王国兴
- 作品数：18 被引量：47H指数：4
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金美国中华医学基金会项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因表达及其信号转导机制被引量：1
- 2005年
- 目的:本项研究目的是检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞hBD-2基因的激活作用并分离其活性组分,进一步探讨其受体及其胞内信号传导通路.
方法:厌氧培养长双歧杆菌,采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取方法获得双歧杆菌胞壁蛋白质成份,利用SepharylS-100HR分子筛分离细胞壁蛋白.分别利用活菌,热灭活全菌,全细胞壁组份和全细胞壁蛋白组分,刺激人肠腺上皮细胞Caco-2,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、Northem杂交、免疫细胞化学染色和ELISA等技术在mRNA和肽水平上检测hBD-2基因的表达.应用Westem Blotting技术检测到IκB-α磷酸化和降解、NF-κBp65的核移位以及细胞内MAPKs蛋白分子ERK1/2、p38 MAPK和JNK的磷酸化.
- 王国兴吴琦黄宁冯云李成梁王伯瑶
- 关键词：长双歧杆菌蛋白诱导Β-防御素-2信号转导机制NORTHERN杂交
- 中波紫外线激活HaCaT细胞炎症信号通路的实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的探讨中波紫外线(UVB)对角质形成细胞(KC)炎症信号通路的影响。方法UVB(40 mJ/cm^2)照射永生化人角质形成细胞株HaCaT细胞,分别于照射后0、10、30、60、120、240min收集细胞蛋白和核蛋白,蛋白质印迹法检测NF-κB信号传导通路中的重要分子-磷酸化IκB-α(P-IκB-α)、IκB-α和NF-κB p65蛋白的动态变化,以及MAPK家族的蛋白分子ERK1/2、p38、c-JNK等磷酸化激活的动态变化。结果蛋白质印迹法检测结果显示,UVB照射后0．5h IκB-α开始发生磷酸化和降解,在第2、4小时时更加明显；细胞核蛋白p65的量在照射后0．5h开始升高,在随后的2h时达到高峰。UVB照射后10 min HaCaT细胞内的ERK1/2、p38、c-JNK蛋白的磷酸化就开始增加。结论UVB照射KC可激活细胞内的NF-κB及MAPK信号传导通路。
- 蒋献王国兴吴琦李利冉玉平
- 关键词：紫外线角蛋白细胞信号传导
- 人β-防御素-2基因5′-端转录调控序列分析被引量：2
- 2002年
- 目的 :对在LPS、TNF α刺激下 ,人 β 防御素 2基因 5′ 端转录调控机制进行初步分析。 方法 :将HBD 2基因 5′ 端上游序列连接入无启动子的pEGFP 1质粒 ,构建了系列 5′端缺失的 pEGFP 1 /HBD 2报告质粒。pEGFP 1 /HBD 2质粒转染细胞后给予LPS、TNF α刺激 ,用RT PCR检测 pEGFP的mRNA浓度。 结果 :显示HBD 2基因上游 2 41段有较强的启动子活性 ;LPS、TNF α刺激后 ,即使上游序列缩短至 2 41位点时 ,报告基因 pEGFP的mRNA表达量仍明显增高。说明HBD 2基因上游 2 41区域含有LPS、TNF α刺激后激活的转录因子作用位点。计算机分析表明 2 3 2 / 2 2 2区域有一同源性极高的NF kB结合元件 ,提示NF kB结合元件可能调控HBD
- 汪宇辉王国兴黄宁吴琦王伯瑶
- 关键词：转录调控LPSTNF-Α抗菌肽
- 双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2 mRNA的表达被引量：5
- 2003年
- 目的 检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞β-防御素 - 2 (h BD- 2 )基因的激活作用及其活性组分。方法 应用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法和 Northern杂交检测 HT- 2 9细胞 h BD- 2 m RNA的表达 ;采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取等方法分离双歧杆菌胞壁蛋白质成分。结果 RT- PCR和 Northern杂交分析显示 ,在正常培养条件下 HT- 2 9细胞无可见的 h BD- 2 m RNA表达信号 ,但在双歧杆菌菌体、细胞壁和胞壁蛋白刺激下均检测出显著的 h BD- 2 m RNA表达。结论 双歧杆菌能诱导人肠腺上皮细胞 h BD- 2基因的表达 。
- 王国兴冯云汪宇辉黄宁吴琦王伯瑶
- 关键词：Β-防御素-2基因表达
- 双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因表达及其信号转导机制
- 消化道中定植有大量菌群，消化道上皮细胞与这些菌群直接接触，是肠道粘膜免疫的第一道防线，其分泌的抗菌肽分子在维持肠道微生态平衡、抵抗病原菌感染中占有重要地位。人β-防御素-2(hBD-2)是一重要的抗菌肽分子，广泛表达于皮...
