王欣欣
- 作品数：14 被引量：33H指数：4
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划军队临床高新技术重大项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 噬菌体展示EpCAM单链抗体及免疫原性初步研究
- 2011年
- 目的利用噬菌体展示技术进行鼠抗人EpCAM单链抗体表达并鉴定其免疫活性,构建特异靶向上皮来源肿瘤细胞及癌干细胞的单链抗体。方法采用全基因合成的方法合成VL+Linker+VH的EpCAM的单链抗体(ScFv)基因,克隆到pMD19-T简易载体中,将ScFv基因酶切并纯化后克隆到噬菌体载体pCANTAB-5E,热休克法转化至感受态的大肠杆菌TG1,随机挑取5个克隆,经辅助噬菌体超感染,形成鼠抗人EpCAM噬菌体单链抗体,用ELISA(以P/N>2判定为阳性)和免疫细胞化学法测定其抗原结合活性。结果成功获得pCANTAB-5E/EpCAM ScFv重组克隆,经ELISA和免疫细胞化学测定,噬菌体展示阳性率为20%,展示的单链抗体能与EpCAM抗原和A549细胞特异性结合。结论噬菌体展示技术制备EpCAM单链抗体方法简便、省时、高效。
- 刘晓丽张岸梅林盛王欣欣廖荣霞孙建国陈正堂
- 关键词：单链抗体噬菌体展示EPCAM免疫肿瘤干细胞
- 95D细胞转移相关基因在原发灶、循环肿瘤细胞和转移灶中的差异表达被引量：2
- 2011年
- 目的利用人巨细胞肺癌高转移株(95D)裸鼠自发转移模型,分析CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B肿瘤转移相关基因在原发灶、循环血肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)和转移灶中的差异表达。方法根据前期实验结果并利用GoSufer软件进行GO(gene ontology)分析,筛选出可能与肿瘤转移相关的基因CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B。利用稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人巨细胞肺癌细胞株95D/GFP,建立肺癌裸鼠自发转移模型,用流式细胞分选术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分别纯化原发灶、外周血和转移灶中的肿瘤细胞,利用Real-time PCR技术检测上述基因在上述肿瘤细胞中的相对表达量。结果 CD9、RHOA、MYL12A基因在CTCs中表达较少,其次是肝转移灶,在皮下原发灶中表达较多;B2M基因在皮下原发灶、CTCs和肝转移灶中依次降低;PTOV1基因在CTCs中高表达,其次是皮下原发灶,肝转移灶中表达最少;HSPA1B基因只在原发灶中表达。结论 CD9、RHOA、MYL12A、B2M、HSPA1B基因可能是潜在的肺癌转移抑制基因,而PTOV1可能促进肺癌微转移。
- 李雪涛陈芳琳王欣欣孙建国陈正堂
- 关键词：循环肿瘤细胞荧光定量PCR
- 实时定量PCR检测miR-373*、miR-200c在乳腺癌干细胞中的表达及其靶基因预测被引量：4
- 2011年
- 目的分析miR-373*、miR-200c在乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)和MCF-7乳腺癌细胞株中的差异表达。方法 Trizol法分别抽提乳腺癌干细胞和MCF-7细胞总RNA,实时定量PCR检测miRNAs表达,对表达差异显著的miRNAs进行潜在靶基因预测。结果 miR-373*在乳腺癌干细胞中较MCF-7细胞高表达(6.684±0.548),而miR-200c在乳腺癌干细胞中较MCF-7细胞低表达(0.345±0.031)。通过软件分析预测,miR-373*与TP53INP2、CASP8、EIF4A1、EEF1A1等基因均具有可能靶位点,miR-200c与TCF2、TDE2、SYVN1、PDCD10、RAP2C等基因均具有可能靶位点。结论 miR-373*在乳腺癌干细胞中高表达,可能是一个潜在的癌基因。miR-200c在乳腺癌干细胞中低表达,可能是一个潜在的抑癌基因。
- 邱钧金俊余孙建国廖荣霞王欣欣陈正堂
- 关键词：MIRNAS乳腺癌肿瘤干细胞非编码RNA
- 非小细胞肺癌分子靶向药物转化医学研究的过去、现状与未来被引量：8
- 2012年
- 非小细胞肺癌（NSCLC）的病死率高,治疗颇为棘手。令人欣慰的是,近年来,随着基础医学研究的深入,在NSCLC发病中起重要作用的相关分子靶点陆续被发现,并且,这些基础研究的重大进展已转化为临床实际应用的成果。
- 王欣欣陈正堂
- 关键词：非小细胞肺癌靶向药物
- 原发灶、循环肿瘤细胞和转移灶中95D细胞转移相关基因的差异表达
- ：建立人巨细胞肺癌95D裸鼠自发转移模型,比较CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B等肿瘤转移相关基因在原发灶、循环肿瘤细胞和转移灶中的差异表达. 方法：利用GoSufer软件对前期实验结...
