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MHCII类分子反式激活因子突变体重组腺病毒治疗小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎: 2008年; 评估IFN-γ调控型启动子(CIITA-pIV)驱动的MHC II类分子反式激活因子突变体(MHC class II transactivator mu-tant,CIITAm)重组腺病毒Ad-pIV-CIITAm对小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)的治疗效果,并探讨其可能的作用机制。34只健康雌性CBA/J小鼠随机分成CIITAm治疗组(n=9)、GFP对照组(n=9)、EAT模型组(n=8)和正常对照组(n=8)共四组。正常对照组不做特殊处理,其余三组均以猪甲状腺球蛋白(porcinethyroglobulin,pTg)+弗氏佐剂(complete or incomplete Freund adjuvant,CFA/IFA)建立EAT小鼠模型,并分别静脉注射重组腺病毒Ad-pIV-CIITAm、Ad-GFP及等体积生理盐水。首次免疫后第29天处死小鼠,进行H-E染色观察甲状腺病理形态;免疫组织化学染色测定甲状腺MHC II类分子表达;分析pTg刺激下脾脏淋巴细胞的增殖及其上清液中IFN-γ的分泌水平;ELISA法检测血浆中抗-pTg自身抗体滴度;流式细胞术分析外周血和脾脏淋巴细胞中T细胞亚群。结果:H-E染色结果表明,CIITAm治疗组甲状腺淋巴细胞浸润指数(0.5±0.5)低于GFP对照组(1.5±0.2)和EAT模型组(1.4±0.4,P<0.01)。免疫组化结果显示,GFP对照组和EAT模型组甲状腺组织有弥漫性MHC II类分子表达,而CIITAm治疗组未见明显表达,正常对照组表达呈阴性。80μg/ml pTg刺激下,CIITAm治疗组小鼠淋巴细胞刺激指数(SI)明显低于GFP对照组或EAT模型组(P<0.01);培养上清各组IFN-γ分泌水平结果类似(P<0.01)。CIITAm治疗组血浆抗-pTg自身抗体滴度显著低于GFP对照组或EAT模型组(P<0.05);CIITAm治疗组外周血和脾脏CD4+T细胞百分率亦显著低于GFP对照组或EAT模型组(P<0.05)。重组腺病毒Ad-pIV-CIITAm能抑制EAT小鼠甲状腺组织MHC II类分子表达,抑制自身反应性T细胞增殖,减轻甲状腺炎性细胞浸润,降低自身抗体滴度,对EAT有一定的治疗作用。; 龙宪连管政张军沈茜; 关键词：腺病毒科自身免疫性甲状腺炎基因治疗 Γ干扰素

腺病毒介导CIITA突变体基因转移抑制MHC II类分子表达的体外研究被引量：2: 2007年; 目的:构建携带小鼠MHCII类分子反式激活因子(MHC class II molecule transactivator,CIITA)突变体基因的腺病毒,并观察腺病毒介导该基因的表达情况以及表达产物的体外功能。方法:采用常规分子生物学方法从IFN-γ诱导后的BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中获得IV型CIITA cDNA;利用重叠延伸PCR法构建CIITA突变体基因,并克隆入表达载体pIRES;采用pAdEasy-1系统获得具有感染能力的、携带CIITA突变体基因的缺陷型重组腺病毒(Ad-CIITAm)和空载对照病毒(Ad-GFP),并经大量扩增、纯化及滴度测定;将Ad-CIITAm和Ad-GFP分别感染HeLa细胞和Raji细胞,流式细胞术观察对诱导型和组成型HLA-DR分子表达的影响。结果:成功克隆了小鼠CIITA突变体基因,并构建了携带小鼠CIITA突变体基因的重组腺病毒Ad-CIITAm;经流式细胞术证实感染Ad-CIITAm的Hela和Raji细胞较感染Ad-GFP的细胞,其表面HLA-DR分子的表达均受到明显的抑制。结论:本实验证实了重组腺病毒介导表达的小鼠CIITA突变体在体外能够有效地抑制MHCII类分子的表达。; 管政张军沈茜; 关键词：腺病毒

