林浪
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：教育部留学回国人员科研启动基金广西壮族自治区自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 水牛YY1基因克隆及其shRNA片段的筛选被引量：7
- 2014年
- 本试验旨在克隆水牛阴阳因子1(YY1)基因,并筛选获得可有效抑制水牛YY1基因表达的shRNA干扰片段。以水牛成纤维细胞cDNA为模板,采用RT-PCR方法,扩增水牛YY1基因CDS序列,将其连接插入到pMD18-T载体中,进行序列测序并分析。采用Xho I和EcoR I双酶切,将水牛YY1基因编码区定向克隆至pEGFP-N1载体中,构建其真核表达载体pYY1-EGFP-N1。设计2条靶向水牛YY1基因的shRNA序列并构建其慢病毒表达载体,命名为pSicoR-GFP-YY1 shRNA1/2。以pSicoR-GFP和pSieoR-GFP-1864分别为空白对照和阴性对照质粒,采用脂质体转染方法,将YY1真核表达载体分别与2条shRNA慢病毒表达载体共转染293T细胞,48h后观察绿色荧光蛋白EGFP表达情况;72h收集共转染细胞样品,采用qRT-PCR和western-blot方法分析YY1基因的表达水平。结果表明,克隆得到1248 bp的水牛YY1基因CDS序列,其与牛YY1基因的同源性达99%。构建的水牛YY1基因真核表达载体pYY1-EGFP-N1能在水牛胎儿成纤维细胞(BFF)中瞬时表达。酶切分析及序列测定结果表明,所构建的shRNA慢病毒表达载体pSieoR-GFP-YY1 shRNA1/2为阳性克隆。质粒共转染293T细胞48h后,可观察到绿色荧光蛋白EGFP的表达。qRT-PCR结果显示,设计合成的2条shRNA对水牛YY1基因的表达均有抑制效果,其中YY1 shRNA2的抑制效果(93.64%)显著高于YY1 shRNA1(50.77%)(P<0.05),Western-blot分析结果显示,2条shRNA对YY1蛋白表达均有抑制效果。以上结果说明克隆得到水牛YY1基因编码区序列,并获得2条有效抑制其表达的shRNA片段,为进一步阐明YY1基因在水牛早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础。
- 龚云乔树叶林浪王梦石德顺李湘萍
- 关键词：SHRNA慢病毒表达载体基因表达
- 水牛缝隙连接蛋白43基因克隆及表达被引量：2
- 2013年
- 本研究克隆了水牛缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)基因序列,并运用生物信息学方法对其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质、蛋白质结构进行了系统分析,对Cx43基因在水牛不同组织和不同发育阶段卵泡中的表达差异进行了检测。结果表明,应用RT-PCR技术克隆获得了水牛Cx43基因序列,其中编码区全长1152 bp,编码383个氨基酸,蛋白质理论分子质量43.13 ku,等电点为8.88。多重序列比对结果显示,水牛Cx43核苷酸序列与牛、羊、猪、马和人相应序列的同源性分别为99%、98%、94%、93%和92%,系统进化树分析结果推测,Cx43基因在不同物种进化过程中具有高度保守性;对水牛Cx43蛋白的二级和三级结构分析发现,其具有缝隙连接蛋白的特有结构。定量RT-PCR结果显示,Cx43在水牛卵巢组织中相对表达量最高,睾丸、肾脏、心脏和皮肤次之,肝脏和大脑表达量较低。免疫组化结果发现,Cx43蛋白表达随卵泡发育时期的不同而变化,Cx43蛋白随卵泡发育表达逐渐增强。
- 林浪龚云王梦屈春凤黄时海雷小灿石德顺李湘萍
- 关键词：水牛克隆
- 水牛SUV39H1基因shRNA片段的筛选及对外源转基因表达效率的影响
- 转基因动物制备过程中，外源基因的表达水平受到很多因素的影响，其中表观遗传修饰是影响外源基因表达效率的一个重要因素。表观遗传修饰中，由花斑抑制因子同源物(suppressor of variegation3-9 homol...
- 林浪
- 关键词：慢病毒表达载体组蛋白甲基化水牛免疫组化卵母细胞
- 抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA，该shRNA为shSUV39H1-259或shSUV39H1-597，它们都包含19nt的siRNA正义链，9nt的loop环，19nt的siRNA反义链和终止...
- 李湘萍石德顺林浪
- 文献传递
- 抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA，该shRNA为shSUV39H1-259或shSUV39H1-597，它们都包含19nt的siRNA正义链，9nt的loop环，19nt的siRNA反义链和终止...
- 李湘萍石德顺林浪
- 文献传递
