杨金广
- 作品数：134 被引量：257H指数：9
- 供职机构：中国农业科学院烟草研究所更多>>
- 发文基金：中国烟草总公司科技项目云南省烟草专卖局(公司)科技项目四川省烟草专卖局(公司)科技项目更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 一种RNAi纳米制剂及其制备方法和在TMV防治中的应用
- 本发明属于基因工程技术及其应用领域，为了解决目前缺乏抗TMV的高效RNAi纳米制剂，且药剂制备过程繁杂，dsRNA的稳定性及递送效率差等问题，提供了一种RNAi纳米制剂及其制备方法和在TMV防治中的应用，该RNAi纳米制...
- 杨金广王凤龙徐翔李莹宋丽云申莉莉雷强冯长春李斌王勇刘东阳江连强
- 本氏烟NbNAC062的克隆及对马铃薯Y病毒侵染的抑制作用被引量：4
- 2021年
- 【目的】马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)是危害我国烟草生产的最重要病毒之一,NAC转录因子与植物的抗病、抗逆密切相关,本论文克隆NbNAC062进行生物信息学分析,并研究其在PVY侵染过程中的作用,为烟草抗病毒药剂的开发提供靶标。【方法】以本氏烟(Nicotiana benthamiana)为材料克隆NbNAC062,利用MEGA、UniProt、SMART、TMHMM Server 2.0、Sol Genomics Network、PlantCARE等技术进行生物信息学分析;利用激光共聚焦与实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)明确PVY侵染前后NbNAC062蛋白定位及mRNA表达量变化;基于病毒介导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)和过表达技术,构建pTRV::NbNAC062沉默载体与pEarleyGate100::RFP::NbNAC062过表达载体,采用qRT-PCR和Western blot检测NbNAC062在本氏烟中沉默与过表达后,PVY的积累量变化及未折叠蛋白应答(unfolded protein response,UPR)相关基因BiP的表达差异。【结果】NbNAC062编码646个氨基酸,N端28—179 aa为NAC结构域,129—185 aa为DNA结合区域,C末端621—643 aa为疏水跨膜结构,系统进化树与蛋白序列分析表明本氏烟NbNAC062与渐狭叶烟草NaNAC062亲缘关系最近。NbNAC062启动子中包含脱落酸、茉莉酸甲酯、水杨酸以及逆境响应相关的多种顺式作用元件。PVY侵染激活NbNAC062从细胞膜转移至细胞核,且诱导NbNAC062上调表达。PVY侵染本氏烟5、7 d,处理组NbNAC062 mRNA水平分别为对照组的2.52、1.95倍;PVY侵染3 d,BiP mRNA表达量为对照组的2.39倍,PVY侵染7 d,BiP表达量极显著低于对照组,下调表达56.77%。本氏烟沉默NbNAC062并接种PVY,接种后3、5、7 d,与对照组相比,沉默组PVY CP mRNA上调表达,分别为对照组的2.12、2.41、1.38倍,BiP mRNA表达量则下调,分别下调28.19%、58.11%、10.77%,接种后5、7 d沉默组PVY CP蛋白含量亦显著高于对照组。过表达NbNAC062并接种PVY,接种后24、48、72 h,与对照组相比,过表达组PVY CP mRNA分别下
- 曲潇玲焦裕冰罗健达宋丽云李莹申莉莉杨金广王凤龙
- 关键词：马铃薯Y病毒基因沉默
- 一种烟草普通花叶病毒生防内生菌粪产碱菌菌株
- 本发明公开了一种烟草普通花叶病毒生防内生菌粪产碱菌(Alcaligenes faecalis)菌株，菌株代号为L1，该菌株于2014年10月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC ...
- 战徊旭王凤龙申莉莉杨金广钱玉梅陈德鑫刘伟刘旭
- 文献传递
- 青岛烟草番茄黄化曲叶病毒的分子鉴定与全基因组序列分析被引量：1
- 2017年
- 2016年6月从青岛即墨市中国农业科学院烟草研究所试验基地采集疑似感染番茄黄化曲叶病毒的烟叶样品。提取病叶总DNA,使用双生病毒(Geminivirus)通用引物PA/PB对样品进行PCR扩增和测序,感病叶片DNA仅检测出番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,简称TYLCV);根据测定的部分序列片段,设计了1对全长序列背向引物,对其基因组全长进行克隆测定。结果显示,该病毒核酸为单链环状DNA,基因组为单一组分DNA-A,经过分子比对和系统进化树分析发现,TYLCV-SDQDJM(Gen Bank:KY640456)与山东省潍坊市番茄分离物TYLCV、山东省泰安市番茄分离物TYLCV同源性最高为99%,与已经报道的其他地区TYLCV分离物同源性均在97%以上,因此确定从青岛即墨市采集的烟草矮化病毒症状烟株是由TYLCV侵染所致;同时采集了发病植株以及周边蔬菜保护地部分蔬菜上的烟粉虱成虫进行检测,其中15.0%的烟粉虱样品检出番茄黄化曲叶病毒,因此明确了侵染该地区烟草的番茄黄化曲叶病毒是由带毒烟粉虱传播的。
- 张俊李伟李伟张静申莉莉王凤龙章松柏
- 关键词：番茄黄化曲叶病毒烟草烟粉虱分子鉴定全基因组序列分析
- 云南水稻条纹病毒病害特异性蛋白基因及基因间隔区序列分析
- 利用RT-PCR技术扩增到了云南水稻条纹病毒4个分离物的SP基因及基因间隔区,并对扩增产物进行了cDNA克隆及序列分析。结果表明所克隆的cDNA片段分别长1067-1072个核甘酸,不同云南RSV分离物间的SP基因有较高...