小鼠pIV启动子调控CⅡTA突变体重组腺病毒表达选择性抑制MHC Ⅱ类分子的表达: 2008年; 目的:观察受CⅡTA-pIV启动子驱动的MHCⅡ类分子反式激活因子突变体(CⅡTAm)重组腺病毒对MHC Ⅱ类分子表达的选择性抑制作用,并探讨其相关机制。方法:构建了N-端酸性氨基酸区缺失了118aa的CⅡTA突变体及其CⅡ TA-pIV启动子驱动的重组腺病毒Ad-pIV-CⅡTAm,将Ad-pIV-CⅡTAm或对照腺病毒Ad-GFP感染小鼠内皮细胞株SVEC细胞和转染巨噬细胞株J774细胞,并以IFN-γ刺激。用RT-PCR检测野生型和突变型CⅡTA mRNA的表达,用流式细胞术检测MHC Ⅱ类分子在细胞表面的表达。结果:成功构建CⅡTA-pIV启动子调控下的CⅡTA突变体基因重组腺病毒表达载体Ad-pIV-CⅡ TAm;该腺病毒介导的CⅡTA突变体mRNA在SVEC和J774细胞内的表达受到IFN-γ的上调,同时抑制这些细胞上诱导型和组成型MHC Ⅱ类分子的表达。结论:Ad-pIV-CⅡTAm重组腺病毒是一种IFN-γ调控型表达载体,可有效地抑制受感染细胞上 MHC Ⅱ类分子的表达。; 龙宪连管政张军方超平张薇薇张倩沈茜; 关键词：腺病毒科 MHC

用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体被引量：3: 2006年; 目的：以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCII类分子反式激活因子（MHCclass Ⅱ molecule transactivator，CIITA）突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法。方法：首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片段两端的基因片段，再将两片段混合，在不加入外围引物的情况下进行8次PCR循环以有效完成重叠延伸，然后再加入引物进行目的片段指数扩增，将扩增产物直接克隆至真核表达载体pIRES。结果：成功地构建出缺失第109～226位氨基酸密码子的CⅡTA突变体。结论：优化后的重叠延伸PCR法（OE—PCR）克服了传统方法的诸多弊端，非常适合于构建中间缺失突变体，值得推广。; 管政沈茜; 关键词：重叠延伸PCR法

一种新型炎症诱导型腺病毒表达系统的功能研究: 2007年; 目的构建一种新型炎症诱导型重组腺病毒载体用于生理调控型基因治疗。方法构建携带IL-1β增强子（-3690／-2720）／IL-6启动子（-590／＋2）重组体（IL1／IL6）的荧光素酶报告质粒和重组腺病毒载体，体外转染HepG2和RAW264．7细胞，观察各种细胞外刺激对IL1／IL6启动子活性调控的变化，并以动物实验观察炎症因子能否在体内通过调控IL1／IL6的启动活性而控制目的基因的表达。结果经荧光素酶分析显示IL1／IL6的本底启动活性较低，可经多种细胞外刺激而诱导活化，且具有较广泛的活性诱导范围；在体内，它可随炎症反应程度的变化而自主地调控外源基因的表达。结论携带IL1／IL6重组体启动子的重组腺病毒载体可作为生理反应调控型基因治疗载体用于全身性炎症、自身免疫性疾病等的治疗与研究。; 蔡刚聂小蒙管政张军沈茜; 关键词：基因治疗腺病毒载体炎症反应