- 李雪涛陈芳琳王欣欣孙建国陈正堂
- 关键词：基因表达循环肿瘤细胞
- 30例晚期非小细胞肺癌胸腔积液KRAS基因突变的检测被引量：3
- 2012年
- 目的通过对合并胸腔积液的非小细胞肺癌(NSCLC)患者胸腔积液KRAS基因的检测,建立非组织来源KRAS检测的替代方法,探讨KRAS突变情况及主要临床病理特征。方法收集30例NSCLC胸腔积液标本,用焦磷酸测序法和锁核酸探针-桑格测序法(LNA-PCR sanger)检测各标本中KRAS突变情况,统计分析KRAS突变与临床病理特征之间的关系。结果焦磷酸测序法检出3例突变,而LNA-PCR sanger测序法则检出6例突变。6例突变中有4例位于第2外显子第12号密码子,2例位于第2外显子第14号密码子。统计学分析KRAS突变与性别、吸烟史、年龄、病理类型及体力状况(PS)评分无关。结论 LNA-PCR sanger测序和焦磷酸测序法均可用于胸腔积液标本KRAS突变检测,可为NSCLC基因检测提供良好的非组织标本替代方法。
- 明华孙洁孙建国张晓晶王欣欣刘佳陈正堂
- 关键词：肺肿瘤癌基因点突变
- 焦磷酸测序技术检测63例晚期NSCLC患者血浆KRAS基因突变被引量：5
- 2012年
- 目的探讨应用焦磷酸测序技术检测血浆KRAS基因突变的实用性,了解晚期非小细胞肺癌(NSCLC)血浆KRAS基因突变率和突变特征。方法收集63例晚期NSCLC患者的外周血标本,分离血浆并提取DNA,采用巢式PCR结合焦磷酸测序分析KRAS基因12和13号密码子突变。结果在63例晚期NSCLC患者中,3例存在血浆KRAS基因突变(4.76%),突变率较低,与亚裔组织KRAS突变率一致,低于西方人KRAS突变率,其突变类型均为单碱基替换突变。其中2例为12密码子突变,1例为13密码子突变。统计学分析未发现血浆KRAS突变与性别、吸烟史、年龄、病理类型、肿瘤分期、体力状况(PS)评分存在相关性。结论焦磷酸测序技术操作简便,可以快速、高通量地进行外周血循环KRAS基因突变检测,可广泛用于筛选对酪氨酸激酶抑制剂耐药的NSCLC患者,更有利于指导患者的个体化分子靶向治疗。
- 孙洁明华孙建国张晓晶王欣欣刘佳陈正堂
- 关键词：血浆突变焦磷酸测序
- 一种用于肺癌诊断的分子信标复合物及其制备方法
- 本发明公开了一种用于肺癌诊断的分子信标复合物，包括磁性纳米微球以及吸附在磁性纳米微球上的分子信标，acc+Cct+Atca+Cgat+Tagcattaa为环状序列，其中环状序列中用大写表示的碱基是进行锁核酸修饰处理后的碱...
- 陈正堂孙建国姚权安江宏林盛张岸梅马虎朱聪惠王欣欣
- 进展期非小细胞肺癌的内科治疗进展
- 背景与目的：肺癌的病死率位居恶性肿瘤之首,而非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌病例的80％～90％,多数患者在就诊时已处于进展期(ⅢB/Ⅳ期),传统的以铂类为主的化疗疗效已进入平台期.近年来,新型化疗药物及靶向药物的问...
- 陈正堂王欣欣
- 关键词：非小细胞肺癌化学疗法靶向药物临床疗效
- 文献传递
- 进展期非小细胞肺癌的内科治疗进展被引量：7
- 2012年
- 世界卫生组织（wHO）预测，到2025年，中国每年新增肺癌患者将达100万。肺癌将成为严重威胁中国居民生命健康的最大隐形“杀手”。非小细胞肺癌（NSCLC）约占所有肺癌的80％～85％。临床确诊的NSCLC多处于进展期（ⅢB、Ⅳ期），此类患者因癌细胞的血行播散及对放、化疗耐受，治疗颇为棘手，5年生存率不足5％。寻找积极有效的治疗新手段迫在眉睫。近年来，随着分子生物学和基因药理学的不断发展，各种新型化疗药物和靶向药物相继问世。如何合理应用这些药物，以循证医学的证据制订个体化的科学治疗方案，是提高疗效、延长生存期的关键。本文就进展期NSCLC内科治疗的若干进展进行综述。
- 王欣欣陈正堂
- 关键词：药物疗法靶向治疗
