王艳
- 作品数：24 被引量：167H指数：8
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与应用被引量：25
- 2007年
- 通过反应条件的优化、特异性和敏感性的测定,建立了一种快速、简便、准确的PCR方法,用于检测副猪嗜血杆菌(HPs)。PCR扩增片段大小为822bp,最小检测量为1080个HPs。与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌无特异性反应。用该法检测人工感染猪的肺脏、心脏和肾脏抽提的DNA,结果为阳性;检测肝脏、脾脏、脑组织样品抽提的DNA,结果为阴性。用该法检测人工感染发病仔猪及自然感染仔猪肺组织,并结合细菌分离培养,证明以肺脏组织为病料,通过细菌分离培养,再用PCR法鉴定分离菌体,可有效地用于HPs的诊断。检测110份来自发病猪场的患病仔猪肺脏病料,其中有53份为阳性,表明HPs所致发的Glasser′s病已在我国部分地区发生和流行。
- 尹秀凤王艳姜平李玉峰蒋文明
- 关键词：副猪嗜血杆菌PCR
- 我国部分地区副猪嗜血杆菌病的流行病学调查被引量：25
- 2007年
- 采用细菌分离鉴定、结合PCR方法,对江苏、上海、安徽、广西、浙江、江西、山东、河南、湖北等省市2003年11月～2005年4月送检的159个患病猪场仔猪肺脏进行了副猪嗜血杆菌检测,结果阳性猪场为76个,阳性率48%,临床症状主要为呼吸困难和体温升高;病理变化主要有肺炎病变和淋巴结肿大或出血。通过数据统计分析,发现该病已在我国不同地区广泛流行,且多发于秋、冬季节。该研究为副猪嗜血杆菌的流行病学研究奠定了基础,也为该病的临床预防提供了理论依据。
- 尹秀凤王艳姜平
- 关键词：副猪嗜血杆菌流行病学细菌分离PCR
- 鸡破骨细胞分化因子(chODF)编码基因克隆与序列分析
- 2007年
- 目的克隆鸡破骨细胞分化因子(chODF)基因,并对其进行序列测定和分析。方法根据GeneBank报道的预测的鸡ODF基因(GeneBank登录号,XM425625)序列,设计引物。从鸡胚额骨分离培养的成骨细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA,用SOE-PCR的方法扩增鸡ODF基因全序列。将获得的预期大小的PCR产物插入pMD18-T克隆载体,转化E.coli感受态细胞,提取质粒,进行双酶切鉴定,对含有目的片段的克隆进行序列测定。结果从成骨细胞中成功地克隆鸡ODF基因片段,其结果与GeneBank上报道的预测序列具有很高的相似性,达到99.3%,与人、小鼠、犬的一致性分别为55.4%、52%和55.7%,提示该基因在进化过程的保守。ODF基因全长1203bp,其阅读框起始于第一个氨基酸,终止于最后一个氨基酸,无信号肽,共编码400个氨基酸。结论ODF作为惟一能够直接诱导破骨细胞分化和功能的细胞因子,对它的深入研究可为探讨骨质疏松等代谢性骨病的发病机制及预防、治疗开辟出广阔的领域。
- 王艳姚静侯加法
- 关键词：基因克隆
- 副猪嗜血杆菌人工感染猪的病理学观察
- 用副猪嗜血杆菌分离株感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难,尸体剖解可见胸腹腔纤维素渗出严重、有大量的渗出液、肺出血及脑充血等,病理组织学表现为肺脏、心脏、脾脏等脏器含...
