管洁
- 作品数：16 被引量：35H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表达人高致病性禽流感病毒H5N1(安徽株)结构基因的DNA疫苗在小鼠中诱导的免疫应答分析被引量：4
- 2010年
- 本研究旨在研发经济、高效的人高致病性禽流感病毒H5N1实验疫苗并优化免疫方案。首先优化并合成H5N1(安徽株)的血凝素基因(HAop)和神经氨酸酶基因(NAop)并证实其正确表达,再构建含有H5N1(安徽株)结构基因的多个单顺反子(HAwt、HAop和NAop)和双顺反子(HAop/M2和NAop/M1)DNA疫苗质粒。随后,采用不同途径的体内电转法在第0周和第3周2次免疫Balb/C小鼠,初步分析了抗原特异性体液免疫(HA血凝抑制抗体,NA特异性抗体,中和抗体)和细胞免疫应答(IFN-γELISpot)的特点。结果表明:含有优化血凝素基因(HAop)和优化神经氨酸酶基因(NAop)的DNA疫苗可以快速激发较强的免疫应答,尤其是细胞免疫应答;皮内电转所激发的体液免疫应答强于肌肉电转。本研究为新型H5N1疫苗的研发以及免疫方案的优化奠定了基础。
- 王文陈红谭文杰邓瑶王敏刘源殷霄张柯管洁周剑芳舒跃龙阮力
- 关键词：H5N1DNA疫苗
- 表达丙型肝炎病毒NS3和Core融合蛋白基因的DNA疫苗免疫方案优化被引量：8
- 2010年
- 目的本研究旨在构建一种包含丙型肝炎病毒（HCV）保守区基因的新型DNA疫苗，并在小鼠模型中使用电转技术优化其免疫原性。方法首先，我们构建了包含HCV非结构蛋白NS3和核心蛋白Core部分基因序列的DNA疫苗，并证实了其表达；然后采用不同的体内电转方式于第0、4周分别免疫BALB／c小鼠，比较分析不同免疫方案的体液免疫（特异性IgG与抗体亚类）与细胞免疫应答（IFN-γ ELISPOT）的效果。结果使用电转技术可显著增强新型DNA疫苗免疫原性，采用皮内注射加卡钳电极电转的方式产生最强NS3特异性T细胞免疫反应。结论包含HCV保守区基因的新型DNA疫苗可通过优化电转技术增强免疫应答效果。这为我们下一步优化HCVDNA疫苗的免疫方案提供了依据。
- 殷霄鲁健谭文杰邓瑶管洁田瑞光王文陈红毕胜利阮力
- 关键词：丙型肝炎病毒DNA疫苗
- 融合表达DEC 205单链抗体和NS3蛋白的HCV DNA疫苗的免疫原性研究被引量：2
- 2011年
- 为研发新型HCV DNA疫苗并探讨优化其免疫原性的策略,我们分析靶向树突状细胞(Dendritic cells,DC)的分子对HCV DNA疫苗免疫原性的影响。我们基于抗小鼠DC细胞表面分子DEC205/CD205的单克隆抗体DEC205的单链分子,构建可单独表达DEC205单链抗体或者与HCV非结构蛋白NS3融合表达的DNA表达质粒,并构建单独表达HCV非结构蛋白NS3的DNA表达质粒;经瞬时转染法鉴定HCV NS3及其与DEC205单链抗体融合蛋白的表达;随后采用注射结合电转的方式免疫Balb/C小鼠并研究各疫苗的体液(NS3特异性IgG抗体)与细胞免疫(IFN-γELISPOT)效果。结果表明:DEC205单链抗体基因与HCV NS3编码基因的融合可显著增强NS3特异的免疫应答;采用皮内注射加卡钳电极电转的方式可以产生最强的NS3特异性抗体和T细胞免疫反应。因此,通过DEC205单链抗体与HCV DNA疫苗靶抗原融合可明显增强免疫应答效果。该策略为HCV及其他类似病原的新型DNA疫苗研制提供重要依据。
- 殷霄王文谭文杰邓瑶管洁文波陈红阮力
- 关键词：DNA疫苗NS3抗原
- 丙型肝炎病毒新型疫苗的制备及免疫学评价
- HCV是1989年才确定的主要经血传播、可引起急慢性肝炎的病原。绝大多数成年感染者(80%以上)为慢性、持续性感染,且20%以上在20年内将最终发展为肝硬化、肝癌。根据中国疾控中心公布的法定传染病监测报告,2010年中国...
- 管洁
- 关键词：丙型肝炎病毒DNA疫苗
- 文献传递
- 携带双链RNA靶抗原和中和抗原的假病毒颗粒疫苗
- 发明名称：携带双链RNA靶抗原和中和抗原的假病毒颗粒疫苗。所属技术领域：1.生物技术 2.基因工程疫苗。本发明涉及一种携带双链RNA靶抗原和中和抗原的假病毒颗粒疫苗，该疫苗通过采用整合缺陷的pCMVΔR8.2D64E包装...