CIITA突变体和FasL基因转移抑制MHC-Ⅱ类分子表达及诱导凋亡的体外研究: 本研究设计共分三个部分:第一部分实验构建了携带CⅡTA突变体基因的重组真核表达载体pIRES-CⅡTAm和重组腺病毒Ad-CⅡTAm以及携带pⅣ调控下的CⅡTA突变体基因腺病毒Ad-CⅡTAm-pⅣ。第二部分实验构建了携...; 管政; 关键词：CIITA FASL 基因转移; 文献传递

CⅡTA的生物学作用多样性: 2007年; MHCⅡ类分子反式激活因子（MHCclassIImoleculetransactivator，CⅡTA）一直被当作是MHC-Ⅱ类分子及其相关基因表达的主宰调控者，然而随着研究的深入，许多报道提示CⅡTA不仅在免疫系统内、甚至在免疫系统外还具有其他功能，由此引发了CⅡTA生物学作用多样性问题。; 管政沈茜; 关键词：MHC CIITA

腺病毒介导MHC Ⅱ类分子反式激活因子突变体基因治疗小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎: 2008年; 目的:观察腺病毒介导MHC Ⅱ类分子(major histocompatibility complex classⅡmolecules)反式激活因子突变体(CⅡTAm)基因治疗小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(experi mental autoi mmune thyroiditis,EAT)的效果,并探讨其可能的作用机制。方法:31只健康雌性CBA/J小鼠随机分成EAT模型组(n=8)、CⅡTAm治疗组(n=9)、GFP对照组(n=9)和正常对照组(n=5)。除正常对照组不作特殊处理外,其余3组均以猪甲状腺球蛋白(porcine thyroglobulin,pTg)+弗氏佐剂(com-plete or incomplete Freund adjuvant,CFA/IFA)建立EAT小鼠模型,CⅡTAm治疗组和GFP对照组分别静脉注射重组腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm及Ad-GFP进行治疗,EAT模型组注射等量生理盐水。首次免疫后第29日处死小鼠,进行H-E染色观察甲状腺病理形态;免疫组织化学染色测定甲状腺MHCⅡ类分子表达;分析pTg刺激下脾脏淋巴细胞的增殖及其上清液中IFN-γ的分泌水平;ELISA法检测血浆中抗-pTg自身抗体滴度;流式细胞术分析外周血和脾脏淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞上可诱导共刺激分子(inducible costi mulator,ICOS)的表达水平。结果:H-E染色结果表明,CⅡTAm治疗组甲状腺淋巴细胞浸润指数(0.3±0.5)低于EAT模型组(1.4±0.4)和GFP对照组(1.5±0.2,P<0.01)。免疫组化结果显示,EAT模型组和GFP对照组甲状腺组织有弥漫性MHC Ⅱ类分子表达,而CⅡTAm治疗组未见明显表达,正常对照组表达呈阴性。80μg/mlpTg刺激下,CⅡTAm治疗组小鼠淋巴细胞刺激指数(SI)明显低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.05);培养上清各组IFN-γ分泌水平与SI结果类似(P<0.01)。CⅡTAm治疗组血浆抗-pTg自身抗体滴度显著低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.01);CⅡTAm治疗组外周血和脾脏CD4+T细胞ICOS分子阳性表达率亦显著低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.01)。结论:重组腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm能抑制EAT小鼠甲状腺组织MHCⅡ类分子表达,抑制自身反应性T细胞增殖,减轻甲状腺炎性细胞浸润,降低�; 龙宪连管政张军方超平张薇薇张倩沈茜; 关键词：腺病毒科自身免疫性甲状腺炎

CⅡTA突变体和FasL基因转移抑制MHC-Ⅱ类分子表达及诱导凋亡的体外研究: 本研究设计共分三个部分:第一部分实验构建了携带CIITA突变体基因的重组真核表达载体pIRES-CIITAm和重组腺病毒Ad-CIITAm以及携带pIV调控下的CIITA突变体基因腺病毒Ad-CIITAm-pIV。第二部...; 管政; 关键词：FASL基因基因转移; 文献传递

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