：白血病抑制因子聚合酶链反应真核表达载体
- 检测Cre活性的转基因报告猪的建立
- 目的：建立检测 Cre 重组酶活性的转基因报告猪,为制备人类疾病动物模型研究基因功能,提供手段和方法。
方法：以条件性表达绿色荧光蛋白的猪成纤维细胞系作为供体细胞,采用体细胞核移植技术,制备转基因克隆猪,并对...
- 李莉逄大欣王铁东任林柱李占军闫森聂代邦赖良学欧阳红生
- 关键词：CRE重组酶转基因猪疾病动物模型
- 文献传递
- RNA编辑酶ADAR1在T细胞发育中的功能研究
- RNA编辑是近年来分子生物学领域研究的热点。RNA编辑酶ADAR1通过脱氨作用,使RNA特异位点腺嘌呤核苷变为次黄嘌呤核苷,即A-I转换。而在核苷酸中次黄嘌呤核苷的功能与鸟嘌呤（G）的功能是一致的,因而A-I的转换实际上...
- 聂代邦
- 关键词：RNA编辑ADAR1T细胞发育
- 文献传递
- X-性染色体连锁凋亡抑制蛋白与口腔鳞癌细胞Tca8113化疗耐药的关系
- 2010年
- 目的研究X-性染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在口腔鳞癌细胞Tca8113中的表达水平,并探讨XIAP表达与Tca8113细胞对化疗药物耐药性之间的关系。方法用平阳霉素(PYM)间歇性加药,逐步递增剂量,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测药物处理前后细胞对PYM的敏感性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测XIAP在药物处理前后的各Tca8113细胞组中的表达变化,并探讨XIAP与细胞耐药性的关系。结果Tca8113细胞在PYM间断作用下产生耐受,Tca8113-1-10组、Tca8113-10-10组耐药细胞对PYM的半数有效浓度(IC50)分别为(12.758±0.030)、(18.986±0.150)μg·mL-1。Tca8113-1-20、Tca8113-10-20组耐药细胞对PYM的IC50分别为(26.302±0.072)、(35.294±0.115)μg·mL-1。XAIP的表达水平与细胞对PYM的耐药有相关性(P<0.01)。结论XIAP在口腔鳞癌中的表达水平升高,可能与鳞癌的化疗耐药性有关,这可作为口腔鳞癌基因治疗的一个新靶点。
- 王家凤张志民王成坤聂代邦高文信
- 关键词：口腔鳞状细胞癌化疗耐药
