王加强
- 作品数：15 被引量：17H指数：3
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 猪肌肉生长抑制素基因启动子的克隆与鉴定
- 2011年
- 利用PCR方法从猪基因组DNA中扩增了1.2 kb的肌肉生长抑制素(myostatin)基因启动子序列。并进一步以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,构建了真核表达载体MSTNPro-EGFP;通过转染C2C12小鼠骨骼肌成肌细胞和猪成纤维细胞,对猪myostatin基因启动子的转录调控活性进行鉴定。结果表明:猪myostatin基因启动子可以启动GFP在C2C12细胞中的转录和表达,而将猪MSTNPro-EGFP载体转染猪胎儿成纤维细胞后并未观察到GFP的表达,说明myostatin基因表达的肌肉特异性源于启动子的转录特异性。
- 姜丹丹牟彦双李慧王加强刘忠华
- 关键词：肌肉生长抑制素启动子C2C12
- 一种判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法
- 一种判定蛋白质能否发生液‑液相分离的方法，属于基因工程技术领域。为了解决目前研究蛋白能否发生“液‑液相分离”所用方法步骤繁琐，费时费力，原核表达易形成包涵体的问题，本发明提供了一种判定蛋白质能否发生液‑液相分离的方法。本...
- 王加强王乐韵
- 文献传递
- 猪转录因子SOX2下游调控蛋白筛选及调控网络建立
- 2019年
- SOX2是早期胚胎发育与干细胞多能性维持相关的重要转录因子。从猪孤雌囊胚中克隆获得猪SOX2基因并构建对应过表达体系。通过猪pEF细胞系与PK15细胞系中过表达SOX2基因及qPCR技术,检测89个下游调控候选基因表达情况,建立猪SOX2下游调控网络。结果发现,GATA4、MSC、GSC、FGF4、STELLA、ACACA、FN1、KLF4以及MEK基因在pEF细胞系与PK15细胞系间呈差异性调控表达。BMP4、FGFR2、ACAA2、ACSL3、β-CATENIN、c-MYC、MYST3、GSK3β、ALDH3A2、STAT3、SMAD2、KDM6A、ACADL、PI3K与WDR3基因在两种细胞系中呈同趋势性调控表达;经JASPAR数据库预测发现,WDR3、β-CATENIN、ACAA2、KDM6A、STAT3、ACADL、GSK3β与ALDH3A2基因启动子区域存在高相关性的SOX2蛋白结合位点,推测这些基因受SOX2蛋白直接调控;同时构建针对猪SOX2基因的高效敲除体系。研究结果为建立物种特异性的猪SOX2调控网络提供数据基础。
- 吕嘉伟尹智李妍王加强赵剑超伟人悦刘忠华
- 关键词：转录因子调控网络基因敲除
- 高龄女性卵子颗粒细胞转录组的数据分析
- 2025年
- 背景:颗粒细胞的状态很大程度上影响卵母细胞的质量。随着高龄女性在辅助生殖中占比不断增多,为了能更好地评估卵母细胞的质量,此研究在转录水平对不同年龄段患者来源的颗粒细胞进行了检测。目的:探究低龄和高龄患者颗粒细胞mRNA及长链非编码RNA表达变化。方法:在辅助生殖治疗周期中收集患者取卵时获得的废弃卵丘颗粒细胞,其中低龄组患者年龄为25-35周岁,高龄组患者年龄为38-45周岁。对低龄和高龄女性颗粒细胞进行RNA-seq分析,每组3个重复。结果与结论:①RNA-seq分析结果显示,样本平均测序量超过14 G,质控后的数据质量Q30超过93%,数据平均比对率为98.4%,表明数据质量较好;②主成分分析及相关性分析结果显示高龄组和低龄组样本间基因表达水平具有明显差异;③差异分析结果显示,相对于低龄组,高龄组颗粒细胞中共有410个差异表达的mRNA,其中上调基因167个,下调基因243个,GO分析结果显示下调基因主要富集到胞吐作用调节、激素代谢过程等,GSEA分析结果显示高龄组颗粒细胞中与分泌相关的通路表达下调;④相对于低龄组,高龄组共检测到662个差异表达的长链非编码RNA,这部分长链非编码RNA直接调控的蛋白质编码基因为1772个,其中与差异表达基因交集59个。结果表明:高龄组颗粒细胞中与分泌相关的基因及通路表达下调,从而影响卵母细胞质量,同时这些表达下调的基因受到长链非编码RNA调控,因此长链非编码RNA的表达可能与年龄有关。
- 秦立峰王加强朱伶
- 关键词：颗粒细胞卵母细胞差异基因
- 附加型载体结合精子载体法生产转基因鸡
- 转基因动物是生物工程及生物医学的重要工具之一。目前,整合型载体广泛应用于转基因技术,但整合型载体可能导致插入突变,以及转入基因的随机表达甚至沉默。核骨架/核基质附着区(scaffold/matrix attachment...
