杨熹
- 作品数：12 被引量：42H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖北省自然科学基金更多>>
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- 组蛋白赖氨酸残基去甲基化酶4B过表达对乳腺癌细胞MCF-7侵袭迁移能力的影响
- 2014年
- 目的 构建组蛋白赖氨酸残基去甲基化酶4B（KDM4B）过表达乳腺癌细胞株MCF-7,观察KDM4B对MCF-7侵袭迁移能力的影响,并探索其机制.方法 利用KDM4B慢病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7,筛选KDM4B过表达稳定细胞株,Western blot法检测MCF-7细胞中KDM4B基因蛋白表达;迁移实验、侵袭实验观察过表达KDM4B对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测细胞上皮-间充质转化相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达.结果 Western blot法验证过表达KDM4B的乳腺癌细胞株MCF-7构建成功;迁移实验中过表达KDM4B细胞穿膜数目[（94±8）个]较对照组[（36±6）个]明显增多,侵袭实验中过表达KDM4B细胞穿膜数目[（18±2）个]较对照组[（5±1）个]明显增多,差异均有统计学意义（P＜0.01）;过表达KDM4B细胞中E-cadherin表达量较对照组明显降低,Vimentin表达量较对照组明显增高.结论 过表达KDM4B基因可促进乳腺癌细胞株MCF-7上皮-间充质转化过程,并提高细胞迁移、侵袭能力.
- 李海杰杨熹葛宗庆兰静芩李国东付寅佳穆磊江旭林胡俊波罗学来
- 关键词：乳腺癌上皮-间充质转化迁移
- c-Myc通过缺氧诱导因子-1α调控结肠癌细胞HT-29的增殖被引量：1
- 2013年
- 目的研究癌基因c-Myc对人结肠癌细胞HT-29中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响及其对肿瘤细胞增殖的作用。方法构建高表达c-Myc的质粒pcDNA3.1-c-Myc;将构建好的pcDNA3.1-c-Myc质粒转染入HT-29细胞中,通过Western blot印迹法检测c-Myc在HT-29细胞中的表达情况。应用Real-time PCR和Western blot印迹法检测常氧和乏氧状态下HT-29细胞系中HIF-1α的mRNA和蛋白水平,同时检测HIF-1α下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA水平。共转染pcDNA3.1-c-Myc质粒和HIF-1α的siRNA入HT-29细胞中。应用噻唑蓝(MTT)法检测HT-29细胞的增殖情况。结果成功构建pcDNA3.1-c-Myc质粒;常氧、乏氧状态下转染pcDNA3.1-c-Myc质粒后,HT-29细胞系中HIF-1α的mRNA水平无变化,VEGF和eNOS的mRNA水平明显升高,HIF-1α蛋白水平明显增高。高表达c-Myc的HT-29细胞增殖能力明显增强。共转染pcDNA3.1-c-Myc质粒和HIF-1α的siRNA后,HT-29细胞的增殖能力明显降低。结论在HT-29细胞系中c-Myc通过HIF-1α调控HT-29细胞的增殖。
- 陈成王桂华杨熹李小兰陶德定龚建平胡俊波
- 关键词：结肠癌C-MYC缺氧诱导因子-1Α细胞增殖
- 磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基3在非小细胞肺癌上皮-间充质转化及迁移中的作用被引量：9
- 2015年
- 目的 观察磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基3（PIK3R3）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达,及PIK3R3对NSCLC细胞株A549和PC-9上皮-间充质转化（EMT）及迁移的影响.方法 分别提取22对NSCLC患者的肿瘤组织和癌旁组织中的总RNA及和7对标本中总蛋白,分别检测PIK3R3mRNA水平和蛋白表达;在A549和PC-9中通过感染慢病毒高表达或抑制PIK3R3后,通过Transwell迁移实验检测其对细胞迁移的影响,通过Western blot法检测上皮细胞钙黏蛋白（CDH1）、波形蛋白（VIM）、蜗牛族锌指1（SNAI1）及蜗牛族锌指2（SNAI2）等EMT相关蛋白的变化,并通过染色质免疫共沉淀法检测SNAI1及SNAI2结合于CDH1启动子的能力,通过双荧光素酶报告系统检测CDH1的转录活性变化.结果 在NSCLC临床标本中,PIK3R3在肿瘤组织中的表达水平高于癌旁组织;在A549和PC-9中高表达PIK3R3后,穿膜细胞数增加[A549 Control：（46 ±3）个,PIK3R3：（92±5）个;PC-9 Control：（25±2）个,PIK3R3：（53±3）个],细胞的迁移能力增强,同时EMT相关的上皮标志蛋白CDH1表达降低,而间质标志蛋白VIM、SNAI1及SNAI2的表达升高,SNAI1及SNAI2结合于CDH1启动子的能力分别增强9.0倍及3.8倍,同时CDH1的转录活性降低70％;而抑制HK3R3的表达后,穿膜细胞数[A549 sh-Control：（58±5）个,sh-HK3R3：（13±3）个;PC-9 sh-Control：（28±5）个,sh-PIK3R3：（10±3）个],细胞的迁移能力减弱,伴随CDH1表达增高,而VIM、SNAI1及SNAI2的表达降低,同时SNAI1及SNAI2结合于CDH1启动子的能力分别降低70％,相应CDH1的转录活性增高3.6倍.结论 在NSCLC标本中PIK3R3的表达增高,在NSCLC细胞株中高表达PIK3R3可诱使其发生EMT,并促进其迁移能力,而抑制PIK3R3的表达可逆转上述过程.
