王华兵
- 作品数：33 被引量：64H指数：4
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学轻工技术与工程更多>>
- 一种分离鳞翅目昆虫有核精子和无核精子的方法
- 本发明公开了一种分离鳞翅目昆虫有核精子和无核精子的方法，属于昆虫生殖领域。该方法通过组装移液枪枪头、乳胶管、滤菌膜、注射器针筒及带孔软塞与毛细玻璃针的口吸器，并在体视显微镜下，利用口吸器对有核精子束和无核精子束进行区分与...
- 梁燕婷王华兵
- 桑螟胞外铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与融合表达及重组蛋白酶活性检测被引量：2
- 2018年
- 桑螟（Glyphodes pyloalis）是蚕区桑园的主要害虫之一,鉴定其抵御各种环境胁迫相关的基因,是制定防治新策略的重要理论依据。对桑螟幼虫转录组数据的分析中,发现桑螟胞外铜锌超氧化物歧化酶（ec Cu/Zn SOD）基因在应对高温胁迫时的表达量发生显著变化。为了明确ec Cu/Zn SOD在桑螟应对不良环境中发挥的作用,克隆和鉴定了其编码基因Gpec Cu/Zn SOD（Gen Bank登录号：MG566057）。Gpec Cu/Zn SOD基因的开放阅读框长726 bp,编码241个氨基酸,编码蛋白质序列与脐橙螟（Amyelois transitella）的一种SOD蛋白基因（Gen Bank登录号：XP_013197347.1）编码氨基酸序列的一致性高达83%。采用邻近相接法构建桑螟与其他昆虫的Cu/Zn SOD系统发生树,结果显示Cu/Zn SOD被分为ec Cu/Zn SOD和ic Cu/Zn SOD两类,主要是随物种进化而进化。采用半定量RT-PCR检测不同温度处理桑螟5龄幼虫的Gpec Cu/Zn SOD基因表达情况,结果显示幼虫体内的Gpec Cu/Zn SOD在高温（40℃）和低温（4℃）条件下表达量最高。构建p Cold-Gpec Cu/Zn SOD重组表达质粒,并在大肠埃希菌中实现异源表达。利用镍柱亲和层析法分离纯化重组Gpec Cu/Zn SOD蛋白,采用WST-1法测定重组Gpec Cu/Zn SOD蛋白在40℃时的酶活性最高,并且经60～70℃处理后仍然具有较高的酶活性。采用牛津杯法分析重组Gpec Cu/Zn SOD的抗氧化活性表明：过表达Gpec Cu/Zn SOD的大肠埃希菌抗氧化的能力显著增强,显示Gpec Cu/Zn SOD具有较强的抗氧化功能。研究结果暗示Gpec Cu/Zn SOD在桑螟应对高温胁迫过程中发挥着重要作用。
- 刘云财苏航王沛城徐雅岚魏天铖王华兵徐豫松
- 关键词：桑螟高温胁迫酶活力
- 一种快速鉴定5种家禽新鲜皮及皮革的方法
- 本发明提供一种快速鉴定5种家禽新鲜皮及皮革的方法，使用常规基因组DNA提取试剂盒抽取样本基因组，使用通用引物16s rRNA‑F和16s rRNA‑R扩增得到500bp左右的16srRNA片段，通过琼脂糖凝胶电泳检测PC...
- 王华兵卢庆宇郝志华李颖慧
- 桑螟细胞色素P450基因的鉴定及在不同来源样本和杀虫剂诱导下的表达分析被引量：1
- 2018年
- 桑螟（Glyphodes pyloalis）是桑树的主要害虫,因其对专用杀虫剂产生了一定抗性,导致防治效果下降。从分子水平研究桑螟对杀虫剂的抗性机制,有利于制定新的防治策略。通过对桑螟中肠转录组数据分析,鉴定了2个细胞色素P450基因CYP9A20和CYP324A19。系统进化分析表明,桑螟CYP9A20和CYP324A19基因均属于CYP3家族,其中CYP324A19基因编码氨基酸序列与同属鳞翅目的稻纵卷叶螟（Cnaphalocrocis medinalis）的同源序列亲缘关系比较近,序列相似度为63%;桑螟CYP9A20基因编码氨基酸序列同样与稻纵卷叶螟的同源序列亲缘关系较近,序列相似度高达80%。以浙江省杭州、湖州和海宁3个蚕区桑园采集的桑螟样本提取DNA,经qRT-PCR分析幼虫中肠的CYP9A20基因表达水平没有明显差异,而CYP324A19基因的表达水平存在显著差异,其中来自湖州、海宁的桑螟样本中该基因的表达量分别为来自杭州的桑螟样本的3.2倍、3.0倍。用15μg/m L辛硫磷和15μg/m L残杀威处理来自湖州的桑螟幼虫24 h后,qRT-PCR检测CYP9A20基因在幼虫中肠中的表达水平无明显变化,而CYP324A19基因的表达显著上调,辛硫磷、残杀威处理后该基因的表达量分别上调4.0倍、7.8倍。研究结果表明,桑螟的2个细胞色素P450基因在进化上出现了不同分歧,从而导致二者在功能上可能存在明显差异,CYP324A19基因可能通过上调表达参与桑螟对杀虫剂胁迫的响应过程。