- 王加强牟彦双尹智刘忠华
- 关键词：转基因精子载体法
- 文献传递
- 体细胞重编程研究进展被引量：11
- 2016年
- 多细胞生物个体的分化细胞均通过一系列动态调控机制维持其稳态,不同类型分化细胞之间的转化在自然条件下不会自发发生.通过实验手段可以逆转细胞分化的进程使之改变状态,从一种基因表达谱转换成另一套表达谱,从而实现细胞类型的转化也即重编程.目前已知可以通过4种不同途径,即核移植、细胞融合、胞质孵育及诱导多能干细胞,将终末分化的体细胞重编程为类胚胎干细胞的多能性干细胞状态,而后者具有发育成为动物个体所有细胞的能力.由于细胞重编程的过程能够将细胞命运逆转成为具有再生能力干细胞的状态,因此,这一领域的系列发现为再生医学、疾病个体化治疗及药物筛选提供了巨大的前景.
- 李鑫王加强周琪
- 关键词：体细胞重编程核移植细胞融合诱导多能干细胞
- 一种判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法
- 一种判定蛋白质能否发生液‑液相分离的方法，属于基因工程技术领域。为了解决目前研究蛋白能否发生“液‑液相分离”所用方法步骤繁琐，费时费力，原核表达易形成包涵体的问题，本发明提供了一种判定蛋白质能否发生液‑液相分离的方法。本...
- 王加强王乐韵
- 文献传递
- 干细胞与再生医学被引量：3
- 2016年
- 多能干细胞(PSCs)具有发育的多潜能性,可以分化为机体各种细胞类型,是再生医学领域进行细胞替代治疗以及组织/器官再生的基础.如何由终末分化的体细胞重编程获得病人特异的PSCs,是再生医学领域的核心问题之一,目前主要采取两种重编程策略:借助核移植技术由早期胚胎体外建系获得,或通过诱导重编程技术获得.本文将综述不同多能性等级PSCs的获得方法以及其在多能性机制研究中的应用,并讨论PSCs通过异种嵌合实现组织/器官再造的潜在应用价值.PSCs的研究不仅推动了基础生物学研究的发展,同时也为再生医学走向临床开辟了道路.
- 王加强周琪
- 关键词：多能干细胞重编程
- 干细胞多能性信号调控机制研究进展
- 2011年
- 多能性干细胞是一类具有体外无限自我复制和分化为体内多种细胞类型能力的多潜能细胞,是研究基因功能、建立疾病模型和促进再生医学领域发展的一种重要工具。自1981年小鼠胚胎干细胞建立以来,科学家们已经先后成功地建立了灵长类、人、大鼠的胚胎干细胞和小鼠、大鼠的上胚层干细胞等。但是,目前研究表明,维持人、灵长类胚胎干细胞的多能性信号通路与维持小鼠、大鼠胚胎干细胞的截然不同,而与维持小鼠、大鼠上胚层干细胞的信号通路比较类似。因此,该文对目前研究较多的维持小鼠胚胎干细胞、人胚胎干细胞和小鼠上胚层干细胞的多能性信号通路进行了综述,希望能够对其它物种的多能性干细胞研究提供有益的借鉴。
- 王娟孔庆然王加强刘忠华
- 关键词：胚胎干细胞多能性信号通路
- CRISPR/Cas9系统介导的一步法胚胎注射获得猪GGTA1敲除胚胎被引量：3
- 2016年
- 利用CRISPR/Cas9系统介导的一步法注射方式,对猪1-细胞期孤雌胚胎进行注射来获得GGTA1基因敲除胚胎,同时对胚胎发育过程进行跟踪,探索CRISPR/Cas9系统介导猪基因敲除效率和对胚胎发育的影响。结果表明,与对照组相比,利用CRISPR/Cas9系统一步法制备基因敲除胚胎,对卵裂率、囊胚率等胚胎发育指标方面无显著影响;利用T7内切酶I检测发现,GGTA1基因突变率约为28.07%;测序发现,突变类型包括插入型突变以及插入-删除型突变。说明CRISPR/Cas9系统介导的一步法能够高效快速地实现基因敲除且不影响早期胚胎发育。
- 尹智袁雪薇吕嘉伟王加强刘忠华牟彦双
- 关键词：基因敲除异种器官移植