- 杨熹胡福清李海杰兰静芩罗学来龚建平胡俊波
- 关键词：非小细胞肺癌迁移上皮-间充质转化
- 增殖细胞核抗原与p55PIK结合调控乳腺癌细胞MCF7增殖的研究被引量：3
- 2015年
- 目的观察p55PIK对乳腺癌细胞MCF7细胞周期及增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法通过转染质粒或特异性si RNA,在乳腺癌MCF7细胞中过表达或低表达p55PIK,继而通过免疫印迹法检测p55PIK的表达,通过Brd U/PI双掺入法测定细胞DNA合成及细胞周期,并用CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒检测细胞增殖,最后通过免疫共沉淀技术检测明确p55PIK是否可以与增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)相结合。结果 p55PIK过表达质粒及si RNA可分别使MCF7细胞中p55PIK成功过表达或低表达,而且过表达p55PIK可加快MCF7细胞的DNA合成,p55PIK组[DNA合成比率为(56.33±1.63)%]与Vector组[DNA合成比率为(26.27±1.85)%]比较差异有统计学意义(P<0.01),过表达p55PIK促进MCF7细胞从G0/G1期进入S期,从而调节其增殖,p55PIK组[OD450nm:(1.46±0.04)]与Vector组[OD450nm:(1.16±0.16)]比较差异有统计学意义(P<0.05),而低表达p55PIK可抑制上述过程。免疫共沉淀证实p55PIK与PCNA之间可以相结合。结论 p55PIK可促进乳腺癌细胞MCF7细胞周期进程及增殖,而且p55PIK可与PCNA相结合。
- 杨熹李海杰李国东傅寅佳罗学来龚建平胡俊波
- 关键词：细胞周期增殖乳腺癌增殖细胞核抗原
- 异鼠李素抑制耐吉非替尼人肺癌细胞PC9增殖的研究被引量：4
- 2012年
- 目的检测异鼠李素对耐吉非替尼的人肺癌细胞PC9增殖的影响。方法通过持续在人肺癌细胞系PC9的培养条件中加入吉非替尼培养直到PC9细胞出现耐药情况,即得到耐药细胞株(PC9-IR)。再将PC9-IR用不同浓度的异鼠李素处理,分别在24,48和72 h后用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的生长情况,以正常人外周血单个核细胞(PBMNCs)作为对照组。同时采用蛋白质印迹法检测药物作用之后信号通路的变化,再用克隆分析检测isorhamentin对细胞克隆形成的影响。结果 MTT证实异鼠李素对PC9-IR的生长有明显的抑制作用,24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为212,98,64μmol.L-1,而对PBMNCs72 h的IC50为204μmol.L-1,蛋白质印迹法证实isorhamnetin可以抑制Akt473位的磷酸化,克隆分析证实40μmol.L-1异鼠李素可明显抑制PC9-IR的克隆形成。结论异鼠李素对耐药的人肺癌细胞系(PC9-IR)的生长有抑制作用,可能因为抑制Akt473位的磷酸化水平。
- 李川杨熹胡俊波廖家智
- 关键词：异鼠李素肺癌细胞吉非替尼耐药
- 脂多糖诱导小鼠肝损伤模型及致死模型的建立被引量：12
- 2012年
- 目的建立脂多糖（内毒素，LPS）单独诱导小鼠急性肝损伤模型及致死模型。方法分别以生理盐水、LPS10、30、50、80mg／kg腹腔注射小鼠，筛选LPS诱导小鼠急性肝损伤和致死剂量。分别以生理盐水、LPS30、50mg／kg腹腔注射小鼠，绘制各组小鼠的生存曲线，苏木素．伊红（HE）染色观察各组肝组织损伤情况，免疫组织化学染色检测肝组织核因子（NF）一KBp65蛋白的表达和核转位变化，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）-α含量。结果对照组小鼠无死亡和肝组织损伤，肝组织内NF—KBp65蛋白表达水平低，无核转位现象，血清中TNF—oL含量低。腹腔注射LPS30mg／kg组小鼠无死亡，出现肝组织损伤，肝组织内NF．KBp65蛋白表达水平增加、出现核转位，血清中TNF—α含量升高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。腹腔注射LPS50mg／kg组小鼠存活不超过120h，肝组织严重损伤，肝组织内NF—icBp65蛋白表达水平以及核转位显著增加，血清中TNF-α含量显著增高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论成功建立脂多糖诱导肝损伤动物模型和致死模型，为在体内进一步研究p55PIK对LPS—NF—KB通路奠定基础。
- 刘韦成罗学来李兆明邓豫曹小年杨熹李川金源李小兰陶德定胡俊波王晶
- 关键词：急性肝损伤动物脂多糖
- 姜黄素调控乳腺癌细胞增殖与转移机制研究被引量：6
- 2013年