- 李凡杨金广谭冠林吴祖建林奇英陈海如谢联辉
- 关键词：RT-PCR
- 文献传递
- 一株大肠埃希菌烈性噬菌体ΦTRI-1的分离及特性分析
- 2015年
- 通过在E.coli菌液中加入土壤悬浮液共培养获得噬菌体,利用双层平板法反复纯化4次后得到单一清晰的噬菌斑。将单个噬菌斑加入对数早期的E.coli菌液中增殖培养后利用核酸抽提试剂盒提取总核酸,并分别用DNaseⅠ和RNase A对总核酸进行消化,利用限制性内切酶HindⅢ和EcoRⅠ对其进行酶切;增殖后的噬菌体液进行噬菌体颗粒浓缩,取浓缩液负染后置于电子显微镜下确定噬菌体的形态特征,并进行SDSPAGE电泳分析,确定其蛋白条带;同时测定其他生物学特性,包括滴度、最佳感染复数、一步生长曲线以及其对温度、pH、紫外线、氯仿的敏感性等。结果表明：分离并纯化出1株E.coli烈性噬菌体,命名为ΦTRI-1,形态特征：头部为二十面体的立体对称,直径约为60 nm,有一长尾,长约200 nm;其核酸属于双链DNA,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目（Caudovirales）,长尾噬菌体科（Siphoviridae）的烈性噬菌体。生物学特性测定结果显示ΦTRI-1对E.coli的最佳感染复数为0.1,潜伏期约为20 min,爆发期约为60 min,裂解量约为38;ΦTRI-1在40℃时活性最高,在20-70℃活性均较强,80℃时活性丧失;其酸碱耐受力较强,在偏碱环境下活性相对更高;对紫外线有一定的耐受能力;对氯仿敏感,浓度5%的氯仿即可致其失活。分离到的噬菌体属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,综合其各项生物学特性可知其潜伏期短,裂解能力强,环境适应能力强,具有很好的杀菌效果,具有开发为抗E.coli菌剂的潜力。
- 高苗杨金广孙航军刘旭刘伟王凤龙
- 关键词：ESCHERICHIACOLI噬菌体生物学特性
- 一种烟草青枯病试纸条批次质量检测装置
- 本发明公开了一种烟草青枯病试纸条批次质量检测装置，包括：试剂盒、设置在试剂盒内部的检测组件；所述检测组件包括汇流件与分流件，所述汇流件与所述分流件连通，所述汇流件端部连接有N个分流件，N个分流件并列排布，至少两个所述分流...
- 王杰王静王凤龙任广伟杨金广
- 一株烟草花叶病毒生防细菌的鉴定及代谢物活性研究被引量：10
- 2009年
- 从烟田土样中分离到1株对TMV有拮抗作用的细菌By33,通过形态观察、生理生化试验及16S rDNA同源性序列分析,鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。通过对By33代谢产物对TMV抑制作用测定发现,其代谢物质对温度敏感,80℃处理30 min,丧失大部分活性,遇酸沉淀,碱性条件下稳定,对蛋白酶不敏感。
- 申莉莉王凤龙钱玉梅杨金广陈德鑫张爱东张杨
- 关键词：解淀粉芽孢杆菌抗病毒活性
- 拮抗细菌活性蛋白诱导烟草对CMV的抗性研究被引量：1
- 2009年
- 从烟田耕作层土样中分离到对CMV有拮抗作用的细菌菌株B6,通过离子交换层析和凝胶过滤层析初步确定其活性物质是分子质量大小为40.6 kD的蛋白质。活性蛋白诱导后,对烟草叶片的病毒含量、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和多酚氧化酶(PPO)的活性变化进行研究。结果表明,拮抗细菌活性蛋白诱导后烟草叶片内CMV含量明显降低,随着诱导天数的增加病毒的含量呈由多到少再增多的变化趋势,POD,PAL和PPO等细胞防御酶的活性增强。
- 王芳王芳王凤龙申莉莉钱玉梅杨金广
- 关键词：黄瓜花叶病毒诱导抗性
- 烟草抑芽剂可调式定量施药装置
- 本实用新型提供了一种烟草抑芽剂可调式定量施药装置，包括壳体，壳体上安装有定量器，该定量器包括阀座，阀座的上部固定有阀杆，阀座的下部固定有进液管，其中进液管包括上部的粗管和下部的细管，所述粗管内设有回位弹簧，所述阀杆穿过阀...
- 王秀国李义强周杨全王凤龙任广伟杨金广陈丹尤祥伟徐光军徐金丽郑晓
- 文献传递