- 王国兴
- 关键词：防御素双歧杆菌信号转导病理生理学
- 克雷伯杆菌分泌因子及菌体成分在细胞内、外刺激肺上皮细胞分泌IL-8的研究被引量：1
- 2005年
- 目的:通过比较肺炎克雷伯杆菌(Klebsiellapneumoniae,Kp)分泌因子及菌体成分对经过digitonin处理和未处理的肺上皮细胞株IL8分泌的影响,进一步了解克雷伯杆菌诱导肺上皮细胞炎症反应的信号转导机制。方法:实验分为两组,一组使用能使细胞膜通透性增加的温和去污剂digitonin处理,而另一组不处理。分别用Kp03183的细菌培养上清和超声处理的菌体成分刺激肺上皮细胞株A549,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞IL8表达水平。并用RT-PCR的方法检测肺上皮细胞胞内模式识别受体NOD1的表达。结果:Kp培养上清对未经digitonin处理的细胞IL8分泌无明显增强作用,与对照相比差异无显著意义(p>0.05),菌体成分能刺激IL8分泌增加(P<0.01),但增高不超过一倍。经digitonin处理使细胞膜通透性增加后,Kp培养上清及菌体成分刺激细胞IL8的作用都增强,菌体成分刺激IL8效果更为显著,为对照的3倍,而培养上清作用相对较弱。RT-PCR检测结果表明,肺上皮细胞表达胞内模式识别受体NOD1。结论:菌体成分是诱导炎症反应更有效的刺激物,肺炎克雷柏杆菌侵入肺上皮细胞可能是引发细胞炎症反应的始动环节。肺上皮细胞表达胞内模式识别受体NOD1,它是否参与肺上皮细胞识别肺炎克雷伯杆菌菌体成分,值得进一步的研究。
- 周敏燕王国兴冯云黄宁王伯瑶吴琦
- 关键词：分泌因子上皮细胞分泌细胞内IL-8分泌肺上皮细胞细胞株A549
- 双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素2(hBD-2)mRNA的表达
- 2003年
- 王国兴吴琦黄宁汪宇辉王伯瑶
- 关键词：双歧杆菌Β-防御素2HBD-2基因表达
- 人抗菌肽HBD-2的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2005年
- 制备人β-防御素2(HBD-2)多克隆抗体,以用于HBD-2蛋白水平表达的检测。提取人肠腺上皮细胞株Caco-2总RNA,设计引物,应用RT-PCR从其总RNA中扩增HBD-2成熟肽cDNA片段,以pGEX-1λT为载体,构建原核表达质粒pGEX-1λT-HBD-2。大肠杆菌裂解物经亲合层析纯化后获得分子量约30kDa的融合蛋白,将此融合蛋白免疫新西兰兔,并用正辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,ELISA法显示抗血清对HBD-2的效价为1∶12800,Western印迹显示抗血清可识别HBD-2。本实验结果证明应用重组融合小肽代替白蛋白或甲状腺-肽偶联免疫可获得其高效价的识别HBD-2的多克隆抗体,为今后从蛋白质水平研究HBD-2基因的诱导表达,包括组织分布和基因表达调控等研究打下了基础。
- 王国兴冯云吴琦阎蓉华李洵王伯瑶黄宁
- 关键词：HBD-2原核表达多克隆抗体Β-防御素2天然免疫
- 双歧杆菌细胞壁和双歧杆菌细胞壁蛋白在制药中的应用
- 本发明通过实验证明了双歧杆菌细胞壁和细胞壁蛋白对防御素基因是有效的活化因子，能使防御素的表达明显增高，因此，可将双歧杆菌细胞壁和细胞壁蛋白用于制备激活哺乳动物防御素基因的药品，用药方法可以通过口服、静脉内的注射、吸入或者...
- 王伯瑶王国兴黄宁吴琦汪宇辉冯云
- 文献传递
- 人LAK细胞免疫效应分子HMGN2的鉴定被引量：7
- 2005年
- 为分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)小分子抗菌多肽,应用制备尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化人LAK细胞酸溶性提取物,纯化出一个具抗菌活性的多肽HLP-3p21.蛋白质N端氨基酸测序、质谱精确分子质量测定、蛋白质印迹分析证明HLP-3p21为HMGN2.最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)试验证明HMGN2有抗大肠杆菌ML-35p氨苄青霉素耐药株、铜绿假单胞菌ATCC27853、白色念珠菌ATCC10231活性,无抗金黄色葡萄球菌ATCC25923活性.制备HMGN2多克隆抗体,应用免疫荧光化学、酶联免疫吸附测定和蛋白质印迹方法对HMGN2进行定位分析,证明单个核细胞经IL-2刺激成为LAK细胞时部分HMGN2由胞核转移至胞浆,进而分泌到胞外.提示HMGN2是LAK细胞一个新的免疫效应分子.
- 冯云熊文碧王国兴黄宁吴琦鲍朗李绚王伯瑶
- 关键词：LAK细胞HMGN2抗菌活性