- 目的研究姜黄素对人乳腺癌细胞MDA-MB-453中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响及其对肿瘤细胞增殖和转移的作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法和细胞计数观察姜黄素抑制MDA-MB-453细胞增生作用;采用transwell侵袭小室测定姜黄素对MDA-MB-453转移的影响;采用Real-time PCR和Western blot印迹法检测常氧和乏氧状态下姜黄素对MDA-MB-453细胞系中HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平的影响,同时采用Real-time PCR和ELISA法检测姜黄素对HIF-1α下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平和蛋白表达水平的影响。结果姜黄素对MDA-MB-453细胞体外生长和转移具有抑制作用;常氧、乏氧状态下加入姜黄素后,MDA-MB-453细胞系中HIF-1α的mRNA水平无变化,但蛋白水平明显降低,VEGF mRNA水平和蛋白水平均明显降低。结论姜黄素通过HIF-1α调控MDA-MB-453细胞系增殖和转移。
- 蔡少鑫陈成杨熹李小兰李兆明胡俊波
- 关键词：姜黄素乳腺癌缺氧诱导因子-1Α细胞增殖细胞转移
- TAT-N24穿膜融合多肽对白血病细胞系HL60分化的影响
- 2013年
- 目的:观察TAT-N24穿膜融合多肽对急性髓系白血病细胞株HL60分化的影响。方法:TAT-N24作用于HL60细胞后,采用流式细胞术检测白血病分化指标CD11b及CD14,并观察HL60细胞经TAT-N24处理后的形态学变化,及BrdU/PI双掺入法测定DNA的合成。结果:HL60细胞在TAT-N24处理后,CD11b和CD14表达增高,且增高的趋势呈现TAT-N24浓度依赖性,同时形态学观察呈分化趋势,而且TAT-N24可以协同全反式维甲酸,增强其促进分化的作用。与此同时,BrdU/PI双掺入法显示TAT-N24使HL60细胞的增殖发生抑制。结论:TAT-N24穿膜融合多肽可促进急性髓系白血病细胞株HL60的分化,抑制其增殖,联合应用TAT-N24和全反式维甲酸具有明显的协同作用;TAT-N24有望被开发为有效的白血病分化治疗药物。
- 杨熹王桂华曹小年李国东傅寅佳胡俊波邓豫
- 关键词：白血病HL60细胞株分化
- p53通过调控miR-148b抑制肺癌细胞PC-9的增殖被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨p53在肺癌PC-9细胞中对微小RNA-148b(mi R-148b)表达的影响、相应分子机制及对细胞增殖能力的影响。方法:以肺癌PC-9细胞作为研究对象,瞬时转染p53真核表达载体,建立高表达p53的实验模型。通过荧光定量PCR检测p53在PC-9细胞中对mi R-148b表达的影响。通过使用mi R-148b启动子荧光素酶报告基因表达载体,检测p53对mi R-148b启动子转录活性的影响。通过转染mi R-148b特异性抑制物(Inh-148b)低表达mi R-148b,使用CCK8法检测mi R-148b对p53在肺癌细胞增殖调控过程中的作用。结果:高表达p53可在肺癌PC-9细胞中促进mi R-148b的表达;高表达p53可增强mi R-148b启动子的活性;低表达mi R-148b可减弱p53对肺癌PC-9细胞增殖的抑制作用。结论:p53对肺癌细胞PC-9增殖的抑制作用部分依赖于mi R-148b。
- 傅寅佳杨熹来森艳曹小年王桂华胡俊波李襄
- 关键词：肺肿瘤P53细胞增殖
- p53通过调控p55PIK抑制肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖被引量：3
- 2015年
- 目的探讨p55PIK对肝癌SMMC-7721细胞增殖能力的影响,及p55PIK上游可能的调控机制。方法以肝癌SMMC-7721细胞为研究对象,通过脂质体转染p55PIK特异性小干扰RNA(siRNA)si-p55构建p55PIK低表达的实验模型。通过CCK8检测p55PIK对肝癌SMMC-7721细胞增殖能力的影响。通过流式细胞术检测p55PIK对细胞周期进程的影响。转染针对p53的小干扰RNA(siRNA)si-p53低表达p53,采用Western blot检测p53对p55PIK表达的影响,并通过CCK8法检测p53对p55PIK在肝癌细胞增殖调控中的作用。结果低表达p55PIK可导致肝癌SMMC-7721细胞的增殖能力降低[转染后96h,si-NC组、si-p55组的A值分别为(1.325±0.050)、(1.183±0.019)],细胞周期G0/G1期阻滞[si-NC组:(39.07±2.02)%;si-p55组:(49.66±1.05)%]。低表达p53可在肝癌SMMC-7721细胞中上调p55PIK的表达。p55PIK可部分拮抗p53对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用。结论p53可部分通过调控p55PIK抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖。
- 傅寅佳杨熹曹小年来森艳王桂华胡俊波李襄
- 关键词：肝癌P53细胞增殖