- 谭文杰邓瑶管洁文波
- 文献传递
- 含乙型肝炎病毒S-PreS1基因的DNA疫苗与蛋白颗粒疫苗联合免疫可增强免疫应答被引量：6
- 2011年
- 为研制新型有效的HBV治疗性疫苗,构建了含PreS1与S融合基因的HBV DNA疫苗,即pVRC-HBSS1(PreS121–47 aa融合在S抗原1–223 aa的羧基端),并制备了CHO表达相同结构的蛋白颗粒亚单位疫苗HBSS1。在Balb/C小鼠中采用不同的DNA免疫方式(即肌肉注射、皮内注射加电转)初免3次,蛋白颗粒亚单位疫苗(不同佐剂)肌肉注射加强免疫1次,然后我们分析比较了各组疫苗所引起的免疫应答特点。抗体检测结果表明:皮内注射结合电转初免组产生的PreS1与S特异性抗体水平皆高于肌肉直接注射组。进一步还发现DNA疫苗与蛋白颗粒亚单位疫苗两种疫苗联合应用后S抗原特异的细胞免疫应答(IFN-γELISpot分析)明显高于DNA疫苗或蛋白颗粒亚单位单独应用,其中皮内注射+电转结合蛋白颗粒亚单位疫苗联合免疫组可产生最强的细胞免疫应答。这些研究为新型HBV治疗性疫苗的优化设计与合理应用提供了依据。
- 陈红邓瑶谭文杰王文管洁文波殷霄阮力
- 关键词：DNA疫苗联合免疫
- 整合缺陷型重组慢病毒载体构建及HCV重组假型慢病毒颗粒的制备与性状分析
- 2013年
- 为提高慢病毒载体应用的安全性及改进HCV新型颗粒疫苗的制备,首先对传统的慢病毒三质粒系统进行改造:将包装质粒pHR’CMVΔR8.2改造成整合缺陷型的包装质粒pHR’CMVΔR8.2D64E,并在体外感染实验验证其整合缺陷性;将转移质粒中的报告基因GFP替换成HCV的NS3基因,选用表达3种亚型(1a、1b、2a)HCV包膜E1E2的包膜质粒,用改造后的三质粒系统制备了3种亚型(1a,1b,2a)的假型丙型肝炎病毒(HCV)整合缺陷型慢病毒颗粒,并用Western blot方法确定了颗粒上包膜蛋白的表达,通过电镜可观察到浓缩后的HCV慢病毒颗粒结构,HCV慢病毒颗粒感染Huh7细胞后可观察到转基因NS3的表达。为安全高效的慢病毒载体的应用及HCV假型颗粒疫苗研发提供了新的技术路线。
- 管洁邓瑶文波陈红王文谭文杰
- 关键词：慢病毒载体
- 同一HCV1b型感染者来源的准种编码的包膜蛋白制备假病毒的感染效率研究
- 2017年
- 目的筛选丙型肝炎病毒（HCV） 1b亚型包膜蛋白编码基因，用于HCV 1b亚型假病毒制备与应用。方法从中国同一1b型HCV感染者（366）体内不同HCV准种中筛选不同的包膜蛋白编码基因，构建表达质粒并制备HCV假病毒（HCVpp），体外感染靶细胞，与前期制备的HCV 1b参考株HCVpp平行比较感染效率，并将HCVpp应用于中和抗体检测。结果从中国同一1b型HCV感染者（366）体内筛选获得的包膜蛋白编码基因可制备感染效率明显不同（分高/中/低3种类型）的HCVpp，确定了其中一个HCV包膜蛋白基因（366-C）可制备出高感染效率的HCV 1b型假病毒，并应用于HCV特异性中和抗体检测。进一步研究表明366患者不同准种来源包膜蛋白表达水平相近，但序列分析发现感染效率不同的包膜蛋白存在个别氨基酸差异。结论本研究获得了高感染效率的HCV 1b型假病毒，为HCV研究及疫苗与药物研发提供了有效工具。
- 陶格斯邓瑶叶飞卢莎博晓真孥叭力文波管洁沈晓玲谭文杰
- 关键词：包膜蛋白
- 含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体的制备与表达分析被引量：2
- 2011年
- 目的:制备含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体,为慢病毒载体的进一步广泛应用奠定基础。方法:克隆构建含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的转基因载体pCS-gluc-2A-eGFP,酶切与序列分析鉴定其正确后,与包装质粒pCMVHR'Δ8.2、包膜质粒pVSV-G共转染293FT细胞,获得含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体;重组慢病毒载体感染A549、Huh7细胞后,用荧光显微镜直接观察报告基因GFP的表达,或取细胞上清实时检测分泌型萤光素酶的表达。结果:制备了含双报告基因的重组慢病毒载体,感染细胞后可以活体观察绿色荧光蛋白的表达,也可以快速灵敏地检测到分泌型萤光素酶的表达。结论:所获含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体感染效率高,表达易于活体实时检测,灵敏度高。本研究为慢病毒载体的广泛应用奠定了基础。
- 管洁王秀平邓瑶周为民吴小兵谭文杰
- 关键词：慢病毒载体
- 高滴度双报告基因的可视化模拟病毒及其应用
- 本发明公开了高滴度双报告基因的可视化模拟病毒及其应用。本发明首先构建了一个可以同时表达绿色荧光蛋白和荧光素酶双报告基因的慢病毒转移质粒pCS‑gluc‑2A‑eGFP；然后利用慢病毒三质粒包装系统原理，将转移质粒pCS‑...
- 谭文杰邓瑶黄保英管洁
- 文献传递
