王殿忠
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：南京医科大学鼓楼临床医学院更多>>
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- RNA干扰沉默NF-κB p65基因表达抑制胰腺癌PANC1细胞增殖与侵袭的研究
- 2008年
- 目的运用RNA干扰技术阻断人胰腺癌细胞株PANC1的NF-κB p65表达，观察该基因沉默后对细胞增殖能力及体外侵袭能力的影响。方法采用阳离子脂质体Lipofectamine^TM 2000将化学合成的人NF-κB p65的小干扰RNA（siRNA）转染人胰腺癌细胞PANC1作为siRNA组，另设无同源性siRNA转染细胞的阴性对照组和蒸馏水空白对照组。实验重复6次。应用RT—PCR检测转染细胞NF-κB p65 mRNA与细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA的表达。MTY结合克隆形成实验测定细胞生长抑制率。Matrigel细胞侵袭实验测定细胞体外侵袭能力。结果siRNA组、阴性对照组和空白对照组NF-κB p65 mRNA相对表达量分别为0．227．4±0．045、0．381．4±0．038和0．404．4±0．031；ICAM-1mRNA相对表达量分别为0．597±0．083、0．983±0．068和1．027±0．098；细胞生长抑制率（72h）分别为18．3％、2．3％和0；克隆形成率分别为（14．1±3．1）％、（24．5±2．1）％和（27．2±2．6）％；侵袭细胞数分别为80．25±6．35、123．83±8．80和127．68±9．23。siRNA组均明显低于2个对照组（P〈0．01）。结论NF-κB p65的RNA干扰能抑制胰腺癌PANC1细胞NF-κB p65 mRNA和ICAM-1mRNA的表达，抑制细胞的生长和侵袭。
- 王殿忠谢敏潘一明朱海涛
- 关键词：胰腺肿瘤RNA干扰NF-ΚBICAM-1
- 小干扰RNA沉默NF-κB P65基因表达对胰腺癌细胞株PANC-1增殖与凋亡的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术阻断胰腺癌细胞株PANC-1中NF-κBP65基因表达,并研究该基因沉默后对细胞增殖与凋亡的影响。方法:利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的人NF-κB P65的小干扰RNA转染入胰腺癌细胞株PANC-1中。RT-PCR法测定胰腺癌细胞内NF-κB P65mRNA与细胞周期素D1(cyclinD1)mRNA的表达。ELISA法检测NF-κB亚单位P65的DNA结合活性的改变。MTT法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制情况。流式细胞仪测定细胞凋亡率及细胞周期的变化。结果:化学合成的人NF-κB P65 siRNA能有效地抑制PANC-1细胞中NF-κB P65与cyclinD1基因在mRNA水平上的表达(P<0.01),同时ELISA结果显示,RelA siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。RelA siRNA组中细胞增殖减慢,凋亡率较对照组明显增加(P<0.01),同时G1期细胞所占的比例较对照组增加了10%,S期和G2/M期细胞则分别减少了4%与6%。结论:体外实验初步证明NF-κB P65基因在胰腺癌细胞株增殖分化与凋亡方面扮演重要角色,通过沉默其表达可抑制胰腺癌细胞株PANC-1增殖并诱导其凋亡。
- 王殿忠谢敏潘一明朱海涛
- 关键词：NF-ΚBPANC-1细胞
- RNA干扰下调NF-κB p65基因表达诱导胰腺癌细胞株PANC-1的凋亡被引量：2
- 2008年
- 目的运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术下调胰腺癌细胞株PANC-1中NF-κB p65基因表达,并评价其对肿瘤细胞凋亡的影响。方法利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的人NF-κBp65的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)转染入胰腺癌细胞株PANC-1中。采用RT-PCR法测定细胞内NF-κB p65mRNA的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NF-κB亚单位p65的DNA结合活性的改变,运用Hoechst33258核染色、流式细胞仪和透射电子显微镜检测p65基因表达下调对PANC-1细胞凋亡的影响。结果化学合成的人NF-κB p65siRNA能有效地抑制PANC-1细胞中NF-κB p65mRNA的表达(P<0.01),同时ELISA结果显示,RelA siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于对照组(P<0.05)。Hoechst33258核染色、流式细胞仪和透射电子显微镜检测发现下调p65基因表达能够诱导PANC-1细胞的凋亡。结论体外实验初步证明了NF-κB p65基因在胰腺癌细胞凋亡调控方面扮演重要角色,通过沉默其表达可诱导胰腺癌细胞的凋亡。
- 王殿忠谢敏潘一明朱海涛
- 关键词：RNA干扰NF-ΚBPANC-1细胞