- 尹秀凤王艳姜平汤景元张书霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌人工感染猪的病理学观察被引量：21
- 2007年
- 用副猪嗜血杆菌分离株感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难。尸体剖检,可见胸腹腔纤维素渗出严重,有大量的渗出液、肺出血及脑充血等;病理组织学表现为,肺脏、心脏、脾脏等脏器含有大量的中性粒细胞的纤维蛋白性多发性浆膜炎、脑膜炎及支气管肺炎。结果表明,此分离株为一高致病潜力的菌株。
- 尹秀凤张书霞王艳姜平汤景元
- 关键词：副猪嗜血杆菌病理学仔猪
- 鸡骨保护素在毕赤酵母中的分泌表达及生物学活性测定被引量：1
- 2009年
- 为了在毕赤酵母中表达鸡骨保护素(chOPG),采用DNA重组技术将鸡OPG成熟肽cDNA片段插入毕赤酵母表达载体pPICZα-A中,以电穿孔法转化酵母X-33,用Zeoc in平板筛选阳性重组子,经甲醇诱导,实现了OPG在毕赤酵母中的分泌表达。SDS-PAGE电泳分析结果显示,表达产物存在两种形式,其相对分子质量分别为43000和53000,表达量约为200 mg.L-1,经免疫印迹验证,有较好的抗原性。表达产物经处理后加入到体外培养的鸡胚破骨细胞上,能显著抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性,减少骨吸收陷窝的个数与面积。
- 姚静胡云峰王艳张风荣侯加法
- 关键词：毕赤酵母分泌表达破骨细胞
- 破骨细胞分化因子可诱导鸡骨髓细胞形成破骨样细胞被引量：3
- 2008年
- 研究了鸡破骨细胞分化因子(Chicken osteoclast differentiation factor,chODF)体外诱导鸡骨髓细胞形成破骨样细胞的能力。在无菌条件下取鸡股骨和胫骨,收集骨髓细胞。试验分设A、B、C、D、E、F、G 7组。A组为对照组,不加细胞因子,其他各组为试验组,其中B组仅加chODF,C组只加巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage-colony-stimulating factor,M-CSF),D、E和F组同时加不同浓度的chODF和M-CSF,G组同时加chODF、M-CSF和鸡护骨素(Chicken osteoprotegerin,chOPG)。通过抗酒石酸盐酸性磷酸酶(Tratrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、HE、骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色和显微、超微检查,观察和鉴定破骨样细胞(Osteoclast like cell,OLC)的形成。结果表明,chODF可诱导形成典型的OLC,骨吸收陷窝清晰可见,其陷窝面积大,数量多,且TRAP阳性多核细胞的数目与ODF的浓度呈正相关,多组比较其差异显著(P<0.05),但若加入chOPG,则阻断了OLC的形成和骨吸收。本试验建立了一种鸡骨髓细胞诱导破骨样细胞方法,既为体外研究鸡破骨细胞的分化发育和功能调节创造了条件,也为进一步研究OPG/ODF/RANK(NF-κB受体,Receptor activator of NF-κB)在蛋鸡骨质疏松症等骨骼疾病的作用机制提供理论基础。
- 王艳侯加法胡云峰张风荣沈向真
- 关键词：破骨细胞分化因子破骨样细胞骨髓细胞
- 副猪嗜血杆菌人工感染猪的病理学观察
- 用副猪嗜血杆菌分离株感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难,尸体剖解可见胸腹腔纤维素渗出严重、有大量的渗出液、肺出血及脑充血等,病理组织学表现为肺脏、心脏、脾脏等脏器含...
- 尹秀凤王艳姜平汤景元张书霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌病理学
- 犬α1干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性研究
- 亚克隆犬α1干扰素(CaIFN-α1)成熟蛋白编码基因并克隆到表达载体pPICZα-A，构建成转移重组载体pPICZα-A-CaIFN-α。pPICZα-A-CaIFN-α经SacI酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-...
- 曹瑞兵王艳魏建超陈溥言
- 关键词：犬瘟热病毒伪狂犬病毒毕赤酵母分泌表达抗病毒活性
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：58
- 2006年
- 采用福尔马林灭活的副猪嗜血杆菌全菌体作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。经试验确定副猪嗜血杆菌全菌体的包被浓度为2·24×107CFU/孔、检测血清为1∶200稀释,同时确立了间接ELISA的最佳反应条件。该方法有很高的特异性和重复性,14个发病猪场100份血清检测结果Hps抗体阳性检出率为94%,明显高于细菌分离鉴定检测结果。
- 王艳夏万田柏坤桃尹秀凤姜平
- 关键词：副猪嗜血杆菌ELISA抗体
