杨滔
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅医学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结构域Ⅰ缺失的丙型肝炎病毒5′NCR调控荧光素酶基因的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:分析丙型肝炎病毒(HCV)5′端非编码区(NCR)的结构域Ⅰ序列在其翻译启动活性中的作用。方法:以质粒pCMVN CRluc为模板,PCR扩增分别得到缺失5′端20nt和43nt的HCV 5′NCR片段,并分别替换pCMVNCRluc中的完整HCV 5′NCR,构建结构域Ⅰ缺失的HCV 5′NCR调控萤火虫荧光素酶(luc)基因表达的真核表达质粒(pCN1-d1、pCNl-d2)。以脂质体方法转染人肝癌细胞株HepG2,用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶相对于内参考的海肾荧光素酶表达活性,同时采用RT-PCR方法检测转染后细胞中萤火虫荧光素酶基因的相对表达水平。结果:酶切和测序结果表明,各重组质粒构建成功。各重组质粒转染细胞后luc mRNA的相对表达水平与pCMVNRluc相比差异无显著性(P＞0．05);pCNl-dl、pCNl-d2表达的荧光素酶活性与pCMVNCRluc差异无显著性(P＞0．05)。结论:HCV 5′NCR的5′端20nt和43nt序列缺失不影响它的翻译启动活性。
- 杨滔赵俊琴刘水平李洪涛李建华
- 关键词：丙型肝炎病毒荧光素酶
- BrdU标记的人巨细胞病毒感染HEL细胞的方法学研究
- 2006年
- 目的以标记在人巨细胞病毒(HCMV)DNA上的BrdU为示踪剂,研究病毒在受染HEL细胞中的移动过程;同时结合病毒蛋白pp65的表达探讨病毒复制、增殖的过程。方法以BrdU标记的HCMV(MOI=4)感染HEL细胞,分别选取感染后2h、4h、6h、24h及48h 5个时间点的细胞,用抗BrdU单克隆抗体,研究病毒核酸的胞内定位;同时用抗HCMV蛋白pp65的单克隆抗体检测此蛋白的表达及分布。结果免疫细胞荧光染色结果提示:在感染5个时间点,病毒DNA依次位于胞质、胞核及同时位于胞核和胞质;蛋白pp65的表达及分布规律为:胞内无表达、胞核分布、胞核与胞质同时分布及巨细胞和融合细胞内分布。结论以BrdU为标记物标记双链DNA病毒核酸不仅为研究HCMV．的胞内移动提供了良好的模型,同时也为其他病毒的研究提供了良好的工具;本实验结合HCMV蛋白pp65的表达和分布直观地反应了HCMV感染HEL细胞并在其中复制、增殖的过程。
- 傅鹰陈利玉罗敏华李建华杨滔
- 关键词：人巨细胞病毒BRDUHEL细胞PP65
- 丙型肝炎病毒5’端非编码区结构域Ⅱ在其翻译启动活性中的作用被引量：1
- 2009年
- 目的分析丙型肝炎病毒（HCV）5’端非编码区（NCR）的结构域Ⅱ序列（nt44—118）在其翻译启动活性中的作用。方法用PCR扩增技术获得缺失5’端118nt的截短型HCV5’NCR片段，并以之替换萤火虫荧光素酶（Fluc）真核表达质粒pCMVNCRluc中的完整HCV5’NCR，构建截短型HCV5’NCR调控Fluc基因表达的真核表达质粒pCNl-d3。将pCNl-d3、pCMVNCRluc和pCMVNCRluc缺失HCV5’NCRntl-43后的重组质粒pCNl-d2以脂质体方法分别转染人肝癌细胞株HepG2，用双荧光素酶报告基因检测系统检测Fluc相对表达活性，RT-PCR检测FlucmRNA的相对表达水平。结果酶切和测序结果表明，重组质粒构建成功。各质粒转染细胞后FlucmRNA的相对表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）；pCNl—d2表达的荧光素酶活性与pCMVNCRluc差异无统计学意义（P〉0．05），pCN1-d3的Fluc活性显著低于pCMVNCRluc（P〈0．01）。结论HCV5’NCR的结构域Ⅱ（nt44—118）含有其发挥翻译启动功能的重要序列。
- 刘水平赵俊琴李洪涛杨滔
- 关键词：肝炎病毒荧光素酶
- HCMV IE1和pp65在人神经胶质瘤U_(251)细胞中的时序表达
- 2007年
- 目的:研究人神经胶质瘤U251细胞对人巨细病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的容许性,并探讨病毒蛋白IE1及pp65的时序表达特点。方法:HCMV感染U251细胞,以透射电镜观察U251细胞的形态学改变,以PCR方法检测HCMV核酸,于不同的时间点分别用抗蛋白IE1及蛋白pp65单克隆抗体进行免疫细胞化学染色,检测IE1及pp65的表达水平。结果:受染的U251细胞出现了明显的形态学改变,并用PCR方法检测到了HCMV核酸。免疫细胞化学染色表明,蛋白IE1在感染后30min～2h无表达,4h开始表达,14h达高峰,随后下降;蛋白pp65在感染后1h为入侵型pp65,4～96h一直呈低水平表达,至120h表达急剧升高。结论:U251细胞是HCMV的容许细胞,HCMV在其中的表达具有时序性,但是其时序表达较在人成纤维细胞中延迟。
- 李建华傅鹰陈利玉戴橄罗敏华杨滔
- 关键词：U251细胞PP65