- 苏航占鹏飞董久鸣钱秋杰刘云财徐豫松王华兵
- 关键词：桑螟细胞色素P450基因鉴定耐药性
- 家蚕Toll和IMD信号通路重要基因对不同病原体感染的免疫响应
- 2023年
- Toll和IMD通路是昆虫先天免疫的重要信号通路,抗菌肽的产生可以由这些通路激活。通过感染4种不同种类的病原体(球孢白僵菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌),对家蚕Toll通路的BmTube、BmMyD88、BmTollip、BmECSIT、BmTRAF2和BmCactus基因,IMD通路的BmDredd、BmFadd、BmTAB2、BmTAK1、BmRelish1和BmRelish2基因以及4类不同抗菌肽(antimicrobial peptide,AMP)基因BmCecropinA1、BmAttacin1、BmDefensinA和BmGloverin1的表达进行分析,探讨家蚕在感染不同病原后Toll和IMD通路级联反应的免疫响应。结果表明,家蚕Toll和IMD信号通路级联反应基因表达调控与不同种类病原体感染相关;不同类型的病原选择性地激活Toll和IMD通路,进而诱导特定AMP基因的表达,AMP基因表达对细菌的免疫响应快,对真菌的免疫响应慢,其中BmCecropinA1表达强度显著高于其他类型AMP基因。
- 金玥张煜马焕艳田欢邹诗雨王华兵徐豫松
- 关键词：家蚕免疫响应抗菌肽级联反应
- 家蚕载脂蛋白D1的抗氧化和抗细胞凋亡研究
- 载脂蛋白D是载脂蛋白家族的成员,它不仅能结合各种不同的脂类或固醇类小分子,而且还参与了多种生物学过程。已知在哺乳动物和果蝇中,ApoD和它的同源物具有神经保护和抗氧化的作用。我们利用生物信息学分析发现,在鳞翅目昆虫基因组...
- 周燕燕汪丽刘敏敏李荣俏李晓童王华兵
- 关键词：家蚕抗氧化细胞凋亡
- 文献传递
- 家蚕泛素结合酶新基因的研究
- 在家蚕丝腺cDNA文库测序过程中，发现一个编码家蚕泛素结合酶的EST序列，利用3'RACE方法克隆了一个新的家蚕泛素结合酶基因cDNA全长序列，命名为BmUCE2I(Gen-Bank登录号为DQ219874)。家蚕BmU...
- 徐豫松王华兵
- 关键词：启动子基因调控基因结构
- 文献传递
- 家蚕自噬相关蛋白BmATG6的多克隆抗体制备及呋虫胺胁迫下的表达
- 2023年
- 自噬是生物体内维持细胞环境稳定的重要机制,在生物体面临外界刺激时会被诱导以进行适应性反应。对家蚕自噬相关蛋白BmATG6进行基因克隆,制备多克隆抗体,分析呋虫胺暴露后BmN细胞与家蚕5龄第3天幼虫BmATG6的表达变化。氨基酸序列比对表明BmATG6与鳞翅目昆虫的ATG6/Beclin 1相似度较高。原核表达并纯化了BmATG6抗原蛋白,随后接种新西兰白兔,获得效价1∶64 000的多克隆抗体,Western blot在家蚕中肠样品中检测到大小约为50 kD的条带。呋虫胺处理2 h后BmN细胞中的BmATG6蛋白表述显著上调;呋虫胺处理24 h后,家蚕5龄第3天幼虫中肠和脂肪体中的BmATG6蛋白表达上调。结果表明,呋虫胺显著诱导BmN细胞和家蚕组织中的BmATG6表达上调。研究结果为解析新烟碱杀虫剂对非靶标生物的毒性机制和研究家蚕自噬调控机制提供了理论基础。
- 许诗亮郝志华马焕艳李颖慧荆文辉徐豫松王华兵
- 关键词：家蚕自噬多克隆抗体呋虫胺
- 桑螟杀虫剂抗性研究进展
- 桑螟(Diaphania pyloalis Walker)作为桑园的主要害虫,在我国主要蚕区发生频繁,危害严重。近年来由于气候,防治不当等原因经常引发桑螟暴发,给当地桑农带来严重损失。本文综述近年来关于桑螟杀虫剂抗性的研...
- 苏航王华兵
- 关键词：桑螟抗药性抗性机制
- 文献传递
- 家蚕细胞核酸结合蛋白基因的克隆及基因结构分析
- 锌指蛋白是一类能与细胞内核酸特异结合,调控基因表达活性,对细胞分裂、分化、胚胎发育及个体生长有重要作用的转录因子。我们从家蚕5龄丝腺组织cDNA 文库中克隆了一个具有锌指结构的新基因,命名为BmZFP 基因（GenBan...
- 徐豫松王华兵
- 关键词：基因克隆基因结构启动子
- 文献传递
