竺春
- 作品数：5 被引量：34H指数：4
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- 鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白的原核表达被引量：8
- 2008年
- 根据已发表的鹅圆环病毒GoCV-yk1株的序列,设计引物扩增出全长核衣壳蛋白基因(Cap),用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳检测未见到目的蛋白条带。应用生物信息学分析确定Cap蛋白的核定位信号区域,新设计一对引物扩增出不包含核定位信号序列编码区的核衣壳蛋白基因,将截短Cap基因克隆入pET-28a进行融合表达,经SDS-PAGE电泳和Western blot检测,截短Cap蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为27.6ku,表达产物以包涵体形式存在,其表达量可以达菌体总蛋白的18.3%。截短Cap蛋白的高效表达为鹅圆环病毒ELISA检测方法的建立和进一步开展GoCV致病性及其免疫机制的探索奠定了基础。
- 余旭平胡东建郑新添竺春刘晓宁于洪涛
- 关键词：圆环病毒核衣壳蛋白基因核定位信号原核表达
- 鹅圆环病毒研究进展被引量：4
- 2007年
- 竺春赵秀玲袁佳杰黄贤波胡东建余旭平
- 关键词：圆环病毒养鹅业基因组结构免疫抑制病毒特性致病机理
- 鸽圆环病毒浙江株全基因组的克隆及序列分析被引量：15
- 2009年
- 鸽圆环病毒（Pigeon circovrius,PiCV）是圆环病毒科的一个成员,是一种免疫抑制性病原,鸽子感染圆环病毒后可以出现昏睡、嗜眠、厌食、体重减轻、呼吸窘迫等症状。本研究应用建立的PCR方法,检测了从浙江省5个鸽场采集的样品,结果在杭州某鸽场检测到阳性。进一步设计引物分段PCR扩增、克隆并测定了2株鸽圆环病毒的全基因组序列,分别命名为PiCV-zj1和PiCV-zj2,序列的GenBank登录号为DQ090945和DQ090944。基因组序列分析表明,PiCV-zj1及PiCV-zj2全长均为2039bp,具有圆环病毒共同的与病毒复制相关的茎环结构和Rep蛋白保守基序等特征,与已发表的国外11株鸽圆环病毒序列在全基因组核苷酸水平有86%~89.1%的同源性,在Rep和外壳蛋白的氨基酸水平分别有92.1%~94.7%和76.6%~81.4%的同源性。应用PHYLIP方法作进化树分析并应用bootstrap重复1000次进行检验,结果显示：10个欧美株组成一个大的分支,而浙江株和澳洲株各自独立分支。这是我国首次检测确认鸽圆环病毒的存在,并测定了2株PiCV病毒的全基因组序列。
- 余旭平竺春郑新添母安雄于洪涛
- 关键词：圆环病毒全基因组序列
- “高热综合症”病猪血清中未知病毒检测方法的建立
- 2001年7月开始,在浙江省和周边地区大面积爆发了一种主要表现为病猪持续高温、食欲废绝、皮肤发红为主要特征的猪病,有极高的发病率和死亡率，给养殖业带来了极大的破坏。“猪高热综合症”的临床症状和病理现象比较复杂,与呼吸综合...
- 竺春
- 关键词：高热综合症未知病毒血清细小病毒
- 文献传递
- 鸽圆环病毒浙江株△Cap基因的克隆与原核表达被引量：16
- 2007年
- 根据已发表的鸽圆环病毒(PiCV)序列,在V1ORF保守序列部位设计引物(目的片段长度为629bp),对浙江某鸽养殖场的病料进行PCR扩增检测,获得阳性样品;应用设计的删除核定位信号外壳蛋白基因(△Cap)的引物,扩增获得680bp的△Cap基因,克隆于pMD18-T载体,进行测序;将△Cap基因亚克隆到原核表达载体pET-28a进行融合表达,SDS-PAGE电泳检测发现,△Cap融合蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌中以包涵体形式表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的22.1%。
- 余旭平刘晓宁郑新添邬栋栋刘江梅竺春
- 关键词：圆环病毒核定位信号
